Определение мышления (далее М.). Виды М. Основные подходы к М

skype: Laktysev_Victor,

моб.: +375 29 3943349, Виктор

 

6.

Таксономия- наука, кт занимается вопросами классиф, номенклатурой и иден­тификацией миробов. Задачей явл объедин-е микробов с общими св-ми в опред-е гр - токсоны.

Номенклатура - система,кт применятся в определенной области знаний. Идентифика-ция -отнесение микробов к определенному токсону (виду) на основании конкретных признаков. Чтобы отнести микроб к определ виду нужно определить основные его призна­ки (морфология, окраска по Грамму, наличие капсул, способность к образ-ю эндоспор). В классиф для груп-вания родств-х орг-змов имеют следующ категории: царство, отдел, секция, класс, порядок, семейство, род, вид. В микроб-ии для обознач-я видов бактерий принята двойная номенклатура: 1 слово на­звание рода, хар-ет морфологию или физиолог признак, либо фамилию ученого; 2 слово обозначает видовое название микроба, пред-ет собой производное от сущест-ого, дающего описание цвета колонии, вызыв-го им процес­са или болезнь. Примерbacillusantracis-сибиреязвенная палочка. Основной номенкла­турной ед-ей явл вид- совокупность микроорг, имеющих единое происхождение и генотип, сходных по биол-м и морфология признакам, обладающих способностью вызывать опред-ный специф процесс. Вид подразд-ся на под­виды-микробы отлич-ся отклонениями от типовых, видовых св-в.

ШТАММ – объединяет микроорганизмы одного и того же вида, но выделенные из различных источников или даже из одного и того же источника, но в разное время. Штаммы одного вида могут быть абсолютно идентичными или различаться по отдельным признакам, нпр., по способности ферментировать к.-л. сахар, по устойчивости к к.-л. антибиотику и т.д.

КОЛОНИЯ – изолированные скопления клеток, образующиеся на поверхности плотных пит. сред.

КЛОН – это культура микроорганизмов, полученная из единичной клетки, которая размножилась и дала начало целой популяции.

ЧИСТАЯ КУЛЬТУРА – популяция микробов. состоящая из особей одного вида.

7.

Грибы (Myces) относятся к эукариотам. Грибов в природе огромное количество и только небольшая их часть вызывает заболевания животных и человека. Основной структурный элемент грибов – гифы - нитевидные структуры, переплетающиеся между собой. В результате переплетения гиф образуется мицелий. Грибы в лабораторных условиях культивируются на специальных питательных средах, где образуют мицелий как поверхностный(воздушный), так и субстратный.

Грибы размножаются спорами бесполым путем. Высшие грибы размножаются половым путем: 2 споры сливаются, образуя зиготу. По образованию спор грибы делятся на низшие и высшие. У низших грибов помимо особенности спорообразования мицелий одноклеточный несегментированный. У высших грибов мицелий делится перегородками на отдельные клетки. В перегородках находятся отверстия.

У низших грибов споры образуются в специальных закрытых спорангиях. Споры, закрытые оболочкой спорангия, называются эндоспорами. У высших грибов экзоспоры- соприкасаются с внешней средой.

Артроспоры - гиф мицелия начинает дробиться и каждый образующийся при этом фрагмент дает начало новому мицелию.

Хламидоспоры - на концах в местах сочленения мицелия образуются выпуклости, одна из которых утолщается и превращается в спору.

Бластоспоры - характерны для дрожжевого грибка. От материнской клетки отпочковываются дочерние.

Аскоспоры - это половые споры, не образующие мицелий.

Классы грибов:

- Овомицеты.

- Аскомицеты (сумчатые).

- Базидиомицеты.

- Несовершенные грибы или дейтеромицеты.

Патогенность грибов.

Грибы у человека способны вызывать микозы, как поверхностные (поражения кожи, ногтей, волос), так и глубокие (мышцы, клетчатка). Грибы могут вызывать системные поражения. Криптокиккоз - заболевания, вызываемые грибком на фоне ВИЧ-инфекции (в 30% случаев). Заболевание вызывает Cryptococcus. Он имеет дрожжеподобные клетки размером 4- 20 мкм. Образует бластоспоры. Нитчатые формы отсутствуют. Может образовывать капсулу.

Blastomyces вызывает бластомикоз. Встречается в двух формах - висцеральный и кожный. В тканях определяются довольно крупные дрожжеподобные клетки.

Candida - входит в состав нормальной микрофлоры. У маленьких детей часто наблюдается кандидоз полости рта - молочница. Активизируются на фоне иммунодефицита.

Hystoplasma - Гистоплазма - вызывает гистоплазмоз. В клетках, тканях образует одноклеточные образования округлой или грушевидной формы. Образует бласто- и хламидоспоры. На питательных средах дает воздушный мицелий.

Coccidioides вызывают системное заболевание кокцидиоз, острая форма напоминает грипп. При хронической форме поражается костная ткань. Образует эндоспоры. На питательных средах образует воздушный мицелий. Часто встречается на фоне ВИЧ-инфекции.

16. Морфологическая характеристика актиномицетов.

Actinomyces - Актиномицеты - Лучистые грибы. Неистинные грибы. Относятся к почвенным бактериям. При своем росте образуют структуры, напоминающие мицелий грибов, т.е. они являются промежуточной формой микроорганизмов. С грибами их роднит мицелиообразование и спорообразования (бласто-, артро- и хламидоспоры). С бактериями - обитают в почве, Гр+, видны под световым микроскопом с иммерсией. Имеют ядерный материал, ЦПМ, клеточную стенку. Делятся обычным делением и спорами. На питательных средах образуют нечто похожее на субстратный мицелий. Выделяют 3 группы:

1) Псевдоактиномицеты - некоторые бактериальные формы, например микобактерии туберкулеза, бифидобактерии. Для этой группы характерна удлиненная форма и специфическое деление.

2) Проактиномицеты. У этих микроорганизмов сохраняется мицелий, образуют артроспоры. К ним относятся Nocardia- вызывают нокардиоз.

3) Эуактиномицеты - истинные лучистые грибки. Представитель - род Sthreptomyces. Образуют истинный мицелий, артроспоры. Могут образовывать спорангии (стрептоспорангии), экзоспоры по типу высших грибов. Эта группа дает до 95% антибиотиков.

8.

Ферменты участвуют во всех обменных процессах. Ферменты делятся на экзоферменты, которые выделяются в окружающую среду, где они расщепляют питательные вещества. Эти вещества поступают внутрь клетки, где расщепляются эндоферментами.

По постоянству действия:

- Ферменты, постоянно участвующие в обменных процессах - конституитивные. Они принимают активное участие в синтезе структурных компонентов.

- Ферменты, действующие только при наличии субстрата – адаптационные: ферменты транспорта и катаболизма лактозы – галактоздпермиаза, b-галактозидаза, галактозидацетилтрансфераза.

В целях диагностики определяют такие ферменты моргов: лецитиназа, уреаза, сахараза, мальтаза, гиалуронидаза,

Ферменты патогенности:

1) гиалуронидаза – расщепляет ГАГ (матрикс соедин. ткани), что облегчает механическое продвижение по ткани

2) уреаза – расщепляет мочевину с образованием аммиака, что помогает выжить в очень кислой среде

3) гемагглютинины – запускают агглютинацию крови, что создает благоприятные условия для роста и размножения моргов.

4) лецитиназа – расщепляет желток куриного яйца

5) пенициллаза – расщепляет пенициллин (первый антибиотик)

9.

Среды для определения сахаролитической активности микробов. Для выявления способности микробов ферментировать различные углеводы применяют жидкие, полужидкие и плотные питательные среды с набором необходимых углеводов и индикаторов (кислый фуксин, лакмус, бромтимолблау, нейтральрот, индикатор Андреде). Такие среды называются пестрым рядом, или цветными средами. С их помощью изучают отношение микробов к различным углеводам. Эти среды не оказывают угнетающего действия на жизнедеятельность микроорганизмов.

Патогенные виды микробов ферментируют углеводы неодинаково. Одни бактерии ферментируют глюкозу, но не разлагают лактозу, другие ферментируют лактозу и глюкозу, но не разлагают сахарозу. Некоторые бактерии разлагают глюкозу с образованием кислоты и газа, а другие ― только с образованием кислоты, но без газа.

Для идентификации возбудителей кишечных заболеваний широко применяют цветной ряд, состоящий из сред с глюкозой, лактозой, мальтозой, маннитом, сахарозой (среды Гисса), иногда дополняют его молоком и молочной сывороткой.

Бактериальные колонии и их характеристика. На плотных питательных средах развивающиеся бактерии образуют видимые не-1 вооруженным глазом скопления ― колонии. Колония представляет собой потомство одной микробной клетки. Внешний вид колоний,

выросших на агаре в чашке Петри, характерен для каждого вида микробов и ориентировочно может служить его диагностическим признаком.

Формы колоний. Наблюдая колонии через лупу или окуляр, можно заметить различные формы: круглые, плоские. Формообразование зависит от видовых особенностей бактерий, от состава питательной среды, физико-химических свойств, методов посева и культивирования. Края колоний могут быть ровные, зубчатые, волнистые, лучистые, фестончатые.

Структура Колонии изучается при помощи лупы или микроскопа со слабым увеличением, сухой системой при суженной диафрагме или несколько спущенном конденсоре. Для этого чашку помещают на столик дном вверх, передвигая ее, отмечают колонии различной структуры ― гомогенной, гиалиновой, зернистой, аморфной.

Величина колонии: крупная, мелкая, точечная. Цвет: окрашенная или бесцветная. Поверхность: гладкая, морщинистая, влажная, сухая, слизистая, блестящая, тусклая.

Консистенция колонии: плотная, рыхлая, слизистая, вязкая, волокнистая.

Бактериальные колонии, как правило, образуются на поверхности питательной среды и легко от нее отделяются.

Интенсивность размножения бактериальных клеток и их расположение после деления оказывают влияние на структурные изменения колоний. По характеру деления бактериальные культуры делятся на образующие петли, складки, изломы и скольжения.

Для петлеобразуюЩих характерно то, что из длинных бактериальных нитей и цепочек появляются колонии ― клубки с большим количеством отростков. К ним относятся сибиреязвенные палочки. Бактерии, образующие при делении складки, дают неровные колонии с неправильными краями, особенно чумная палочка.

Микробы, дающие изломы основных нитей деления, располагаются под углом друг к другу и образуют приподнятые бугристые шероховатые колонии, характерные для микобактёрии и дифтерийной палочки.

При скольжении бактериальные клетки располагаются параллельно оси деления и дают гомогенные прозрачные колонии с ровными краями, свойственными для синегнойной и кишечной палочек.

Культуры грибов разнообразны. По размерам их колонии значительно превосходят бактериальные и дрожжевые. Колонии грибов обычно закрывают всю поверхность питательной среды. Консистенция колонии бывает войлокообразноп, кожистой, а поверхность колонии ― пушистой или бархатистой. Грибы глубоко внедряются в питательную среду, образуя в ней, как правило, войлокообразиое сплетение.

 

10.

Среды для определения протеолитической активности микробов.

Существуют различные питательные среды, применяемые для определения протеолитической активности микробов. Для этой, цели используют жела т и н о в у ю с р е д у. Посев культуры производят уколом в столбик желатиновой среды, выращивают ее при температуре 22°. Если микробы выделяют фермент желатика-зу, то происходит разжижение среды.

Образование сероводорода также является диагностическим признаком. При выращивании микробов на белковых средах, состоящих из аминокислот (цистии, метионин), происходит расщепление белков и в результате этого образуется сероводород. Для обнаружения сероводорода фильтровальную бумагу предварительно пропитывают раствором основного уксуснокислого свинца, затем, высушив на воздухе, разрезают на мелкие полоски шириной 1 см и, укрепив ее между пробкой и стенкой пробирки, ставят в термостат. Почернение нижнего конца бумажки через сутки указывает на присутствие сероводорода (ввиду образования сернистого свинца).

И н д о л о о б р а з о в а н и е является важным диагностическим признаком. Индол представляет собой продукт расщепления белка под действием фермента триптофаназы. Для определения индола широко применяется проба с фильтровальными бумажками, пропитанными насыщенным водным раствором щавелевой кислоты и высушенными. Полоску бумажки закрепляют между стенкой пробирки и ее пробкой, не допуская соприкосновения бумажки со средой. Засеянная пробирка помещается в термостат. При наличии индола нижний конец бумажки окрашивается в розовый цвет.

Культивирование микробов на среде с мочевиной.. Ряд микробов использует мочевину в качестве источника азота. Мочевина расщепляется ферментом уреазой, в результате чего образуется аммиак. Этими свойствами обладают палочки Гофмана, протей, кишечные бактерии и палочка Моргана (непостоянно). К нерасщепляющим мочевину относятся: тифо-паратифозные, дизентерийные бактерии, возбудители коклюша, туляремии, туберкулезные микобактерии и др.

11.

В процессе обмена в-в мкÒ постоянно нуждаются в притоке энергии. Она освобождается при ок-ии пит в-в и в виде АТФ исп-ся клеткой. Сущность ок-я закл-ся в переносе электронов и протонов от донора к акцептору. У мкÒ чаще происходит отщепление 2 атомов Н (дегидрирование) от акцептора при участии ДГ. Биол ок-е может проходить как при участии О₂, так и без него. По отношению к О₂ выделяют следующие группы мкÒ:

1) ОБЛИГАТНЫЕ АЭРОБЫ. Способны плч энергию путём дыхания. Причём обязательно нуждаются в О₂, который используют в качестве конечного акцептора водорода.

2) ОБЛИГАТНЫЕ АНАЭРОБЫ. Процессы биол ок-я протекают у них по типу брожения, а расти и размножаться они могут только в бескислородных условиях, в присутствии О₂ гибнут. Конечным акцептором водорода являются орг соед-я – чаще всего восстанавливается ПВК.

3) ФАКУЛЬТАТИВНЫЕ АНАЭРОБЫ. Могут расти и размножаться и в присутствии и в отсутствии О₂, т.к. их ферментная система способна переключаться с одного типа дыхания на другой.

4) МИКРОАЭРОФИЛЫ. Лучше растут при низком содержании О₂ и повышенном СО₂ («капнофильные мкÒ»).

5) АЭРОТОЛЕРАНТНЫЕ. Могут выживать в присутствии атмосферного кислорода, но не могут использовать его в качестве конечного акцептора водорода (например, молочнокислые бактерии – бродильный метаболизм).

Т.о, факультативные анаэробы выращивают при пониженном содержании кислорода, облигатные – при полном его отсутствии, что достигается путем посева материалов внутрь жидкой или полутвердой питательной среды.

Условия культивирования. Наиболее пригодной для выращивания бактерий–анаэробов является среда Китта–Тароцци (среда обогащения), состоящая из концентрированного МПБ, глюкозы и агара. На дно пробирки для адсорбции кислорода помещают кусочки вареной печени или фарша слоем 1,0–1,5 см и заливают 6–7 мл среды. Перед посевом среду кипятят 10–15 мин для удаления воздуха, затем быстро охлаждают, а после посева заливают стерильным вазелиновым маслом. Материал, содержащий спороносные анаэробы, высевают в две пробирки со средой Китта–Тароцци, одну из них прогревают 30 мин при температуре 80°С для уничтожения вегетативных форм сопутствующей микрофлоры.

Посевы на поверхности плотных сред, разлитых в чашки Петри, культивируют в макро– или микроанаэростате.

Макроанаэростат представляет собой двухстенный аппарат с крышкой. Между стенками аппарата находится вода, источником тепла служит электричество, терморегулятор обеспечивает постоянную температуру. Посевы помещают в анаэростат после того, как температура в нем будет доведена до 37°С, и герметически закрывают крышкой. Анаэростат соединяют с вакуум–насосом и, выкачивая воздух, создают вакуум 3–5 мм. Посевы инкубируют в анаэростате обычно в течение 48 ч. Имеются также портативные анаэростаты. Это небольшие металлические цилиндры с герметически закрывающейся крышкой, постоянная температура в которых создается при помещении их в термостат.

Особенности выделения бактерий–анаэробов. В первый день исследуемый материал микроскопируют и высевают в среду Китта–Тароцци градуированной или пастеровской пипеткой, прогревают при температуре 80°С в течение 30 мин, заливают вазелиновым маслом и посевы помещают в термостат. На второй день помутневшую (нередко вспенившуюся) среду обогащения набирают пастеровской пипеткой, которую опускают через слой вазелинового масла до дна пробирки.

Выделенную культуру микроскопируют и пересевают на плотные питательные среды. Изолированные колонии получают последовательным засевом шпателем бульонной культуры в три чашки Петри с кровяно–сахарным агаром. Чашки Петри помещают в анаэростат при температуре 37°С на 24–48 ч или культуру засевают в столбики расплавленных и остуженных сахарных агаров после предварительного разведения в изотоническом растворе натрия хлорида. На третьи сутки изучают выросшие на чашках Петри колонии (или извлекают колонии из столбиков агара), делают из них мазки, высевают на среду Китта–Тароцци для обогащения чистой культуры.

Чтобы установить видовую принадлежность выделенной культуры бактерий, кроме изучения морфологических, тинкториальных и культуральных особенностей, необходимо определить на ряде Гисса их ферментативные свойства.

Т.о, используют следующие методы получения анаэробных условий:

- ФИЗИЧЕСКИЙ (анаэростат)

- ХИМИЧЕСКИЙ (оксикатор, сорбент – пирогаллол)

- БИОЛОГИЧЕСКИЙ

- Метод ФОРТНЕРА – чашку петри пополам, заливают парафином

- Метод ЧАСОВЫХ СТЁКОЛ – выпуклое засевают аэробами.

- с использованием спец. пит. сред

- уколом в среду ВИЛЬСОН–БЛЕРА (колонии чёрные)

- в стеклянной трубке.

12.

По способу питания микроорганизмы разделяют на аутотрофные и гетеротрофные.

Аутотрофы способны синтезировать из неорганических веществ (в основном углекислого газа, неорганического азота и воды) органические соединения. В качестве источника энергии для синтеза эти микробы используют световую энергию (фотосинтез) или энергию окислительных реакций (хемосинтез).

Гетеротрофы используют для питания в основном готовые органические соединения. Микробы, питающиеся органическими веществами отмерших животных или растительных организмов, называют сапрофитами. К ним относятся бактерии гниения, грибы и дрожжи. Паратрофные микроорганизмы, или паразиты, живут за счет питательных веществ живых клеток организма хозяина. К паратрофам относится большинство болезнетворных микробов.

 

13.

Поток вещества включает процессы поступления питательных веществ (процесс питания), переваривания (расщепление сложных молекул на простые) и дыхания (окисление органических веществ с высвобождением энергии и аккумулированием ее в виде АТФ).

Различают голозойный (поглощение питательных веществ в виде твердых частиц, переваривание в специальных пищеварительных органах, у животных) и голофитный (всасывание через поверхность в виде растворов, у растений, грибов и бактерий) способы питания. Затем питательные вещества должны поступить в клетки.

Механизмы поступления питательных веществ в клетку могут быть следующими.

1. Пассивная (простая) диффузия – за счет разности концентраций веществ в клетке и в среде (очень редко, только вода, кислород и некоторые ионы, чаще другой механизм – облегченная диффузия).

2. Облегченная диффузия – тоже за счет разности концентраций, но с использованием специальных ферментов-переносчиков в мембране (транслоказ), выход продуктов метаболизма осуществляется так же.

3. Активный транспорт (АТ) - против градиента концентраций, с использованием ферментов-переносчиков и затратой энергии, на 1 молекулу перенесенного вещества затрачивается энергия 1 молекулы АТФ. Различают первичный АТ с использованием химической энергии и вторичный АТ с использованием энергии протонного потенциала (симпорт, антипорт, унипорт). Некоторые вещества (фруктоза, глюкоза) проникают в клетку в химически модифицированном виде, обычно в виде фосфатного эфира (транслокация). Пример АТ – натрий-калиевый насос. Внутри клетки больше ионов К⁺, в окружающей среде – ионов натрия, чтобы поддерживать такое равновесие постоянно работают механизмы избирательного переноса ионов К.

4. Транспорт в мембранной оболочке – фагоцитоз (захват мембраной и переваривание твердых частиц, а затем проникновение в клетку), пиноцитоз (захват мембраной капель растворенного вещества). Используется некоторыми типами животных эукариотических клеток.

По типу питания (точнее, по источнику углерода) все организмы делятся на:

· автотрофы – использующие неорганический источник (СО2) и самостоятельно синтезирующие органические вещества;

· гетеротрофы – используют органические источники углерода;

· миксотрофы – смешанный тип.

 

14.

Жизнедеятельность бактерий характеризуется ростом — формированием структурно-функциональных компонентов клетки и увеличением самой бактериальной клетки, а также размножением — самовоспроизведением, приводящим к увеличению количества бактериальных клеток в популяции.

Бактерии размножаются путем бинарного деления пополам, реже путем почкования. Актиномицеты, как и грибы, могут размножаться спорами. Актиномицеты, являясь ветвящимися бактериями, размножаются путем фрагментации нитевидных клеток. Грамположительные бактерии делятся путем врастания синтезирующихся перегородок деления внутрь клетки, а грамотрицательные — путем перетяжки, в результате образования гантелевидных фигур, из которых образуются две одинаковые клетки.

Делению клеток предшествует репликация бактериальной хромосомы по полуконсервативному типу (двуспиральная цепь ДНК раскрывается и каждая нить достраивается комплементарной нитью), приводящая к удвоению молекул ДНК бактериального ядра — нуклеоида.

Репликация ДНК происходит в три этапа: инициация, элонгация, или рост цепи, и терминация.

Размножение бактерий в жидкой питательной среде. Бактерии, засеянные в определенный, не изменяющийся объем питательной среды, размножаясь, потребляют питательные элементы, что приводит в дальнейшем к истощению питательной среды и прекращению роста бактерий. Культивирование бактерий в такой системе называют периодическим культивированием, а культуру — периодической. Если же условия культивирования поддерживаются путем непрерывной подачи свежей питательной среды и оттока такого же объема культуральной жидкости, то такое культивирование называется непрерывным, а культура — непрерывной.

При выращивании бактерий на жидкой питательной среде наблюдается придонный, диффузный или поверхностный (в виде пленки) рост культуры. Рост периодической культуры бактерий, выращиваемых на жидкой питательной среде, подразделяют на несколько фаз, или периодов:

1. лаг-фаза;

2. фаза логарифмического роста;

3. фаза стационарного роста, или максимальной концентрации бактерий;

4. фаза гибели бактерий.

Эти фазы можно изобразить графически в виде отрезков кривой размножения бактерий, отражающей зависимость логариф­ма числа живых клеток от времени их культивирования.

Лаг-фаза — период между по­севом бактерий и началом размножения. Продолжительность лаг-фазы в среднем 4—5 ч. Бактерии при этом увеличиваются в размерах и готовятся к делению; нарастает количество нуклеиновых кислот, белка и других компонентов.

Фаза логарифмического (экспоненциального) роста является периодом интенсивного деления бактерий. Продолжительность ее около 5— 6 ч. При оптимальных условиях роста бактерии могут делиться каждые 20—40 мин. Во время этой фазы бактерии наиболее ранимы, что объясняется высокой чувствительностью компонентов метаболизма интенсивно растущей клетки к ингибиторам синтеза белка, нуклеиновых кислот и др.

Затем наступает фаза стационарного роста, при которой количество жиз­неспособных клеток остается без изменений, составляя максимальный уровень (М-концентрация). Ее продолжительность выражается в часах и колеблется в зависимости от вида бактерий, их особенностей и культивирования.

Завершает процесс роста бактерий фаза гибели, характеризующаяся отмиранием бактерий в условиях истощения источников питательной среды и накопления в ней продуктов метаболизма бактерий. Продолжительность ее колеблется от 10 ч до нескольких недель. Интенсивность роста и размножения бактерий зависит от многих факторов, в том числе оптимального состава питательной среды, окислительно-восстановительного потенциала, рН, температуры и др.

Размножение бактерий на плотной питательной среде. Бактерии, растущие на плотных питательных средах, образуют изолированные колонии округлой формы с ровными или неровными краями (S- и R-формы), различной консистенции и цвета, зависящего от пигмента бактерий.

Пигменты, растворимые в воде, диффундируют в питательную среду и окрашивают её. Другая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима в органических растворителях. И, наконец, существуют пигменты, не растворимые ни в воде, ни в органических соединениях.

Наиболее распространены среди микроорганизмов такие пигменты, как каротины, ксантофиллы и меланины. Меланины являются нерастворимыми пигментами черного, коричневого или красного цвета, синтезирующимися из фенольных соединений. Меланины наряду с каталазой, супероксиддисмутазой и пероксидазами защищают микроорганизмы от воздействия токсичных перекисных радикалов кислорода. Многие пигменты обладают антимикробным, антибиотикоподобным действием.

15. Споры и спорообразование у бактерий, методы выявления спор.

Спорообразование наблюдается в условиях, неблагоприятных для вегетативных форм. У бактерий выделяют 3 вида спор:

1) ЭНДОСПОРЫ (истинные споры) – располагаются внутри#, имеют высокий коэффициент светопреломления.

2) АРТОСПОРЫ – обр-ся в рез фрагментации вегетирующих Б!!

3) ХЛАМИДИОСПОРЫ (микроцисты) – формируются в рез утолщения стенок вегетирующей # и накопления запасных пит в-в.

К спорообразованию способна лишь небольшая группа эубактерий, а из патогенных для чка только – Clostridium и Bacillus. Каждая вегетативная # образует 1 эндоспору. Споры УСТОЙЧИВЫ к температуре, высыханию, радиации и химическим в-вам (включая 70° этанол). Могут сохраняться оч длительное время. Предположительно споры могут храниться в сухой почве до 1000 лет, но фактически уже за 50 лет 90% спор теряют жизнеспособность.

Морфологически споры м.б. круглыми, овальными, эллиптическими, некоторые снабжены «рёбрами жесткости».

ПРОЦЕСС СПОРУЛЯЦИИ начинается сразу при возникновении дефицита питательных в-в и длится около 8ч, при этом никаких внешних источников питания или энергии не требуется. Стимулируют – глюкоза, Р и NH₄, угнетают –пептон, лактоза, NaCl, CaCl₂. Выделяют след ЭТАПЫ:

1) Подготовительная стадия – прекращается деление, начинается накопление липидных включений.

2) Стадия предспоры – появляется эллиптическая оболочка, окружающая участок цитоплазмы с изменённой плотностью и тинкториальными свойствами.

3) Формирование оболочки

4) Стадия созревания споры – происходит её уплотнение и прекращение любых перемещений в #–спорангии.

5) Разрушение родительской #.

В оптимальных условиях происходит прорастание споры. Сначала она активно поглощает воду и набухает, усиливается дыхание, возрастает активность ферментов, происходит выделение АК – активация метаболизма (в этот период спора УТРАЧИВАЕТ ТЕРМОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ). Затем спора лопается и из неё выходит вегетативная форма.

Спорообразующие микроорганизмы - это бациллы и клостридии. Отличия бацилл от клостридий: споры бацилл не превышают диаметр бактериальной клетки, у клостридий - превышает, бациллы по типу дыхания- аэробы, а клостридии- строгие(облигатные) анаэробы. Известны и спорообразующие кокки.

16.

 

17.

 

18.

Основные типы взаимоотношений: симбиоз - позитивные, антибиоз или антагонизм - негативные, нейтрализм – безразличные, индифферентные.

Рассмотрим примеры симбиотических взаимоотношений между микроорганизмами.

Мутуализм – идеальный симбиоз (например, кефирный грибок – это симбиоз молочнокислых, уксуснокислых бактерий и дрожжей, который пока не может быть создан искусственно).

Комменсализм – один получает пользу, второму безразлично (например, кишечная палочка в теплокровном организме).

Метабиоз – специфический вид симбиоза, при котором один вид микроорганизмов продолжает процесс, вызванный другим (например, сожительство аммонитрификаторов, окисляющих белки до токсичного аммиака, и нитрификаторов, окисляющих его до безопасных веществ).

Сателлизм – стимуляция роста одного микроорганизма продуктами жизнедеятельности другого (дрожжи вырабатывают витамины группы В, которые ускоряют рост молочнокислых бактерий).

Синергизм – усиление физиологических функций в сообществе (сочетание молочнокислых микроорганизмов-кислотообразователей и ароматообразователей в заквасках).

Антагонистические взаимоотношения в мире микробов также могут проявляться по-разному:

- паразитизм (бактериофагия);

- продукты жизнедеятельности одного микроорганизмы губительно действуют на другие микроорганизмы (молочнокислые бактерии подавляют гнилостную микрофлору);

- истощение питательного субстрата микроорганизмом, который развивается быстрее (культурные и дикие дрожжи в хлебопечении);

- выделение антибиотических веществ.

19.

Культивирование анаэробов возможно как на обычных средах (МПБ, МПА и МПЖ) с добавлением глюкозы (2%), так и на специальных (кровяном агаре, печеночном бульоне и пр.). Большое значение имеет добавление к средам веществ, обладающих восстановительными свойствами, именно: мура вьинокислого натрия (0,3—0,5); индигокармина (0,1%); глюкозы (1—2%), кусочков свежевырезанных паренхиматозных органов (печень, почка, мозг).

Необходимо всегда перед посевом анаэробов в среды удалять из них кислород. Последнее достигается кипячением жидких сред в водяной бане не менее 10 мин. После кипячения среды быстро охлаждаются погружением в холодную проточную воду или лед.

После посева анаэробов необходимо создать бескислородные условия для их развития. Последнее достигается различными приемами.
1. Механическое прекращение доступа кислорода воздуха достигается для жидких сред наливанием слоя вазелина или парафинового масла на поверхность среды и посевами в глубокие ее слои, а для плотных сред — посевами в расплавленный высокий агар с быстрым охлаждением его, закрыванием засеянной плотной среды слюдяной пластинкой или заливанием вторым слоем расплавленной плотной среды.
2. Замещение воздуха индиферентным газом в пробирках или сосудах, где находятся пробирки. Для этой цели могут служить углекислота и водород.
3. Выкачивание воздуха из пробирок или сосудов (эксикатор, стеклянный колокол) при помощи насосов.
4. Химическое поглощение кислорода. На 100 мл воздуха берут 1 г пирогалловой кислоты и 10 мл 1-проц. едкого натра или на 100 мл воздуха берут 3,0 г гидросульфита натрия и такое же количество углекислого натрия. Смесь слегка овлажняют водой и перемешивают.

Определение микроба. Основано на установлении морфологических и физиологических, а иногда и серологических данных. Для определения микробов устанавливают их форму (палочка, кокк, извитая форма), взаимное расположение (одиночные, цепочки, кучки и пр.); подвижность, окраску по Граму, спорообразование, отношение изучаемого микроба к обычным бактериологическим средам, к аэробиозу; его ферментативные свойства — наличие ферментов на белки (желатина, казеин), на углеводы (лактозу, глюкозу, маннит, глицерин, арабинозу, рамнозу, дульцит и т. д.) и образование пигментов, индола, газов, сероводорода, аммиака.

Патогенность микроорганизмов определяют биологическим методом — заражением опытных животных.

Некоторые микроорганизмы определяются по наличию отдельных характерных для них свойств. Так, туберкулезные палочки в мазках из органов животного определяют по их кислотоупорной окраске. Сибиреязвенные палочки из трупного материала определяют по наличию капсул, а в культурах по образованию локонообразных колоний на МПА и отсутствию гемолиза на кровяном агаре. Большинство других микроорганизмов определяют по сумме морфологических, физиологических, а иногда биологических данных.

 

20. Простые и сложные методы окраски микроорганизмов. Способы окраски спор, жгутиков, капсул, включений.

Для окрашивания препаратов пользуются кислыми, щелочными и нейтральными анилиновыми красителями. Наиболее широкое применение нашли основной и кислый фуксин, метиленовый синий, генцианвиолет и везувин.

Простой способ окраски мазков производится водным фуксином Пфейффера и метиленовым синим Леффлера. Готовят водный фуксин из фенолового фуксина Циля, разводя его дистиллированной водой в соотношении 1:10. Состав РАСТВОРА ФУКСИНА ЦИЛЯ: основной фуксин – 1 г; спирт этиловый 96 % – 10 мл; фенол кристаллический – 5 г; глицерин – несколько капель; вода дистиллированная – 100 мл.

Метиленовый синий Леффлера готовят, прибавляя к 30 мл насыщенного раствора метиленового синего (10 г метиленового синего в 100 мл 96 % этилового спирта) 1 мл 1% NaOH или KOH и 100 мл дистиллированной воды.

После окрашивания красители сливают, препарат промывают водой и высушивают между листками фильтровальной бумаги. На сухой мазок наносят каплю масла и микроскопируют с использованием иммерсионного объектива оптического микроскопа. Способность микробов воспринимать красители называется тинкториальными свойствами.

При окраске щелочным метиленовым синим по Леффлеру (3–5 мин) гранулы волютина у дифтерийных коринебактерий приобретают темно–синий, а палочка – голубой цвет.

При сложных методах окраски мазков применяют два–три различных по цвету красителя, что позволяет дифференцировать микробы и выявить некоторые нюансы в деталях их строения. К таким методам относят окраску по Граму, Цилю–Нельсену, Нейссеру, Бурри–Гинсу, Романовскому–Гимзе и некоторые другие.

При окраске по НЕЙССЕРУ гранулы ВОЛЮТИНА у дифтерийных коринебактерий окрашиваются в сине–черный, а бактерия – в желтый цвет. Мазок окрашивают: 1) 1 мин уксуснокислым метиленовым синим (метиленовый синий – 0,1 г, спирт – 2 мл, ледяная уксусная кислота – 5 мл, дистиллированная вода – 100 мл); 2) сливают краситель и мазок промывают водой; 3) на 20– 30 с наносят раствор Люголя; 4) 1 –3 мин окрашивают везувином (прокипяченная и отфильтрованная взвесь 2 г везувина в смеси 60 мл спирта и 40 мл дистиллированной воды).

Количественное содержание ПЕПТИДОГЛИКАНА, содержащегося в # стенке, определяет характер окраски бактерий и других прокариот по ГРАМУ. Те из них, которые содержат в клеточной стенке большое его количество (около 90 % пептидогликана), окрашиваются по Граму в сине–фиолетовый цвет и их называют грамположительными, все другие, содержащие в оболочке 5–20 % пептидогликана, – в розовый цвет и их называют грамотрицательными. Толщина слоя пептидогликана в клеточной стенке грамположительных бактерий в несколько раз больше, чем у грамотрицательных. Техника окраски по Граму: 1. Фиксированный мазок 1–2 мин окрашивают раствором генцианвиолета (генцианвиолет – 1 г, этанол 96 % – 10 мл, фенол кристаллический – 2 г, вода дистиллированная – 100 мл; по методу Синева его покрывают пропитанной тем же красителем полоской фильтровальной бумаги, которую смачи