Клинико-диагностическое значение. Снижение концентрации гемоглобина наблюдается при анемиях – железодефицитной (до 60 г/л), геморрагической

Снижение концентрации гемоглобина наблюдается при анемиях – железодефицитной (до 60 г/л), геморрагической, гипопластической, гемолитической, В₁₂-дефицитной.

Увеличение концентрации гемоглобина наблюдается при миелопролиферативных заболеваниях – эритремии (до 210 г/л), симптоматических эритроцитозах – пролиферации элементов эритропоэза, при обезвоживании.

Лабораторная работа 2

Определение концентрации общего билирубина
и его фракций в сыворотке крови

Принцип

Взаимодействие сульфаниловой кислоты с азотистым натрием дает диазофенилсульфоновую кислоту, которая с билирубином образует окрашенные азопигменты (диазореакция Эрлиха). Связанный (прямой) билирубин реагирует быстро, поэтому о его концентрации судят по первоначальной интенсивности окраски. Несвязанный билирубин вступает в реакцию только после добавления акселератора (кофеин). Последний освобождает билирубин из комплекса с белками и тем самым ускоряет реакцию азосочетания.

Материал исследования

Сыворотка крови.

Реактивы

1) Сульфаниловая кислота в HCl (реагент 1), 2) натрий азотисто-кислый NaNO₂ (реагент 2), 3) кофеиновый реактив (реагент 3), 4) буферный раствор (реагент 4), 5) 0, 9% р-р NaCl, 6) раствор альбумина, 20 г/л.

Стандартный раствор билирубина, 5 мкмоль/л.

Проведение анализа

	Общий билирубин, мл	Прямой билирубин, мл	Стандарт, мл	Контроль, мл
Сульфаниловая кислота (реагент 1)	0, 2	0, 2	0, 2	––
NaNO2 (реагент 2)	1 капля	1 капля	1 капля	––
Кофеиновый реактив (реагент 3)	1, 0	––	1, 0	1, 0
NaCl	––	1, 0	––	0, 2
Сыворотка крови	0, 2	0, 2	––	0, 2
Стандартный р-р билирубина	––	––	0, 2	––
		Перемешивают и оставляют на 10 минут
Буферный раствор (реагент 4)	1, 0	1, 0	1, 0	1, 0
		Измеряют оптическую плотность пробы на прямой билирубин против контроля при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр). Еще через 10 минут измеряют оптическую плотность пробы на общий билирубин против контроля при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр).

Расчет

По формуле рассчитывают концентрацию общего и прямого билирубина, концентрацию непрямого билирубина находят как разность между концентрацией общего и прямого билирубина_.

Концентрация билирубина, мкмоль/л = , где

Е_оп и Е_ст – оптическая плотность опытной и стандартной проб,
С_ст – концентрация стандартного раствора.