Студопедия — Учебно-практическое издание
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Учебно-практическое издание






ПРАКТИКУМ ПО МИКРОБИОЛОГИИ

 

 

Абакан


ББК

 

 

Печатается по рекомендации Методического совета
и по решению Редакционно-издательского совета
ГОУ ВПО «Хакасский государственный
университет им. Н. Ф. Катанова»

 

 

Рецензенты:  
   

 

Практикум по микробиологии: учебно-практическое издание/ сост. С. В. Водолазова – Абакан: Издательство ГОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н. Ф. Катанова», 2010. – ____ с.

 

 

В настоящем руководстве изложены общие сведения о методах выделения и исследования микроорганизмов. В руководстве представлены вопросы, изучаемые в курсе общей медицинской микробиологии и материалы для самоконтроля. Описаны методы микроскопического исследования различных групп микроорганизмов, методы выделения чистых культур, изучения культуральных и биохимических свойств, основные принципы идентификации микроорганизмов. Приведены основные методики, используемые в санитарной микробиологии и прикладной иммунологии. Руководство рекомендуется для самостоятельной подготовки студентов специальности «Лечебное дело» к лабораторным занятиями, может быть использовано студентами специальностей «Биология», «Биоэкология», «Безопасность жизнедеятельности».

ББК

 

 

©ГОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н. Ф. Катанова», 2010

© Водолазова С. В., сост., 2010


СОДЕРЖАНИЕ

 

Раздел 1. Морфология и цитология микроорганизмов. 5

1.1. Методы микроскопического исследования и морфология микроорганизмов 5

1.2. Тинкториальные свойства микроорганизмов. Методы окраски. Ультраструктура бактерий 12

1.3. Морфологические особенности и ультраструктура актиномицетов, спирохет, риккетсий, хламидий и микоплазм 18

1.4 Морфологические особенности и ультраструктура микроскопических грибов и простейших 20

Раздел 2. Культивирование микроорганизмов и выделение чистых культур 23

2.1. Культивирование микроорганизмов. Питательные среды.. 23

2.2. Выделение чистых культур микроорганизмов. 31

2.3. Методы стерилизации, дезинфекции и антисептики. Влияние
на микроорганизмы физико-химических факторов. 35

Раздел 3. Изучение свойств микроорганизмов. 40

3.1. Принципы описания и идентификации прокариот
Культуральные свойства прокариот. 40

3.2. Физиолого-биохимические свойства микроорганизмов. 44

3.3. Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам 48

3.4. Изучение патогенности и вирулентности микроорганизмов.
Работа с лабораторными животными. 53

Раздел 4. Экология микроорганизмов и основы санитарной микробиология 58

4.1. Микрофлора организма человека. 58

4.2. Микрофлора воды.. 60

4.3. Микрофлора воздуха. 65

4.4. Микрофлора пищевых продуктов, лекарственного сырья и лекарственных препаратов 69

Раздел 5. Прикладная иммунология. 73

5.1. Методы оценки иммунного статуса человека. 73

5.2. Методы оценки иммунного ответа. 78

Библиографический список. 81

 


ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время около 70 % всех регистрируемых заболеваний являются инфекционными, а в патогенезе многих неинфекционных болезней (злокачественные новообразования, атеросклероз, психические, нервные, аутоиммунные и др.) непосредственную или косвенную роль играют микробы. Решение проблем вышеуказанной патологии, разумеется, почти невозможно без знания микробиологических аспектов их этиологии, патогенеза, профилактики и терапии. Микробиология и иммунология относятся к базовым дисциплинам, знание которых необходимо каждому врачу, каждому медицинскому работнику, так как эти науки решают или способствуют решению важных проблем клинической, медико-профилактической и теоретической медицины.

В наше время без знания микробиологии и иммунологии уже немыслимо решение таких важных проблем медицины, как снижение инфекционной заболеваемости людей и ликвидация инфекционных болезней, искоренение внутрибольничных заболеваний, вызванных условно-патоген­ными микроорганизмами, лечение и профилактика аллергических и иммунопатологических проявлений, прогресс в диагностике и лечении онкологических болезней, решение проблем трансплантации органов и тканей, репродукции в акушерстве и гинекологии, а также решение многих задач в хирургии и других клинических дисциплинах, санитарно-ги­гиенических и экологических вопросов.

Все микробиологические, биохимические и молекулярно-биологи­ческие исследования микроорганизмов проводят в специальных лабораториях, структура и оборудование которых зависят от объектов исследования (бактерий, вирусов, грибов, простейших), а также от их целевой направленности (научные исследования, диагностика заболеваний). Изучение иммунного ответа и серодиагностику заболеваний проводят в иммунологических и серологических лабораториях.

Безопасность работы в лабораториях всех категорий обеспечивается выполнением распорядка и правил работ, оснащением соответствующим оборудованием, а также наличием лицензии на право работы с инфекционным материалом.


РАЗДЕЛ 1. Морфология и цитология
микроорганизмов

1.1. Методы микроскопического исследования
и морфология микроорганизмов

Цель занятия

Познакомиться с правилами работы в микробиологической лаборатории, освоить методику приготовления прижизненных и фиксированных мазков микроорганизмов.

Основные сведения

Размеры микроорганизмов очень малы, и при изучении отдельных бактериальных клеток можно получить весьма ограниченную информацию об их свойствах. Поэтому микробиологически исследуют популяции клеток, состоящих из миллиардов особей. Популяции микроорганизмов, или культуры, выращенные при определенных условиях в искусственных питательных средах, содержащие клетки одного вида, называют чистой, а более одного вида – смешанной культурой. Выделяют ещё накопительные культуры – содержащие преимущественно один вид микроорганизмов.

Основу микробиологического исследования составляют:

1. выделение определенного микроорганизма из смешанной естественной популяции;

2. культивирование и поддержание чистой культуры на искусственных питательных средах, обеспечивающих сохранение основных биологических свойств микроба;

3. изучение морфологических, культуральных, физиологических свойств с целью идентификации (определения видовой принадлежности) микроорганизмов.

Правила работы в микробиологической лаборатории

1. В помещение лаборатории нельзя входить без специальной одежды – халата, шапочки, сменной обуви, запрещается входить в верхней одежде, ложить на столы сумки и другие личные вещи.

2. Нельзя использовать лабораторную спецодежду за пределами лаборатории.

3. Зараженный микроорганизмами материал, микропрепараты и др. подлежат уничтожению.

4. После работы с культурами микроорганизмов, животными, перед уходом из лаборатории необходимо вымыть руки с мылом.

5. Необходимо проводить обеззараживание рук, оборудования, предметов, одежды, мебели в случае неосторожных манипуляций с заразным материалом.

6. За каждой парой студентов закрепляется постоянное рабочее место и микроскоп. Рабочее место во время занятий должно содержаться в полном порядке.

7. На всех пробирках и чашках обязательно пишется название микроорганизмов, дата посева, фамилия студента, № группы.

8. В ходе работы бактериологические петли и иглы обеззараживают прокаливанием в пламени горелки до и после взятия исследуемого материала. Использованные шпатели, предметные и покровные стекла, пипетки, помещают в сосуды с дезинфицирующим раствором. Класть на стол перечисленные предметы категорически запрещается.

9. Все манипуляции с исследуемым материалом необходимо проводить только над кристаллизатором и около пламени спиртовки.

10. В случае попадания исследуемого материала или культуры микроорганизмов на руки, стол, халат или обувь необходимо немедленно сообщить об этом преподавателю и под его контролем провести дезинфекцию.

11. В лаборатории категорически запрещено принимать пищу. Не допускаются лишние хождения, резкие движения, посторонние разговоры (особенно во время посева микроорганизмов).

12. После окончания исследования использованный материал и другие предметы сдаются лаборанту, рабочее место дезинфицируется. Необходимо вымыть с мылом руки.

13. На каждое занятие назначаются дежурные. Во время работы они следят за выполнением каждым студентом правил работы и поведения в лаборатории. По окончанию занятия дежурные сдают отработанный материал на стерилизацию, выключают свет и проветривают комнату.

14. Тетрадь для лабораторных работ является документом, позволяющим контролировать правильность полученных результатов. В нем должны быть записаны сведения, относящиеся к выполнению данной работы. Записи необходимо вести аккуратно и в определенном порядке. Рисунки микроорганизмов выполняются с указанием увеличения микроскопа простым карандашом внутри окружности, изображающей поле зрения микроскопа.

Ведение лабораторных записей

Тетрадь для лабораторных работ является документом, позволяющим контролировать правильность полученных результатов. В ней должны быть записаны сведения, имеющие отношение к выполнению данной работы. Запись необходимо вести аккуратно, в определенном порядке:

1. Дата, тема занятия;

2. Необходимые теоретические сведения (краткий конспект);

3. Номер задания, его название, цель;

4. Объект исследования;

5. Ход работы (условия проведения опыта);

6. Полученные результаты;

7. Собственные наблюдения и выводы.

Методы микроскопического исследования микроорганизмов

Несмотря на то, что за последнее время достигнуты большие успехи в области изучения морфологии микроорганизмов методом электронной микроскопии, световой микроскоп также не утратил своего значения. Существует два основных метода микроскопического исследования микроорганизмов при помощи светового микроскопа:

- метод прижизненного исследования;

- метод фиксированных мазков.

Определенное представление о форме, размерах и движении микробной клетки можно получить, изучая её прижизненно. Для прижизненного микроскопирования бактерий готовят препараты раздавленная и висячая капля и исследуют при увеличении × 40. Однако, клетки большинства микроорганизмов бесцветны и прозрачны, что затрудняет их изучение. Поэтому часто препараты для прижизненного исследования микроорганизмов слегка подкрашивают нейтральной краской. Для этой цели используют красители, не нарушающие жизнедеятельность микробов: нейтральный красный, растворы метиленового синего и кислого фуксина слабой концентрации.

Для более детального изучения клеток микроорганизмов используют фиксированные препараты. Приготовление фиксированных препаратов складывается из следующих операций: приготовление мазка, высушивание препарата, его фиксация (при которой микроорганизмы погибают) и окраска. Фиксированные мазки изучают при увеличении × 90 (× 100), используя иммерсионный или маслянопогружённый объектив, дающий увеличение в 900–1350 раз. При работе с иммерсионным объективом его погружают в каплю кедрового или вазелинового масла, нанесённого на препарат. Показатель преломления иммерсионного масла близок к показателю преломления стекла и между стеклом и линзой объектива устанавливается однородная среда. Благодаря этому все лучи, не преломляясь и не меняя своего направления, попадают в объектив и обеспечивают хорошую видимость мельчайших объектов.

Для приготовления мазка из гноя или мокроты используют стерильные препаровальные иглы, с помощью которых кусочек субстрата помещают на середину предметного стекла, вторым стеклом покрывают сверху. Прижав одно стекло к другому, растирают материал, пока не получат тонкий мазок.

Препарат крови больного готовят по следующей методике: предметным стеклом, отступая 1–2 см от края, прикоснуться к капле крови, выступившей после укола. Быстро, чтобы кровь не свернулась, ребром шлифованного стекла распределить ее по всей поверхности стекла.

Наиболее распространенным способом фиксации мазков является фиксация в пламени. Предметное стекло (мазком вверх) троекратно проводят через пламя. При таком способе фиксации сохраняются форма бактерий, споры, зерна волютина, однако этот способ фиксации нельзя применять для мазков крови, мазков-отпечатков из органов, а также при выявлении спор и жгутиков. Для этих целей проводят фиксацию в этиловом спирте (20 минут), в жидкости Никифорова (смесь эфира и этанола 1: 1, 20 минут) или в холодном ацетоне.

Методы микроскопии

Для микробиологических исследований используют несколько типов микроскопов (биологический, люминесцентный, электронный) и специальные методы микроскопии (иммерсионный, темнопольный, фазово-контрастный).

1. Чаще всего используют метод микроскопии в проходящем свете (светлопольную микроскопию). Этот метод используется для изучения окрашенных объектов в фиксированных препаратах.

2. Темнопольная микроскопия применяется для прижизненного изучения микробов в нативных неокрашенных препаратах. Микроскопия в темном поле зрения основана на явлении дифракции света при боковом освещении частиц, взвешенных в жидкости. Эффект достигается с помощью параболоид- или кардиоид-конденсора, которые заменяют обычный конденсор в биологическом микроскопе. При таком способе освещения в объектив попадают только лучи, отраженные от поверхности объекта. В результате на темном фоне (неосвещенном поле зрения) видны ярко светящиеся частицы.

3. Фазово-контрастная микроскопия предназначена для изучения нативных препаратов. Фазово-контрастное приспособление дает возможность увидеть в микроскоп прозрачные объекты. Свет проходит через различные биологические объекты с разной скоростью, которая зависит от оптической плотности объекта. В результате возникает изменение фазы световой волны, не воспринимаемое глазом. Фазовое устройство, включающее особые конденсор и объектив, обеспечивает преобразование изменений фазы световой волны в видимые изменения амплитуды. Таким образом, достигается усиление различия в оптической плотности объектов. Они приобретают высокую контрастность, которая может быть позитивной или негативной. Для фазово-контрастной микроскопии используют обычный биологический микроскоп и дополнительное фазово-контрастное устройство, а также специальные осветители.

4. Люминесцентная микроскопия основана на явлении фотолюминесценции – люминесценции объекта под влиянием света. Если освещать люминесцирующий объект синим светом, то он испускает лучи красного, оранжевого, желтого или зеленого цвета, в результате чего возникает цветное изображение объекта. Первичная люминесценция биологических объектов (собственная или биолюминесценция) наблюдается без предварительного окрашивания за счет наличия собственных люминесцирующих веществ. Вторичная (наведенная) – возникает в результате окрашивания препаратов специальными люминесцирующими красителями – флюорохромами (акридиновый оранжевый, ауромин, корифосфин и др.). Преимущества метода – возможность исследовать живые микроорганизмы и обнаруживать их в исследуемом материале в небольших концентрациях вследствие высокой степени контрастности.

5. Электронная микроскопия позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности светового микроскопа (0, 2мкм). Электронный микроскоп применяют для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других субмикроскопических объектов. Световые лучи в таких микроскопах заменяет поток электронов, имеющий при определенных ускорениях длину волны около 0, 005нм. Высокая разрешающая способность электронного микроскопа, достигающая 0, 1-0, 2нм, позволяет получить общее полезное увеличение до 1 000 000. Наряду с микроскопами «просвечивающего» типа используют сканирующие электронные микроскопы, обеспечивающие рельефное изображение поверхности объекта.

Морфология бактерий

Бактерии представляют наиболее обширную и весьма разнообразную группу микроорганизмов. Морфологически бактерии различаются по форме, величине, взаимному расположению клеток и другим признакам. Различают три основные формы бактерий: круглые (шаровидные), цилиндрические (палочковидные) и извитые.

1.Шаровидные клетки (или кокки) могут быть типично шаровидными, или со слегка заострённым концом, или сплюснутыми в виде фасоли. По взаимному расположению различают попарное (диплококки), цепочками (стрептококки), по четыре (тетракокки) или более в одной плоскости (педиококки) и хаотичное (монококки) расположение клеток. При делении клеток в трёх взаимно перпендикулярных плоскостях некоторые шаровидные бактерии располагаются упорядоченными пакетами (сарцины) или в виде хаотичных гроздевидных скоплений (стафилококки).

2. Цилиндрические (палочковидные) клетки по размеру встречаются короткие (длина меньше, чем две ширины), длинные (длина больше, чем две ширины) и нитевидные. В зависимости от взаимного расположения различают одиночно расположенные клетки, диплобактерии и стрептобактерии. Палочковидные клетки могут быть с округлым, заострённым, прямоугольным концом или вдавлением на конце клетки. Спорообразующие палочковидные бактерии, имеющие из-за крупной шаровидной споры форму веретена или барабанной палочки, называют клостридиями.

3. Извитые микроорганизмы все обладаю подвижностью, по степени извитости клетки подразделяются на вибрионы, спириллы и спирохеты. Клетка вибрионов представляет собой часть витка спирали, не изгибается при движении, по форме слегка напоминает запятую. Спириллы также не изгибаются при движении, клетка имеет несколько изгибов, представляя собой несколько витков спирали. Спирохеты – сильно извитые формы бактерий. Оболочка клеток спирохет очень эластична, поэтому их клетки передвигаются путем изгибания и вращения. Это особая форма прокариотических организмов, отличающихся строением и способом передвижения.

Содержание лабораторной работы







Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 899. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Вычисление основной дактилоскопической формулы Вычислением основной дактоформулы обычно занимается следователь. Для этого все десять пальцев разбиваются на пять пар...

Расчетные и графические задания Равновесный объем - это объем, определяемый равенством спроса и предложения...

Кардиналистский и ординалистский подходы Кардиналистский (количественный подход) к анализу полезности основан на представлении о возможности измерения различных благ в условных единицах полезности...

Обзор компонентов Multisim Компоненты – это основа любой схемы, это все элементы, из которых она состоит. Multisim оперирует с двумя категориями...

Классификация ИС по признаку структурированности задач Так как основное назначение ИС – автоматизировать информационные процессы для решения определенных задач, то одна из основных классификаций – это классификация ИС по степени структурированности задач...

Внешняя политика России 1894- 1917 гг. Внешнюю политику Николая II и первый период его царствования определяли, по меньшей мере три важных фактора...

Оценка качества Анализ документации. Имеющийся рецепт, паспорт письменного контроля и номер лекарственной формы соответствуют друг другу. Ингредиенты совместимы, расчеты сделаны верно, паспорт письменного контроля выписан верно. Правильность упаковки и оформления....

Дезинфекция предметов ухода, инструментов однократного и многократного использования   Дезинфекция изделий медицинского назначения проводится с целью уничтожения патогенных и условно-патогенных микроорганизмов - вирусов (в т...

Машины и механизмы для нарезки овощей В зависимости от назначения овощерезательные машины подразделяются на две группы: машины для нарезки сырых и вареных овощей...

Классификация и основные элементы конструкций теплового оборудования Многообразие способов тепловой обработки продуктов предопределяет широкую номенклатуру тепловых аппаратов...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.009 сек.) русская версия | украинская версия