Студопедия — Лабораторная работа № 36
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Лабораторная работа № 36






Определение гликогена по Гуду

 

Цель работы: определение содержания гликогена в мясе.

Оборудование, реактивы и материалы: аналитические и технические весы, водяная баня, термометр, центрифуга, центрифужные пробирки, пробирки, капельницы, колбы Эрленмейера вместимостью 100 см3, цилиндры вместимостью 10 см3, пипетки вместимостью 2 и 5 см3, воронки, бюретка; раствор гидроксида калия KOH с массовой долей 60 %, раствор этанола с массовой долей 95 %, раствор соляной кислоты с концентрацией 0, 6 моль/дм3, раствор соляной кислоты с концентрацией 0, 1 моль/дм3, раствор серной кислоты с концентрацией 5 моль/дм3, раствор гипосульфита натрия 0, 005 моль/дм3, раствор растворимого крахмала с массовой долей 2 %, полный медный реактив, раствор фенолфталеина с массовой долей 1 %; мясо.

Теоретические сведения

 

Гликоген - животный крахмал, по своему строению близок к амилопектину:

СН2ОН СН2ОН

О
О
 
 

α -(1→ 6)- глико-зидная связь
 
ОН
ОН

…О О О

 
 
 
 
 
 
ОН ОН

СН2ОН СН2ОН СН2ОН СН2

 
О
 
О
 
О
 
О

 
ОН
ОН
ОН
ОН

НО О О О

ОН ОН ОН ОН

 
 
α -(1→ 4)- гликозидная связь

 


Гликоген содержится в органах животных и представляет собой резервное вещество, необходимое для энергетического обмена организма. Наиболее богаты гликогеном печень и мышцы.

 

Ход работы

 

Гликоген получают путем обработки животной ткани раствором КОН с массовой долей 60 % при 100 0С с последующим осаждением этанолом. Осадок подвергают гидролизу соляной кислотой и в гидролизате определяют образующийся сахар.

Отвешивают 1 г мяса и помещают в 2 см3 раствора КОН с массовой долей 60 % в пробирке. Смесь нагревают на водяной бане при температуре кипения до полного растворения ткани (10 – 30 мин), после чего осаждают гликоген, прибавляя к еще горячей смеси 3 см3 этанола с массовой долей 95 %. Смесь подогревают до начала кипения, затем охлаждают до комнатной температуры (20±5 °С) и осадок гликогена отделяют центрифугированием. Отстой с осадка осторожно сливают, а пробирку с осадком нагревают 5 мин на водяной бане (для удаления спирта). К осадку приливают 3 см3 0, 6 моль/дм3 НСl, осадок переносят в большую пробирку. Затем в пробирку прибавляют еще 2 см3 0, 6 моль/дм3 HCl и нагревают раствор в водяной бане при температуре кипения. Гидролиз гликогена ведут в течение 2 ч. По окончании гидролиза гидролизат нейтрализуют 0, 1 моль/дм3 HCl в присутствии фенолфталеина (1–2 капли) до слабо-розового цвета. Объем гидролизата доводят водой до 10 см3 и содержимое пробирки перемешивают.

Вносят в колбы по 5 см3 гидролизата и приливают по 5 см3 полного медного реактива. Колбы накрывают воронками и нагревают 15 мин на водяной бане при температуре кипения, затем охлаждают до 35 0С, прибавляют 1 см3 5 моль/дм3 H2SO4 (при встряхивании) и спустя 2 мин титруют 0, 005 моль/дм3 раствором гипосульфита натрия. Титрование ведут в присутствии крахмала до исчезновения синего цвета. Одновременно ведут контрольное определение в смеси из 5 см3 0, 6 моль/дм3 HCl.

Содержание глюкозы находят по израсходованному количеству гипосульфита

 

А = (VV 1) b·0, 45·0, 927,

 

где А – содержание гликогена в 1 г навески, мг;

V и V 1– объем гипосульфита, пошедшего на титрование в

контрольном и опытном растворах, см3;

b – разведение анализируемой вытяжки;

0, 45 – количество глюкозы, эквивалентное 1 см3 0, 005 моль/дм3;

раствора гипосульфита;

0, 927 – коэффициент пересчета глюкозы в гликоген.

 

Оформление результатов

Полученные данные вносят в таблицу.

 

Пробы Объем гипосульфита, пошедший на титрование Содержание гликогена, мг
контроль    
опыт    

 

 

Контрольные вопросы и задания

1. В чем сходство и различие в структуре крахмала и гликогена? Где содержится гликоген?

2. В чем суть метода определения содержания гликогена в мышцах животных?

3. Перечислите способы гидролиза гликогена. Какие ферменты участвуют в процессе гидролиза гликогена?

 







Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 772. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Важнейшие способы обработки и анализа рядов динамики Не во всех случаях эмпирические данные рядов динамики позволяют определить тенденцию изменения явления во времени...

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ МЕХАНИКА Статика является частью теоретической механики, изучающей условия, при ко­торых тело находится под действием заданной системы сил...

Теория усилителей. Схема Основная масса современных аналоговых и аналого-цифровых электронных устройств выполняется на специализированных микросхемах...

Логические цифровые микросхемы Более сложные элементы цифровой схемотехники (триггеры, мультиплексоры, декодеры и т.д.) не имеют...

Шов первичный, первично отсроченный, вторичный (показания) В зависимости от времени и условий наложения выделяют швы: 1) первичные...

Предпосылки, условия и движущие силы психического развития Предпосылки –это факторы. Факторы психического развития –это ведущие детерминанты развития чел. К ним относят: среду...

Анализ микросреды предприятия Анализ микросреды направлен на анализ состояния тех со­ставляющих внешней среды, с которыми предприятие нахо­дится в непосредственном взаимодействии...

Словарная работа в детском саду Словарная работа в детском саду — это планомерное расширение активного словаря детей за счет незнакомых или трудных слов, которое идет одновременно с ознакомлением с окружающей действительностью, воспитанием правильного отношения к окружающему...

Правила наложения мягкой бинтовой повязки 1. Во время наложения повязки больному (раненому) следует придать удобное положение: он должен удобно сидеть или лежать...

ТЕХНИКА ПОСЕВА, МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР И КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА МИКРООРГАНИЗМОВ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА БАКТЕРИЙ Цель занятия. Освоить технику посева микроорганизмов на плотные и жидкие питательные среды и методы выделения чис­тых бактериальных культур. Ознакомить студентов с основными культуральными характеристиками микроорганизмов и методами определения...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.009 сек.) русская версия | украинская версия