Студопедия — Проба на пролин (на фильтровальной бумаге)
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Проба на пролин (на фильтровальной бумаге)






Фильтровальную бумагу смочить в изатиновом растворе. Высушить бумагу при комнатной температуре.

Нанести 1 каплю мочи, после чего бумагу положить в сухожаровый шкаф при температуре 1000 С на протяжении 10 мин.

После этого промыть бумагу 1H раствором HCl, а затем в дистиллированной воде.

Реактивы: Приготовить 0,2 % раствор изатин в ацетоне (0,2 г на 100 мл ацетона). Сохранять в холодильнике.

Изатиновый реактив готовится эх tempore: до 9,6 мл 0,2% раствора изатина в ацетоне прибавить 0,4 мл ледяной уксусной кислоты.

Положительный результат считается при появление окраски от голубой к синей. Характер окраски определяется избытком следующих аминокислот: пролин – от голубого до синего, фенилаланин – сине-серая, триптофан – коричневая, смесь разных аминокислот – пурпурная. Реакция на пролин положительная при концентрации его в моче не меньше 0,1мг/мл.

Для проведения внутреннего контроля качества необходимо приготовить стандартную смесь: вариант 1) на 100 мл 0,9% раствора NaCl прибавить 10 мг фенилпируват, 50 мг б-кетоглутарата, 15 мг цистина, 30 мг ацетоацетата и 1 г глюкозы. Раствор является стабильным на протяжении 3 месяцев в холодильнике. В таблице 34 подано 2 варианта приготовления контрольного раствора для проведения контроля качества скрининг-тестов мочи.

 

Таблица 34

Контроль качества скрининг-тестов сочи (вариант 2)

№ п/п Ингредиенты Количество вещества на 1000 мл раствора
  Хлорид натрия 5,0 г
  Глюкоза 1,0 г
  Белок (альбумин) 1,0 г
  Ацетон 8,0 мл
  Хлорид кальция 10% (в ампулах) 10,0 мл
  Фруктоза 1,0 г
  Фенилаланин, гистидин, тирозин, лейцин, b-аминомасляная кислота, триптофан 0,05 г каждого реактива

Аминокислоты

В промежуточном метаболизме аминокислоты играют важную роль не только в качестве блоков для построения белков, но также в качестве составной части различных метаболических функций, таких, как реакции цитозольного метилирования и нейропередачи. Большое разнообразие генетических нарушений оказывает как прямое, так и косвенное влияние на метаболизм аминокислот; эти нарушения можно распознавать с помощью анализа уровня аминокислот в соответствующей биологической жидкости.

 

Плазма

Проба:1-2 мл крови с консервантом ЭДТА. Тотчас отделить плазму и, если это возможно, отправить в лабораторию в сухом льду.

 

Количественный анализ содержания аминокислот в плазме (или сыворотке) с помощью ионообменной хроматографии или жидкостной хроматографии высокого давления (ЖХВД) дает полную информацию об изменениях, происходящих в гомеостазе аминокислот. Поэтому он является одним из основных исследований, проводимых у большинства пациентов с подозрением на наличие у них метаболического нарушения.

У пациентов с гипераммониемией или с подозрением на острую аминоацидопатию должен выполняться неотложный анализ. Пробы следует посылать в лабораторию сразу же, а результат должен быть получен через несколько часов. С целью регулирования потребления аминокислот и выявления дефицита незаменимых аминокислот у пациентов, прошедших курс ограничения приема белков или особой метаболической диетотерапии, требуется проведение регулярных (натощак) анализов аминокислот. Количественное определение аминокислот можно надежно осуществить с помощью тандемной масс-спектроскопии (MS-MS) в высушенных на бумаге пятнах крови (карты Гатри) или бомбардировкой с помощью быстрых атомов /масс-спектроскопии (FAB-MS). Для некоторых нарушений, таких как фенилкетонурия и болезнь «кленового сиропа», этот тест является превосходной альтернативой классическим хроматографическим методам, так как он позволяет избежать венепункции у пациента.

Концентрации аминокислот в плазме варьируют в зависимости от метаболического статуса, поэтому забор стандартных проб следует производить через 4-6 часов после последнего приема пищи. Кроме того, зачастую полезно определение количественного содержания аминокислот в послеобеденных пробах (и в пробах, взятых натощак), особенно при подозрении на нарушение энергетического метаболизма. Перед проведением анализов после приема пищи пациентам рекомендуется принимать определенную пищу с целью потребления определенных субстратов (см. главу 11, «Проведение предобеденных и послеобеденных анализов»). Пробы после приема пищи показывают высокие уровни незаменимых аминокислот; чрезмерное повышение уровня аланина указывает на дефект метаболизма пируватов и может свидетельствовать о митохондриальном нарушении. Обычно голодание приводит к повышению уровня аминокислот с разветвленной боковой цепью; большинство же других аминокислот имеют низкие уровни.

Для получения оптимальных результатов после взятия пробы как можно скорее должно производиться отделение плазмы и сыворотки, пробы должны транспортироваться в замороженном состоянии в сухом льду. Для некоторых аминокислот гемолиз или транспортировка цельной крови приводит к её непригодности, как из-за воздействия эритроцитарных ферментов, как аргиназа (которая превращает аргинин в орнитин), так и из-за больших концентраций аминокислот в клетках крови (например, выделение таурина из тромбоцитов). Например, точные величины концентраций аргинина представляют собой важнейшую информацию для постановки диагноза и контроля над лечением дефектов орнитинового цикла. Даже после быстрого отделения плазмы или сыворотки транспортировка их при температуре окружающей среды приводит к ненадежности определяемых уровней глютамата и аспартата (уровни обоих могут быть искусственно завышены), глютамина, аспарагина, цистеина и гомоцистеина (уровень понижен). На концентрации некоторых аминокислот, в том числе на фенилаланин, тирозин и на аминокислоты с разветвленной боковой цепью (валин, изолейцин, лейцин) быстрая перевозка плазмы или сыворотки при температуре окружающей среды оказывает минимальное влияние, что может отвечать требованиям диагностического режима при некоторых нарушениях, таких как фенилкетонурия и некоторые другие аминоацидопатии.

Некоторые аминокислоты, а именно гомоцистеин и триптофан, требуют применения особых методов (обычно ЖХВД) точного определения количественного содержания. Точное определение количественного содержания общего гомоцистеина является важнейшим моментом при оценке гипергомоцистеинемий. В тех случаях, когда пробы должны храниться или перевозиться в лабораторию, для получения надежных результатов необходимо незамедлительное центрифугирование и замораживание плазмы, которую следует перевозить в сухом льду. В лаборатории посредством добавления восстанавливающего вещества гомоцистеин освобождается от дисульфидных связей, и определяется его общая концентрация. Нормальные значения содержания общего гомоцистеина (натощак) у детей в возрасте до 10 лет составляют 3,5-9 мкмоль/л; у детей в возрасте старше 10 лет— 4, 5-11 мкмоль/л; у женщин предклимактерического возраста—6-15 мкмоль/л; у женщин постклимактерического возраста –6-19 мкмоль/л; у мужчин—8-18 мкмоль/л.

Моча

 

Проба: минимум 10 мл мочи; хранить путем добавления двух капель хлороформа. Проба должна перевозиться быстро при температуре окружающей среды.

Анализ аминокислот в моче обычно менее полезен, чем в плазме, так как в почечных канальцах аминокислоты обычно реабсорбируются; поэтому едва различимые и умеренные изменения, происходящие в гомеостазе аминокислот, нельзя распознать посредством анализа мочи. Используются два различных метода: стандартный количественный анализ и качественная оценка с помощью тонкослойной хроматографии или бумажной хроматографии. Качественный анализ, будучи сравнительно недорогим, предоставляет информацию о функционировании почечных канальцев и дает возможность выявить некоторые аминоацидопатии; поэтому он зачастую используется как составная часть обычного селективного скрининга на метаболические заболевания. Количественный анализ аминокислот в моче требуется в том случае, когда подозревается наличие такого дефекта реабсорбции почечных канальцев, как цистинурия; он должен использоваться наряду с анализом плазмы при гипераммониемии в тех случаях, когда повышенная экскреция специфических аминокислот (например, аргининосукцината) в моче может иметь диагностическое значение для некоторых дефектов орнитинового цикла.

 







Дата добавления: 2015-08-31; просмотров: 2189. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Аальтернативная стоимость. Кривая производственных возможностей В экономике Буридании есть 100 ед. труда с производительностью 4 м ткани или 2 кг мяса...

Вычисление основной дактилоскопической формулы Вычислением основной дактоформулы обычно занимается следователь. Для этого все десять пальцев разбиваются на пять пар...

Расчетные и графические задания Равновесный объем - это объем, определяемый равенством спроса и предложения...

Кардиналистский и ординалистский подходы Кардиналистский (количественный подход) к анализу полезности основан на представлении о возможности измерения различных благ в условных единицах полезности...

Лечебно-охранительный режим, его элементы и значение.   Терапевтическое воздействие на пациента подразумевает не только использование всех видов лечения, но и применение лечебно-охранительного режима – соблюдение условий поведения, способствующих выздоровлению...

Тема: Кинематика поступательного и вращательного движения. 1. Твердое тело начинает вращаться вокруг оси Z с угловой скоростью, проекция которой изменяется со временем 1. Твердое тело начинает вращаться вокруг оси Z с угловой скоростью...

Условия приобретения статуса индивидуального предпринимателя. В соответствии с п. 1 ст. 23 ГК РФ гражданин вправе заниматься предпринимательской деятельностью без образования юридического лица с момента государственной регистрации в качестве индивидуального предпринимателя. Каковы же условия такой регистрации и...

БИОХИМИЯ ТКАНЕЙ ЗУБА В составе зуба выделяют минерализованные и неминерализованные ткани...

Типология суицида. Феномен суицида (самоубийство или попытка самоубийства) чаще всего связывается с представлением о психологическом кризисе личности...

ОСНОВНЫЕ ТИПЫ МОЗГА ПОЗВОНОЧНЫХ Ихтиопсидный тип мозга характерен для низших позвоночных - рыб и амфибий...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.01 сек.) русская версия | украинская версия