Билет № 40. 1. Индикация вируса. Обнаружение (индикация) вируса в культуре клеток осуществляется следующими методами: вы­явлением специфической дегенерации клеток (ЦПД);

1. Индикация вируса. Обнаружение (индикация) вируса в культуре клеток осуществляется следующими методами: вы­явлением специфической дегенерации клеток (ЦПД); обнару­жением внутриклеточных включений; под электронным мик­роскопом; обнаружением специфических антигенов методом иммунофлюоресценции; положительной реакцией гемабсорбции;

по образованию бляшек;по подавлению метаболизма клеток(цветная проба, колориметрический тест)

Признаком, свидетельствующим о размножении вируса являются дегенеративные изменения в клетках, то есть проявление цитопатогенного действия вируса (ЦПД).

Обнаружение внутриклеточных включений. При репро­дукции некоторых вирусов внутри протоплазмы или ядра клетки образуются специфические включения. Для их обна­ружения культуры клеток выращивают на специальных стек­лянных пластинках или покровных стеклах, помещенных в стерильные пробирки с 2 мл клеточной суспензии. После об­разования монослоя клетки заражают вирусом и через опреде­лённые сроки в зависимости от свойств вируса готовят препа­раты. Для морфологических исследований культуры клеток окрашивают по методу Романовского - Гимза, Пигаревскому, Павловскому, Муромцеву, Селлеру.

Обнаружение вирусов при помощи реакции имуноф-люоресценции. В том случае, если размножение вируса не со-провожается ЦПЭ, его присутствие можно обнаружить с по­мощью флюоресцирующих антител.

Обнаружение вирусов с помощью электронного микро­скопа В большинстве клеток, заражённых вирусом, под элек­тронным микроскопом различают кристаллоподобные струк­туры с полигональным неупорядоченным содержимым. Имен­но в этих местах происходит репродукция вирусов, накопле­ние созревших вирионов.

Интерференция вирусов. Некоторые вирусы можно обна­ружить в культуре клеток по снижению способности размно­жаться в ней другого вируса (явление интерференции). Испы­туемый вирус вносится в культуру первым. Через несколько дней культуру заражают «выявляющим вирусом» - стандарт­ной дозой вируса, обладающего выраженным ЦПД или гемад-сорбирующей способностью. После инкубирования выявляют размножение или отсутствие «выявляющего вируса».

Образование бляшек. В основе метода лежит появление в монослое заражённых клеток под агаровым покрытием обес­цвеченных участков (бляшек). Бляшки представляют собой деструктивные клетки, разрушенные вирусом и неспособные окрашиваться нейтральротом в отличие от живых клеток. Од­на инфекционная частица может образовывать только одну бляшку, что позволяет применять бляшкообразование для ко­личественного определения инфекционности вируса и измере­ния нейтрализующей способности сыворотки (1 БОЕ - одна бляшкообразующая единица) и интерферона.

Цветная проба (колориметрический тест). Заражение клеточных культур цитопатогенным вирусом ведёт к подавле­нию их метаболизма. Свежая питательная среда рН 7,4 - 7,8, содержащая феноловый красный, имеет красный цвет. Растущие клетки в процессе метаболизма продуцируй кислоту что приводит к изменению цвета питательной среды на жёл тый. При заражении вирусом клетки погибают раньше чем вырабатывают достаточное количество кислоты, чтобы изме­нить цвет среды на желтый. Таким образом, красный цвет сре-ды указывает на размножение вируса, желтый - на отсутствие вируса или его нейтрализацию.

Реакция гемадсорбции. Сущность состоит в том, что на поверхности клеток, инфицированных вирусами, обладающи­ми гемадсорбирующей активностью, адсорбируются эритро­циты различных видов животных.

После любого способа культивирования вирусов и поло­жительной индикации проводится идентификация вирусов с помощью иммунологических методов, включающих следую­щие реакции:

а) торможения гемагглютинации - РТГА;

б) задержки гемадсорбции - РЗГА;

в) связывания комплемента - РСК;

г) нейтрализации - РБН, РТН;

д) преципитации в геле - РДПГ;

е) иммуноферментный анализ - ИФА.

 

3. Ботулизм - тяжелая пищевая токсикоинфекция, связанная с употреблением продуктов, зараженных C.botulinum, и характеризующаяся специфическим поражением центральной нервной системы Свойства возбудителя. Крупные полиморфные грамположительные палочки, подвижные, имеют перитрихиальные жгутики. Споры овальные, располагаются субтерминально (тенисная. Образуют восемь типов токсинов, отличающихся по антигенной специфичности, и соответственно выделяют 8 типов возбудителя. Среди важнейших характеристик - наличие или отсутствие протеолитических свойств (гидролиз казеина, продукция сероводорода).Токсин оказывает нейротоксическое действие. Токсин попадает в организм с пищей. Токсин термолабильный. Токсин быстро всасывается в желудочно - кишечном тракте, проникает в кровь Развиваются нервно - паралитические явления - нарушения глотания, афония, дисфагия, двоение в глазах, опущение век, параличи и парезы глоточных и гортанных мышц, остановка дыхания и сердечной деятельности. Лабораторная диагностика. Принципы - общие для клостридий. Выделяют и идентифицируют возбудительДля выделения возбудителя пробы сеют на плотные среды и накопительную среду Китта - ТароцциДля изучения токсина проводят биопробы на белых мышах. Можно также определять токсин в РНГА с антительным диагностикумом. Лечение и профилактика. В основе - раннее применение антитоксических сывороток В основе профилактики - санитарно - гигиенический режим при обработке пищевых продуктов. Особенно опасны грибные консервы домашнего приготовления и другие продукты, хранящиеся в анаэробных условиях.