Методические указания. Материал для бактериологического исследования определяется клиническим проявлением гнойно-воспалительного заболевания

Материал для бактериологического исследования определяется клиническим проявлением гнойно-воспалительного заболевания. Это может быть раневое отделяемое, гной, мокрота, содержимое абсцесса, спинномозговая жидкость, кровь, рвотные массы, промывные воды желудка, остатки пищи. Правильность взятия материала для бактериологического исследования определяет эффективность работы баклаборатории. Забор материала осуществляют до начала антибиотикотерапии, исключая контакт с дезинфицирующими средствами и контаминацию микроорганизмами из смежных частей тела, слизистых и окружающей среды.

Правила забора материала при заболеваниях, вызванных патогенными кокками:

1. Кровь на стерильность: кожу над пунктируемой веной обрабатывают 70% спиртом, затем 5% настойкой йода, затем снова 70% спиртом. Взятие крови проводят стерильным шприцем в упаковке (нельзя пользоваться шприцем со стерильных лотков и нельзя проверять проходимость иглы воздухом) в количестве 10 мл у взрослых и 5 мл у детей. Кровь у постели больного над пламенем спиртовки засевают на питательную среду в соотношении 1:10 (стерильный флакон, содержащий 100 мл сахарного бульона или на двухфазную питательную среду, содержащую сахарный бульон и мясопептонный агар) по методу Кастанеда. Содержимое флакона перемешивают и немедленно доставляют в баклабораторию.

2. Мазок из зева на микрофлору: больного усаживают на стул против света и предлагают широко раскрыть рот. Корень языка придавливают шпателем, который вводят в рот обследуемого левой рукой, так чтобы введенный конец был несколько ниже того, за который его держат. Язык стараются придавить книзу и придвинуть кпереди, чтобы лучше осмотреть зев. Тампон в полость рта вводят правой рукой и снимают налет и слизь с миндалин, дужек мягкого неба и задней стенки глотки, не касаясь языка и слизистой оболочки внутренней поверхности щек. Тампон поместить в пробирку и доставить в баклабораторию.

3. Мазок из носа патогенный стафилококк: забор материала производят стерильным ватным тампоном из глубины носовых ходов одним тампоном из обеих половин носа. Тампон помещают в пробирку и доставляют в баклабораторию.

4. Мокрота на микрофлору: утреннюю мокроту, выделившуюся при кашле, собирают в стерильную посуду. Перед откашливанием больной чистит зубы и прополаскивает рот кипяченой водой. Больному следует объяснить, чтобы он собирал мокроту, а не слюну. Материал доставляют в баклабораторию в течение часа от момента забора материала.

5. Рвотные массы и промывные воды желудка: в количестве 50-100 мл собирают в стерильную широкогорлую банку, отверстие её закрывают вощаной бумагой, обвязывают ниткой и доставляют в баклабораторию.

6. Экссудаты и транссудаты (плевральная, асцитическая жидкости и др. выпоты) материал собирают в стерильную посуду с антикоагулянтом и немедленно доставляют в баклабораторию.

7. Моча на бактериурию: после тщательного туалета наружных половых органов собирают среднюю порцию утренней мочи в количестве 50 мл в стерильную посуду и доставляют в баклабораторию в течение часа от момента забора материала.

8. Отделяемое ран на микрофлору: взятие материала производит врач с соблюдением правил асептики и антисептики. Кожу вокруг раны обрабатывают 70% спиртом, некротические массы, гной, детрит удаляют стерильной салфеткой. Материал забирают стерильным тампоном и помещают в стерильную пробирку. Доставляют в баклабораторию в течение 1 часа от момента забора материала.

9. Спинномозговая жидкость на менингококк: взятие спинномозговой жидкости производит врач. Свежевзятый ликвор из шприца без иглы над пламенем спиртовки помещают в стерильную пробирку. Материал немедленно доставляют в баклабораторию в специальном контейнере, избегая охлаждения (в термосе или на грелке с температурой 37 С)

10. Слизь из носоглотки на менингококк: забор материала производят с задней стенки носоглотки натощак или через 2-4 часа после еды стерильным ватным тампоном, укрепленным на легко гнущейся алюминиевой проволоке. Перед употреблением конец проволоки на 2-3 см от края сгибают о край пробирки под тупым углом (135⁰) в широко раскрытый рот больного вводят сначала шпатель, прижимая язык книзу, а затем тампон. Тампон вводят концом кверху за мягкое небо в носоглотку и проводят 2-3 раза по задней стенке. При извлечении тампон не должен касаться зубов, слизистых щек, языка. Материал может быть засеян на месте его взятия на питательную среду в чашке Петри или погружен в пробирку с транспортной средой или средой обогащения, или взят увлажненным тампоном. Материал доставляют в баклабораторию немедленно, в специальном контейнере, избегая охлаждения.

11. Отделяемое половых органов на гонококк: материал получают из уретры до мочеиспускания (у мужчин), из влагалища и канала шейки матки у женщин. Головку полового члена очищают стерильным ватным тампоном, смоченным в физ. растворе, затем просушивают стерильным ватным тампоном. Материал берут петлей или ложкой Фолькмана и сразу засевают в пробирку с питательной средой для культивирования гонококка. Доставляют в баклабораторию немедленно, избегая охлаждения (либо помещают в эксикатор с горящей свечей и в термостат – при заборе материала в женской консультации).

Патологический материал, направляемый в лабораторию для бактериологического исследования, должен иметь направление содержащее следующие сведения:

1. фамилия, имя, отчество и возраст больного

2. день заболевания. Температура тела

3. предполагаемый на основании клинических данных диагноз или повод для исследования (по эпидпоказаниям, предполагаемое бактерионосительство)

4. наименование объекта, направляемого на бакисследование (кал, кровь, мокрота). При консервировании материала указать, какой консервант употреблен, время забора материала

5. цель исследования

6. наименование учреждения и фамилия врача, направляющего материал на исследование

 

Для диагностики гнойно-воспалительных заболеваний используют бактериоскопический и бактериологический методы. Учитывая результаты первичной микроскопии, исследуемый материал засевают на соответствующие среды (сахарный бульон, кровяной агар, ЖСА, шоколадный агар, сывороточный агар с ристомицином, среду для гонококков). Выделенную чистую культуру идентифицируют до рода и вида, определяют антибиотикограмму, а у стафилококков ещё определяют продукцию ферментов агрессии и защиты.

Схема бактериологического исследования при гнойно-воспалительных заболеваниях:

1-ый день исследования. Материал:

гной, спинномозговая жидкость – первичная микроскопия обязательна:

мокрота – первичная микроскопия проводится только из разведений в физ. растворе 10^-4 - 10^-5, высев делают из исходной взвеси бактерий

кровь – первичная микроскопия не проводится, непосредственно у постели больного кровь засевают на двухфазную среду в соотношении 1:10

моча – первичная микроскопия не проводится, высев чаще делают на МПА, кровяной агар и среду Эндо

мазок из зева – первичная микроскопия не проводится, а высев чаще делают на кровяной агар и ЖСА.

Исходя из результатов первичной микроскопии гноя, спинномозговой жидкости, посевов крови в сахарных бульон (через 24 часа культивирования), исследуемым материал засевают на соответствующие среды: стрептококки на кровяной агар, стафилококки на желточно-солевой агар, грамотрицательные бактерии (представители семейств Enterоbacteriaceae, Pseudomonadaceae) – на среду Эндо для выделения чистой культуры возбудителя.

2-ой день исследования. 1. Проводят учет роста колоний на питательных средах (изучают культуральные свойства). 2. Определяют морфологические и тинкториальные свойства путем микроскопии мазка из подозрительной колонии, окрашенного по Граму. 3. Осуществляют посев подозрительной колонии на скошенный агар для накопления чистой культуры. Колонии с кровяного агара (по результатам микроскопии), содержащие стрептококк, для накопления пересевают в сахарный бульон.

3-ий день исследования. Определение оксидазной активности, подвижности бактерий. Постановка биохимических тестов для родовой и видовой идентификации накопленной чистой культурой.

4-ый день исследования. Окончательная идентификация культур на основании результатов биохимических тестов. Учет чувствительности к антибиотикам. Фаготипирование Staph. aureus. Сероидентификация культур грамотрицательных палочек.

Этиологическую значимость условно-патогенных бактерий оценивают с учетом соответствующих критериев.

Методика постановки пробы на плазмокоагулазу:

В три преципитационные пробирки вносят по 0,3-0,5 мл цитратной плазмы кролика, разведенной ИХН в соотношении 1:4. Затем бактериальной петлей в первую пробирку (опыт) добавляют петлю исследуемой культуры, во вторую – петлю культуры коагулазоположительного стафилококка (вторая и третья пробирки – контрольные). Пробирки помещают в термостат при t 37⁰С. Учет реакции производят через 2-3 ч. При отсутствии свертывания плазмы посевы оставляют при комнатной температуре на 24 ч., после чего учитывают реакцию: во второй пробирке плазма свертывается (не выливается из перевернутой пробирки), в третьей пробирке плазма не свертывается (выливается), в первой (опытной) пробирке – плазма свертывается при наличии у исследуемого стафилококка фермента плазмокоагулазы (РКП+) и не свертывается при отсутствии этого фермента (РКП-).