Поставьте, учтите и оцените РНГА с сыворотками обследуемых и эритроцитарным дифтерийным антигенным диагностикумом для определения антитоксического иммунитета

Специфическое – противококлюшный иммуноглобулин человеческий.

Неспецифическое – назначаются антибиотики только в тяжелых случаях и детям до 1 года (эритромицин, стрептомицин, ампициллин, левомицетин, тетрациклин), применяется симптоматическая терапия (антигистаминные, противосудорожные препараты и средства, стимулирующие работу сердца, кислородотерапия, психотерапия).

Основные понятия и положения темы

Дифтерия – острое инфекционное заболевание, вызываемое видами С. diphtheriае и С. ulcerans, относящихся к роду Соrуnebacterium. Источник инфекции - человек. Эпидемическую опасность представляют больные лица и носители токсигенных штаммов C. diphtheriae. Основной путь передачи – воздушно-капельный, реже воздушно-пылевой, контактный.

Патогенез поражений. Входные ворота для возбудителя – слизистые оболочки ротоглотки (98%), иногда глаз, половых органов (чаще у женщин), поврежденные кожные покровы. Дифтерийная палочка колонизирует ткани в месте внедрения. Продуцируемые факторы патогенности вызывают развитие местного фибринозного воспаления.

Системные проявления токсинемии обусловлены действием токсина на сердце и сосуды, нервную систему (преимущественно периферические симпатические узлы), надпочечники и почки.

Постинфекционный иммунитет антибактериальный и антитоксический. В случае применения с лечебной целью антитоксической сыворотки иммунитет нестойкий, поэтому реконвалесценты подлежат вакцинации в общем порядке.

Поствакцинальный иммунитет – только антитоксический (т.к. вакцина содержит анатоксин).

Основа диагностики дифтерии – бактериологический метод. При отрицательном результате бактериологического метода может использоваться серологический метод диагностики. Серологический метод – ретроспективный со 2-3 недели заболевания. Исследуют парные сыворотки больных в РА и РНГА. В сыворотке крови больных и носителей токсигенных дифтерийных штаммов в РНГА выявляют антитоксины.

Специфическая профилактика и терапия дифтерии. В основе специфической профилактики и терапии дифтерии лежит создание антитоксического иммунитета. Плановую активную иммунопрофилактику дифтерии проводят по календарю прививок вакциной АКДС с 3 месяцев. Вакцина содержит дифтерийный анатоксин. Вакцинацию поводят троекратно с интервалом в 30-40 дней, затем через 5-7 лет (по календарю прививок) проводят ревакцинацию АДС, АДС-М, либо АД-анатоксином. АДС-М-анатоксин со сниженным содержанием антигенов используют для иммунизации детей, имеющих противопоказания к введению АКДС вакцины и детей с аллергической реактивностью.

Экстренную пассивную иммунотерапию проводят введением от 10 тыс. до 350 тыс. МЕ антитоксической противодифтерийной сыворотки в зависимости от тяжести заболевания для нейтрализации экзотоксина.

 

5.3. Самостоятельная работа по теме:

1. Проведите бактериологическое исследование по выделению возбудителя дифтерии от больных с клиническим диагнозом «дифтерия ротоглотки»:

1 этап. Успех бактериологического исследования зависит от своевременного и правильного взятия материала. От больных с ангинами и с подозрением на дифтерию сбор материала необходимо проводить в течение 3-4 часов с момента обращения в ЛПУ до начала какой-либо терапии.

Материалом служит слизь и пленки с миндалин из зева и носа. Взятие материала должны производить специально обученные медицинские работники.

Материал забирают стерильными ватными сухими тампонами отдельно для зева и носа; материал из зева забирают натощак или не ранее, чем через 2 ч после еды; при хорошем освещении с использованием шпателя, не касаясь тампоном языка, слизистых щек и зубов. При наличии налетов материал следует брать с границы пораженных и здоровых тканей, слегка нажимая на них тампоном. Для взятия материала из носа используют один тампон, который вводят сначала в один, а потом в другой носовой ход, не касаясь крыльев носа снаружи.

Посев от одного обследуемого производят на одну чашку с кровяно-теллуритовым агаром (КТА), используя при этом одну половину для посева материала из зева, вторую - для посева материала из носа.

При посеве материал втирают в среду со всех сторон тампоном на участке площадью 2х1 см², а затем этим же тампоном, не меняя положения, производят посев отрывными линиями. Чашки инкубируют при температуре 37°С 24-48 ч.

Посев следует производить на чашки с КТА, согретые при комнатной температуре или в термостате в течение 15-20 мин.

На 2 этапе оцените результаты посева слизи из зева и носа тех же больных на КТА. Дайте характеристику выросшим колониям, отберите и опишите в протоколе те колонии, характеристика которых совпадает с таковой предполагаемого возбудителя. Сформулируйте ответ.

На КТА C. diphtheriae v. gravis образуют серовато-черные колонии диаметром 2-3 мм, плоские, с радиальной исчерченностью (R-форма); C. diphtheriae v. mitis – черные, матовые, диаметром 1-2 мм, выпуклые, с ровными краями (S-форма). В препаратах коринебактерии дифтерии – это грамположительные полиморфные, прямые и слегка изогнутые палочки, расположенные под углом или в виде растопыренных пальцев, иероглифов, паркета и т.д. При окраске по Нейссеру выявляются темно-синие зерна волютина, расположенные на концах клеток. Дифтероиды, в основном, располагаются «частоколом» и обычно лишены зерен волютина.

Характерные колонии отсевают на скошенный сывороточный агар для накопления культуры. Для получения более быстрого предварительного результата колонии отсевают также на среду Пизу (для определения вида) и ставят РП на токсигенность. Посевы помещают в термостат при 37°С на 18-24 часа.

На 3 этапе учтите результаты РП в геле и пробы Пизу. В случае положительной РП и пробы Пизу на цистиназу, выдают ответ лечащему врачу, что выделена токсигенная дифтерийная культура.

Изучите рост культуры, отсеянной из колоний предполагаемого возбудителя, на скошенном сывороточном агаре. Приготовьте фиксированный препарат из исследуемой культуры, окрасьте по Нейссеру (уксусно-кислая синька Нейссера – 60 с, смыть; раствор Люголя – 30 с, слить; хризоидин – 10-15 с, смыть; высушить) и промикроскопируйте. Полученные результаты внесите в протокол.

Выделенную чистую культуру засевают на среды Гисса с глюкозой, сахарозой, крахмалом, цистином (проба Пизу) и мочевиной (проба Закса), а также ставят снова РП.

На 4 этапе учтите результаты 3 этапа исследования:

- оцените результаты биохимической активности выделенной культуры на средах Гисса, среде Пизу (цистиназа) и среде Закса (уреаза);

- оцените результаты РП в агаровом геле, обратив внимание на достоверность полученных результатов.

Ферментативные свойства некоторых видов коринебактерий

Виды	Расщепление до кислоты	Цистиназа	Уреаза
Глюкоза	Сахароза	Крахмал
С. diphtheriae v. gravis v. mitis	+ +	- -	+ -	+ +	- -
С. pseudodiphtheriticum	-	-	-	-	+
С. xerosis	+	+	-	-	+
С. ulcerans.	+	_	+	+	+

 

По результатам всех этапов исследования установите вид возбудителя, его биовар; определите его токсигенность и заполните бланк-направление и бланк-ответ из баклаборатории.

2. Продолжите бактериологическое исследование на бактерионосительство коринебактерий дифтерии у студентов:

Изучите посевы отделяемого из зева на кровяно-теллуритовом агаре, отберите и опишите характерные изолированные колонии.

Из отобранных колоний приготовьте препараты, окрасьте по Граму и Нейссеру, промикроскопируйте.

На основании полученных результатов сформулируйте вывод.

Поставьте, учтите и оцените РНГА с сыворотками обследуемых и эритроцитарным дифтерийным антигенным диагностикумом для определения антитоксического иммунитета.

Определение уровня антитоксического иммунитета осуществляется для оценки эффективности и качества проведения прививочной работы. С этой целью обследуется индикаторная группа населения, включающая в себя лиц, имеющих документально подтвержденных прививочный анамнез и получивших последнюю прививку за 6-18 мес. до обследования.

Для этой цели ставится РНГА в полистироловых планшетах (см. таблицу №1).

Таблица 1