Студопедия — Среды для первичного посева исследуемого материала
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Среды для первичного посева исследуемого материала






Среда Клауберга II

К 100 мл стерильной питательной агаровой основы (pH - 7,6), расплавленной и охлажденной до 500, добавляют 3 мл 2% -ного раствора теллурита калия, 10 мл глицериновой смеси и 50 мл «лаковой» крови. Принимая во внимание, что питательная среда разводится глицериновой смесью и «лаковой» кровью в 1,6 раза, при приготовлении данной среды следует увеличить навеску сухого питательного агара в 1,6 раза.

Пример расчета. На этикетке флакона с сухим коммерческим питательным агаром указана навеска, необходимая для приготовления 1 л среды, например, 30 г. Для приготовления 1 л питательной основы для среды Клауберга II следует взять навеску 48 г (т.е. 30 г х 1,6 = 48 г).

Для приготовления глицериновой смеси к 40 мл дефибринированной крови или кровяной смеси добавляют 20 мл химически чистого стерильного глицерина (глицерин стерилизуется при температуре 1100 С в течение 30 мин).

Для приготовления «лаковой» крови к 34 мл стерильной дистиллированной воды добавить 16 мл дефибринированной крови.

 

Кровяно-теллуритовый агар (КТА)

К 100 мл стерильной питательной агаровой основы (pH - 7,6), расплавленной и охлажденной до 500, добавляют 2 мл 2% -ного раствора теллурита калия и 7 мл дефибринированной или 10 мл гемолизированной крови. Вместо крови можно использовать кровяную теллуритовую смесь (10 мл на 100 мл среды), однако при этом на 100 мл КТА добавляют не 2, а 1 мл 2% -ного раствора теллурита калия. Принимая во внимание, что питательная среда разводится кровью примерно в 1,1 раза, при приготовлении данной среды следует увеличить навеску сухого питательного агара в 1,1 раза.

Пример расчета. На этикетке флакона с сухим коммерческим питательным агаром указана навеска, необходимая для приготовления 1 л среды, например, 30 г. Для приготовления 1 л питательной основы для КТА следует взять навеску 33 г (т.е. 30 г х 1,1 = 33 г).

 

Среда Клауберга II и кровяно-теллуритовый агар на аминопептиде

Состав агаровой основы на аминопептиде для среды Клауберга II (расчет на 1 л):

1. Аминопептид....................................................................0,35 л

2. Дистиллированная вода.................................................0,65 л

3. Сухой экстракт кормовых дрожжей (ЭКД)......................... 5,0 г

4. Хлорид натрия....................................................................4,0 г

5. Агар-агар...........................................................................24,0 г

6. L-цистеина гидрохлорид...................................................0,01 г

7. Активированный уголь......................................................3,0 г

Состав агаровой основы на аминопептиде для кровяно-теллуритового агара (расчет на 1 л):

1. Аминопептид....................................................................0,25 л

2. Дистиллированная вода....................................................0,75 л

3. Сухой экстракт кормовых дрожжей (ЭКД)......................... 5,0 г

4. Хлорид натрия....................................................................4,0 г

5. Агар-агар...........................................................................18,0 г

6. L-цистеина гидрохлорид...................................................0,01 г

7. Активированный уголь.......................................................3,0 г

Аминопептид разводят дистиллированной водой, добавляют хлорид натрия, агар-агар и кипятят до расплавления агара, добавляют ЭКД, размешивают до полного его растворения, устанавливают pH-7,8 с помощью 20% раствора NaOH. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр, доводят до первоначального объема дистиллированной водой, добавляют L-цистеина гидрохлорид (можно также использовать L-цистеин, растворенный в 0,1 N растворе HCl) и активированный уголь.

Приготовленные питательные агаровые основы разливают в стерильные флаконы и стерилизуют при 0,5 атм 30 мин. Сохраняются питательные основы при 40 в течение 2 месяцев.

Среда Клауберга II и кровяно-теллуритовый агар готовятся на соответствующих питательных агаровых основах по вышеуказанным прописям.

 

Методика приготовления кровяных и кровяно-теллуритовых смесей

 

Для приготовления питательны сред лучше всего использовать дефибринированную кровь животных - крупного рогатого скота, лошадей,свиней, овец, кроликов. Кровь собирают в стерильные сосуды с бусами, с помощью специально смонтированной системы, тщательно соблюдая правила асептики.

Можно использовать кровь человека с истекшим сроком годности (цитратную и с консервантами), приготовив из нее специальные кровяные смеси. При использовании такой крови, следует удалить жидкую часть отстоявшейся крови, содержащую цитрат натрия, консерванты. К отстоявшейся в сосуде эритроцитарной массе добавить стерильный физиологический раствор или сыворотку крупного рогатого скота до первоначального объема и теллурит калия.

Хорошим сырьем для получения кровяной смеси служит эритроцитарная масса, которая остается после производства гамма-глобулина. К эритроцитарной массе добавляют стерильный физиологический раствор из расчета 1/5 объема эритроцитарной массы и теллурит калия.

Можно также использовать кровяные сгустки, остающиеся от производства гамма-глобулина, после серологических реакций (при отрицательном результате реакций), сгустки плацентарной или абортной крови. Сгустки собирают в стеклянные бутыли с бусами, затем сгустки разбивают. Если сгустки не удается разбит бусами, их замораживают и оттаивают, после чего сгустки легко разрушаются. Эту процедуру можно повторить 2-3 раза. Затем добавляют стерильный физиологический раствор из расчета 1/5 объема сгустков и теллурит калия.

Теллурит калия добавляют к крови или кровяной смеси в качестве консерванта. К каждой порции крови или кровяной смеси в 10 мл, добавляемой к 100 мл агара, приливают 1 мл 2%-ного раствора теллурита калия. Такую кровяно-теллуритовую смесь можно сохранять при 40 до 2-х месяцев.

Пример расчета. К 200 мл эритроцитарной массы, после удаления 50 мл жидкой части отстоявшейся крови, добавляют такое же количество – 50 мл физиологического раствора или сыворотки крупного рогатого скота (без консерванта). Таким образом, получается 250 мл кровяной смеси, что достаточно для приготовления 2,5 л КТА. Для консервирования 250 мл кровяной смеси необходимо добавить 25 мл 2%-ного раствора теллурита калия.

В дальнейшем, при приготовлении кровяно-теллуритовой среды, на каждые 100 мл растопленного и охлажденного до 500 питательного агара добавляют 10 мл консервированной теллуритом калия кровяной теллуритовой смеси и 1 мл 2%-ного теллурита калия.

 

Приготовление раствора телурита калия (K2TeO3)

 

Для приготовления теллуритовых сред используют готовый коммерческий 2%-ный раствор теллурита калия.

При отсутствии готового раствора теллурита калия его готовят следующим образом. В 100 мл дистиллированной воды растворяют 2 г теллурита калия. Для стерилизации раствор прогревают в кипящей водяной бане 30 мин и сохраняют при температуре 40. Кристаллический теллурит калия хранят герметически закрытым в банке из темного стекла.

 







Дата добавления: 2015-06-12; просмотров: 2150. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Картограммы и картодиаграммы Картограммы и картодиаграммы применяются для изображения географической характеристики изучаемых явлений...

Практические расчеты на срез и смятие При изучении темы обратите внимание на основные расчетные предпосылки и условности расчета...

Функция спроса населения на данный товар Функция спроса населения на данный товар: Qd=7-Р. Функция предложения: Qs= -5+2Р,где...

Аальтернативная стоимость. Кривая производственных возможностей В экономике Буридании есть 100 ед. труда с производительностью 4 м ткани или 2 кг мяса...

Тема 5. Анализ количественного и качественного состава персонала Персонал является одним из важнейших факторов в организации. Его состояние и эффективное использование прямо влияет на конечные результаты хозяйственной деятельности организации.

Билет №7 (1 вопрос) Язык как средство общения и форма существования национальной культуры. Русский литературный язык как нормированная и обработанная форма общенародного языка Важнейшая функция языка - коммуникативная функция, т.е. функция общения Язык представлен в двух своих разновидностях...

Патристика и схоластика как этап в средневековой философии Основной задачей теологии является толкование Священного писания, доказательство существования Бога и формулировка догматов Церкви...

Плейотропное действие генов. Примеры. Плейотропное действие генов - это зависимость нескольких признаков от одного гена, то есть множественное действие одного гена...

Методика обучения письму и письменной речи на иностранном языке в средней школе. Различают письмо и письменную речь. Письмо – объект овладения графической и орфографической системами иностранного языка для фиксации языкового и речевого материала...

Классификация холодных блюд и закусок. Урок №2 Тема: Холодные блюда и закуски. Значение холодных блюд и закусок. Классификация холодных блюд и закусок. Кулинарная обработка продуктов...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.012 сек.) русская версия | украинская версия