Студопедия Главная Случайная страница Задать вопрос

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Тема 19




РЕАКЦИЯ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ (РН)

Цель занятия. Ознакомить студентов с реакцией нейтрализа­ции (РН). Освоить технику постановки РН для обнаружения и идентификации бактериальных токсинов.

Оборудование и материалы. Бульонные токсинсодержащие культуры С. perfringens, центрифуга, центрифужные пробирки, стерильные бактериологические пробирки, стерильный физио­логический раствор, воронки, ватно-марлевые фильтры, стери­лизатор со шприцами и инъекционными иглами, диагностичес­кие антитоксические сыворотки С. perfringens, белые мыши мас­сой 16...18 г.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Реакцию нейтрализации относят к иммунологическим реак­циям, в которых, например, учитывают потерю биологической активности антигена при взаимодействии с гомологичными ан­тителами. Если антигеном служит бактериальный экзотоксин, то он теряет свои токсические свойства (нейтрализуется), вирус как антиген теряет в этом случае инфекционное действие и т. д.

В бактериологических диагностических исследованиях наибо­лее часто используют РН как метод обнаружения и идентифика­ции бактериальных токсинов.

РН бактериального экзотоксина.Используют при диагностике таких бактериозов, как ботулизм, инфекционная энтеротоксемия овец и др., возбудители которых (С. botulinum, С.perfringens) синте­зируют сильный экзотоксин. Для постановки диагноза на эти бак­териальные инфекции достаточно обнаружить экзотоксин в РН. Рассмотрим технику постановки РН на примере обнаружения токсинов С. perfringens. Для постановки РН необходимы диагнос­тические иммунные сыворотки, содержащие антитела к опреде­ленному бактериальному токсину, — антитоксические сыворотки, Такие диагностические сыворотки получают путем гипериммунизации животных-продуцентов анатоксинами, токсинами инактивированными (формальдегидом), но сохранившими свои иммуногенные свойства. С. perfringens продуцирует шесть типов экзоток­синов, различающихся по антигенной структуре (А, В, С, D, Е, F).

Исследуемый материал, в котором предположительно нахо­дится токсин (содержимое кишечника), разводят физиологичес­ким раствором в соотношении 1:1, экстрагируют при комнатной температуре 1 ч, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и цен­трифугируют при 5000 мин-1 20 мин. Надосадочную жидкость вводят внутрибрюшинно или внутривенно по 0,5 мл двум белым мышам массой 16... 18 г. При наличии токсина в исследуемом ма­териале животные погибают в течение 12 ч. После обнаружения токсина его идентифицируют в реакции нейтрализации.

Схема постановки РН на примере определения типа токсина С. perfringens показана в таблице 14. Диагностические антитокси­ческие сыворотки (типов А, С, D, Е) предварительно разводят стерильным физиологическим раствором до концентрации 10 ед/мл.

Содержимое каждой пробирки после инкубирования вводят внутривенно или внутрибрюшинно по 0,5 мл двум белым мы­шам. Наблюдение за животными ведут в течение 48 ч. Если ток­син принадлежит С. perfringens, то мыши, получившие смесь ток­сина с гомологичной антитоксической сывороткой, остаются живы (табл. 15).

Другие варианты РН. При помощи нейтрализации антителами гемолизинов, продуцируемых различными штаммами бактерий одного вида, можно подтвердить антигенную однородность ге­молизина или доказать, что данный вид бактерий синтезирует несколько антигенных вариантов гемолизина.

В вирусологических исследованиях широко используют реак­цию нейтрализации инфекционного действия вируса при помо­щи гомологичной иммунной сыворотки. Факт нейтрализации вируса антителами устанавливают, заражая различные чувстви­тельные биологические объекты: лабораторных животных, кури­ные эмбрионы, культуры клеток. Технические детали РН в виру­сологической практике подробно изложены в соответствующем курсе.

ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

Освоить технику постановки реакции нейтрализации по выяв­лению и идентификации токсинов С. perfringens.

Контрольные вопросы

1.В чем сущность реакции нейтрализации?

2.Какие применяют варианты реакции нейтрализации?

3.Каким образом устанавливают тип бактериального токсина в РН?

 






Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 154. Нарушение авторских прав

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2017 год . (0.005 сек.) русская версия | украинская версия