Реакция Сальковского

Жидкость после проведения пробы Шиффа встряхивают. После расслаивания верхний слой окрашивается в красный цвет, нижний имеет желто-оранжевую окраску с зеленой флуоресценцией.

4.3. Реакция Либермана – Бурхарда.

В пробирку наливают 1 мл хлороформного раствора холестерина, добавляют 0, 5 мл уксусного ангидрида и 2 капли концентрированной серной кислоты. Хорошо перемешивают. Образуется красная окраска, переходящая в фиолетовую, затем синюю и зеленую. При незначительном содержании холестерина может сразу появиться зеленая окраска.

Цветные реакции на холестерин определяются дегидратацией и окислением холестерина под действием концентрированной серной кислоты и последующей конденсацией продуктов с образованием соединений с сопряженными двойными связями, дающими с серной кислотой различные окрашенные производные.

Опыт 5. Количественное определение общего холестерина в сыворотке крови прямым методом по реакции Златкис – Зака.

Метод основан на реакции холестерина с уксусной и серной кислотами в присутствии хлорида железа.

К 0, 1 мл сыворотки крови прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорида железа, перемешивают. Готовят контроль: к 0, 1 мл дистиллированной воды прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорида железа. Оставляют на 15 минут.

Колориметрируют против контроля на фотоэлектроколориметре при длине волны 510-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см.

Из стандартного раствора холестерина готовят разведения, как указано в таблице 4.

Таблица 4. Приготовление растворов холестерина для построения калибровочного графика.

№ пробирок	Стандартный раствор холестерина, мл	Ледяная уксусная кислота, мл	Рабочий раствор хлорида железа, мл	Содержание холестерина в пробе, мг%
	0, 1	3, 0	2, 0
	0, 2	3, 0	2, 0
	0, 3	3, 0	2, 0
	0, 4	3, 0	2, 0
	0, 5	3, 0	2, 0

 

Через 20 минут пробы фотометрируют против контроля. По результатам строят калибровочный график.

По калибровочному графику определяют содержание холестерина в сыворотке крови. Норма содержания холестерина в сыворотке крови – 120-250 мг% (3, 12-6, 50 ммоль/л).

Контрольные вопросы

1. Почему чаще встречается гиперхолестеролемия, а не гипохолестеролемия?

2. Как изменится синтез холестерина при питании только растительной пищей? Почему?

3. Укажите, в каких органах происходит синтез холестерина «на экспорт».

4. Каким образом большая часть холестерина выводится из организма?

5. В чем различие функций фосфолипидов и триацилглицеролов?

 

Работа 3. Переваривание белков. Определение кислот