Студопедия Главная Случайная страница Задать вопрос

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Эксперимент: Изучение клубочковую фильтрацию при экспериментальной острой почечной недостаточности на модели нефрозо-нефрита





Оборудование и реактивы: моча и плазма здоровой собаки (после введения гипосульфита), моча и плазма подопытной собаки (после введения гипосульфита), раствор йода (в разведениях 1/200 и 1/2000, крахмал в виде 1% раствора, пипетки на 2 мл, штативы).

Сущность используемого метода. Функциональная недостаточность почек проявляется в нарушении их способности очищать кровь от веществ, подлежащих удалению. Эту способность оценивают по объему плазмы крови, который почки могут очистить от введенного в кровь вещества за одну минуту. Причем, если вводить вещество, которое фильтруется в клубочках, то не реабсорбируется и не секретируется в канальцах (инулин, маннитол, креатинин, гипосульфит), то изменение способности почек очищать от него кровь будет характеризовать изменения процесса фильтрации.

Методика:

1. За 5-7 дней до исследования собаке подкожно вводился нефротоксический яд - азотнокислый уранил (0,5 мл/кг массы тела).

2. За 30-45 мин. до исследования животному подкожно вводится подогретый до 37оС 50% раствор гипосульфита и катетеризируется мочевой пузырь для сбора мочи и расчета минутного диуреза.

3. Через 30-45 мин. из вены шприцом забирается 5 мл крови, стабилизируется гепарином и центрифугируется в течение 15 минут при 3000 об/мин для отделения плазмы от форменных элементов крови. Белки плазмы крови осаждаются равным количеством 10% раствора трихлоруксусной кислоты.

4. Для определения концентрации гипосульфита к 1 мл супернатанта (что составляет 0,5 мл цельной плазмы) добавлять по 1-2 капле 1% раствора крахмала и титровать 1/2000 раствором йода (1 мл эквивалентен 0,00012411 г гипосульфита) до появления сине-голубого окрашивания.

5. Из порции мочи, взятой после введения гипосульфита, отдельными микропипетками набрать по 0,1 мл ее, поместить в пробирки, добавить по 1-2 капле 1% раствора крахмала и титровать 1/200 нормальным раствором йода (1 мл эквивалентен 0,0012411 г гипосульфита) до появления сине-голубого окрашивания. Для удобства работы можно предварительно мочу развести в 10 раз и взять не 0,1, а 1,0 мл.

 

Расчет клиренса по формуле:

 

 

где:

М - количество мл йода, идущего на титрование 0,1 мл мочи,

П - количество мл йода, идущего на титрование 1 мл плазмы,

Д - минутный диурез (мл/ мин)

Умножение числителя на 1000 необходимо для перевода количества гипосульфита в моче в мг%, т.к. для исследования брали не 100, а 0,1 мл ее. Умножение знаменателя на 200 необходимо для перевода количества гипосульфита в плазме в мг%, т.к. для исследования брали 1 мл супернатанта плазмы, что соответственно составляет 0,5 мл плазмы.

Д - у контрольной и подопытной собаки соответственно составляет 1 мл/мин и 0,7 мл/мин.

Сопоставить расчетные данные, обсудить результаты, сделать выводы.

 






Дата добавления: 2014-11-12; просмотров: 260. Нарушение авторских прав

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2017 год . (0.006 сек.) русская версия | украинская версия