А н я т и е 28. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ГЕМОГЛОБИНА, ГЕМАТОКРИТНОГО И ЦВЕТОВОГО ПОКАЗАТЕЛЯ

Цель занятия. Освоить методику определения количества гемоглобина в кро­ви, гематокритного и цветового показателя, приобрести навыки диагностической оценки результатов анализа.

Объекты исследования и оборудование. Кровь стабилизированная.

0, 1 н. раствор соляной кислоты, трансформирующий раствор (ацетонциангидрид 0, 5 мл, калий железосинеродистый 200 мг, гидрокарбонат натрия 1 г, дистиллирован­ная вода до 1л), стандартный раствор гемиглобинцианида «Реанал» (концентрация 59, 75мг на 100мл, что соответствует 15 г гемоглобина на 100мл крови, или 150г/л).

Гемометр, фотоэлектроколориметр, центрифуга ЦЛК-1, мерные колбы на 1 л, градуированные пипетки на 5 мл, капиллярные пипетки на 0, 02 мл, микрокапил­ляры для определения гематокритного показателя, пробирки.

Определение гемоглобина в крови. Концентрацию гемоглобина в крови определяют гематиновым и гемиглобинцианидным методом.

Гематиновый метод (по Сали). В градуированную пробирку гемо­метра ГС-3 (рис. 7.3) вносят глазной пипеткой до метки «2» 0, 1 н. ра­створ соляной кислоты. Капиллярной пипеткой набирают 0, 02 мл крови, кончик пипетки снаружи вытирают ватой и, не вызывая обра­зования пены, кровь выдувают на дно пробирки. Чтобы удалить ос­татки крови, пипетку 2...3 раза промывают раствором соляной кис­лоты. Содержимое пробирки перемешивают и выдерживают 5 мин (при исследовании крови кур — 15 мин). Смесь за это время приобре­тает коричневую окраску вследствие образования хлоргематина. До­бавляют по каплям дистиллированную воду, помешивая стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет жидкости в пробирке не станет таким же, как цвет стандарта. Количество гемоглобина (г/100 мл крови) ус­танавливают по делению шкалы, с которым совпадает уровень жид­кости. Для пересчета в г/л умножают результат на коэффициент 10.

Гемиглобинцианидный метод (по М. Л. Пименовой и Г. В. Дервизу). При определении содержания гемоглобина этим методом 0, 02 мл крови вносят в 5 мл трансформирующего раствора (разводят в 251 раз), хорошо перемешивают, выдерживают 10 мин. Колоримет-рируют при длине волны 500...5б0нм (зеленый светофильтр) в кю­вете, толщина рабочей грани которой со­ставляет 10 мм; в качестве «холостой» про­бы используют трансформирующий раст­вор или воду, стандартной — стандартный раствор гемиглобинцианида, который ис­следуют так же, как и опытную пробу.

Концентрацию гемоглобина определя­ют по формуле

НЬ = Е_0ЛСК- 0, 001/£ _ст = Е_оп ■ 15/Е_СТ,

где НЬ— концентрация гемоглобина, г на 100мл; Е_оп — оптическая плотность опытной пробы; Е^ — оптичес­кая плотность стандартной пробы; С—концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе (59, 75 мг на 100мл); А" —коэффициент разведения крови (251); 0, 001 — коэффициент для пересчета мг в г.

Рис. 7.3. Схема гемометра ГС-3:

5 6 5

1 — матовое стекло; 2 — две запаянные пробирки со стан­дартной жидкостью; 3— матовое стекло; 4 — корпус-стойка; 5 — два винта; 6 — крышка

13 Васильев М. Ф. и др.

Для пересчета в г/л вычис­ленную по формуле концен­трацию гемоглобина умножают на коэффициент 10.

По стандартному раствору гемиглобинцианида можно по­строить калибровочный график и по нему рассчитать концентра­цию гемоглобина в крови.

Гемоглобин можно опреде­лять и с помощью прибора — гемоглобинометра: в этом слу­чае результат (г/л) высвечива­ется на табло (рис. 7.4).

Рис. 7.4. Гемоглобинометр ГФ-Ц-04: 1 — табло для высвечивания цифр; 2 — место для кюветы (под крышкой); 3 — тумблер включения в сеть

У здоровых животных со­держание гемоглобина крови составляет (г/л): у крупного рогатого скота 90... 130; овец 90...133; коз 100...150; лошадей 80...140; свиней 90...ПО; собак 110...170; кур 80...120.

Увеличение концентрации гемоглобина в крови — гиперхроме-мию — наблюдают при поносах, рвоте, потливости, образовании экссудатов и транссудатов, миоглобинурии, эмфиземе легких; уменьшение содержания — олигохромемию — при анемиях раз­личной этиологии.

Определение гематокритного показателя. Гематокритный пока­затель дает представление о соотношении объемов плазмы и фор­менных элементов крови (в первую очередь — эритроцитов).

Относительный объем форменных элементов крови — гемато-крит — определяют в микроцентрифуге МЦГ-6 или ЦЛК-1. Стек­лянный капилляр промывают раствором гепарина или оксалата натрия, высушивают и заполняют кровью на 7/8 длины; с одного конца закупоривают пластилином или специальной пастой. Ка­пилляры помещают в ротор центрифуги таким образом, чтобы за­купоренные концы упирались в резиновую прокладку. Центрифу­гируют при 8000 мин^-1 5 мин. Гематокритную величину определя­ют по специальной шкале, прилагаемой к центрифуге.

У здоровых животных значения гематокритного показателя на­ходятся в пределах (л/л): у крупного рогатого скота 0, 34...0, 40; овец 0, 25...0, 45; лошадей 0, 35...0, 45; свиней 0, 39...0, 43; собак 0, 42...0, 48; кур 0, 38...0, 42.

Уменьшение значения показателя наблюдают при анемиях (же­лезо-, В₁₂-дефицитной и особенно при инфекционной анемии ло­шадей), гидремии, гемоспоридиозах, лептоспирозе и т.д.

Высокий показатель отмечают при врожденных пороках серд­ца, сопровождающихся цианозом, при шоковых состояниях, ожо­гах, недостаточности коры надпочечников, полицитемии, дегид­ратации крови (токсикоз, понос, рвота) и т. д.

Показатель гематокрита используют при определении объема отдельного эритроцита, отношения гемоглобина к объему клетки, среднего содержания гемоглобина в одном эритроците и др.

Определение цветового показателя. Цветовой показатель отра­жает степень насыщенности эритроцита гемоглобином; его опре­деляют по формуле

ЦП= ИЪ₂Е_ХІНЪ_ХЕ_Ъ

где ЦП— цветовой показатель; НЪ\ — средняя концентрация гемоглобина в нор­ме, г/л; НЬ₂ — концентрация гемоглобина у исследуемого животного, г/л; Е_х — средняя концентрация эритроцитов в норме (10¹²/л); ^ — концентрация эритро­цитов у исследуемого животного (10¹²/л).

Значения цветового показателя крови у здоровых животных следующие: у крупного рогатого скота 0, 7...1, 1; овец 0, 5...0, 7; коз 0, 44...0, 49; лошадей 0, 8...1, 2; свиней 0, 8...1, 0; кур 2...3.

Отклонение показателя на 15 % и более от нормы свидетель­ствует о нарушении состава крови, что учитывают при дифферен­цировании анемии.

Увеличение значения показателя — гиперхромемию — наблюдают при гемолитических анемиях; уменьшение — гипохромемия — ха­рактерный признак постгеморрагических анемий.