Экологические методы бактериологического исследования почвы

Метод стекол обрастания (по Росси-Холодному). Метод позволяет наблюдать «микробные пейзажи». В небольшом почвенном разрезе одну из стенок зачищают и, сделав ножом вертикальную щель, закладывают в нее стерильные предметные стекла, плотно прижимая их к почве. Закапывают разрез, отмечая колышком местонахождение препаратов. Если почва содержит достаточно влаги, то закопанное стекло вскоре покрывается почвенным раствором, к его поверхности прилипают коллоидные частички органического и минерального происхождения. В этой среде поселяются и активно развиваются различные микроорганизмы, образующие на стеклах характерные для данной почвы микропейзажи. По истечении срока экспозиции (не менее одного месяца) стекло осторожно отделяют от почвы (не скользящим движением), подсушивают на воздухе, фиксируют в пламени горелки, отмывают осторожно препарат водой от крупных частиц почвы (для этого можно оставить стекло в стакане с водой в наклонном положении на несколько часов), окрашивают 1%-ным карболовым эритрозином в течение 1 ч во влажной камере, промывают дистиллированной водой, высушивают и микроскопируют. Метод широко применяется в микробиологической практике. С помощью этого метода впервые оказалось возможным наблюдение за распределением различных микроорганизмов в их природной среде обитания, наблюдение за формой и размерами группировок микроорганизмов, их взаимоотношениями. Модификации метода заключаются в том, что стекла перед помещением в почву покрывают какой-нибудь питательной средой (крахмало-аммиачным агаром, например, согласно модификации Рыбалкиной и Кононенко) или специфическим субстратом (например, фильтровальной бумагой, льняной тканью и т.д.).

Метод капиллярных педоскопов. В естественных условиях в почве, илах развитие микроорганизмов происходит в основном в почвенных капиллярах, к стенкам которых прикрепляются почвенные микроорганизмы. Исходя из этого положения, Б.В. Перфильев и Д.Р. Габе предложили использовать для наблюдения за жизнью микроорганизмов плоские капилляры с плоскопараллельными стенками. Был сконструирован специальный прибор – педоскоп, состоящий из набора таких капилляров. Педоскоп представляет собой набор капиллярных ячеек с 5—6 прямоуголь­ными каналами. Ячейки закладывают в пазы широкого стеклян­ного держателя и заполняют полужидкой агаризованной средой, содержащей в качестве органического субстрата гумусо­вые вещества (фульвокислоты). Это создает для микроорганиз­мов условия, близкие к почвенным.

Стерильные педоскопы вставляют в почву с помощью специального пробойника так, чтобы каналы ячеек приняли вертикальное положение, т.е. соответствовали преобладающему направлению движения почвенного раствора. Экспозиция педоскопов в почве длится обычно в течение месяца, после чего педоскопы вынимают из почвы, очищают снаружи от почвенных частичек, рассматривают под микроскопом с иммерсионным объективом. Микробные клетки в педоскопах могут быть зафиксированы и окрашены. Фиксируют их в парах осмиевой кислоты или в парах 40%-ного раствора формалина. Окрашивают 1%-ным раствором карболового эритрозина, промывают водой. Модификация метода, предложенная Т.В. Аристовской, состоит в том, что внутренние стенки капилляров покрывают средой, содержащей фракцию гуминовых кислот.

Метод люминесцентно-микроскопического наблюдения микроорганизмов в почвенных монолитах (по Звягинцеву). Приготовляют цилиндрическую формочку (диаметр и высота по 1 см) из нержавеющей стали, пластмассы или стекла, имеющую острые края. Вдавливают формочку в почву исследуемого горизонта и осторожно вынимают ее так, чтобы над краями формочки возвышался слой почвы. Острой бритвой срезают почву, чтобы верхняя грань монолита была на уровне краев формочки. На поверхность почвы капают водный раствор акридинового оранжевого (1:1000) и накрывают ее очень тонким покровным стеклом (0,10-0,12 мм). Через 10-20 мин исследуют в люминесцентном микроскопе с иммерсионным объективом (×90) в отраженном свете. Основные трудности метода заключаются в подборе подходящей концентрации красителя; для каждой почвы она подбирается опытным путем.