Студопедия Главная Случайная страница Задать вопрос

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Ход работы. А. Приготовление рабочих растворов





А. Приготовление рабочих растворов. 1. Таблетку «ферменты-хромогены» растворить в 100 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивая, не встряхивая (!). Допускается наличие мелких нерастворимых частиц. 2. Таблетку антикоагулянта растворить в 50 мл дистиллированной воды.

Б. Приготовления калибровочной пробы. В пробирку внести 1 часть калибратора и 9 частей раствора антикоагулянта, тщательно перемешать. Полученную калибровочную смесь использовать для анализа.

В. Определение содержания глюкозы в плазме крови. Для получения плазмы крови в центрифужную пробирку внести 0,9 мл раствора антикоагулянта, добавить 0,1 мл крови (или 0,45 мл и 0,05 мл соответственно), тщательно перемешать и центрифугировать при 1000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость перенести в чистую пробирку и использовать для анализа.

Для проведенения анализа на КФК в пробирки внести 2,0 мл рабочего раствора и добавить по 0,2 мл надосадочной жидкости, калибровочной смеси и дистиллированной воды для кюветы с длиной оптического пути 10мм, и по 0,4 мл – для кюветы с длиной оптического пути 5мм.

При использовании FP-901 в кюветы внести 0,7 мл рабочего раствора и 0,1 мл надосадочной жидкости.

Г. Определение содержания глюкозы в сыворотке крови. При использовании КФК внести в пробирки образцы сыворотки крови и реагенты по схеме:

 

Для кювет с длиной оптического пути 10мм с длиной оптического пути 5мм
Реагенты Опытная проба, мл Калибр. проба, мл Холостая проба, мл Опытная проба, мл Калибр. проба, мл Холостая проба, мл
Рабочий раствор 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0
Сыворотка крови 0,02 0,04
Калибратор 0,02 0,04
Вода дистил. 0,02 0,04

 

Пробы тщательно перемешать и инкубировать в течение 15 мин при +370С (водный термостат) или в течение 25 мин при 18-250С («на столе»). Через 5-10 мин после начала инкубации пробирки с пробами интенсивно встряхнуть вручную.

После инкубации измерить величину оптической плотности опытной и калибровочной проб против холостой пробы в кюветах с длиной оптического пути 5 или 10мм при длине волны 500 (490-540)нм. Окраска проб сохраняет стабильность в течение более 4-х часов после окончания инкубации.

Концентрации глюкозы в пробах провести по формуле:

где С – концентрация глюкозы, моль/л; ЕО – оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плот.; ЕСТ – оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плот.; 10 – концентрация глюкозы в калибраторе, моль/л.

 






Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 268. Нарушение авторских прав

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2017 год . (0.007 сек.) русская версия | украинская версия