Занятие № 33
ТЕМА. ХИМИЯ И ОБМЕН ХРОМОПРОТЕИДОВ. РОЛЬ ПЕЧЕНИ В ПИГМЕНТНОМ, УГЛЕВОДНОМ, ЛИ- ПИДНОМ И БЕЛКОВОМ ОБМЕНАХ. ДЕТОКСИ- КАЦИОННАЯ ФУНКЦИЯ ПЕЧЕНИ.
Цель занятия: 1.Повторить особенности строения молекулы гемоглобина. 2.Ознакомиться с синтезом гема. 3.Изучить образование и выведение из организма желчных пигментов. 4.Знать характеристику основных типов желтух. Исходный уровень знаний: - химия сложных белков; - классификация ферментов; - обмен жиров, белков, углеводов; - обезвреживание ядовитых продуктов гниения аминокислот в кишечнике. Содержание занятия. I.2. Строение молекулы гемоглобина; структурные отличия различных типов гемоглобина по глобину, по гему. Синтез гема: место синтеза, химизм до образования порфобилиногена.
Распад гемоглобина в тканях: локализация, химизм превращений до билирубина, дальнейшие превращения и выведение желчных пигментов из организма. Роль печени в белковом, углеводном, липидном, пигментном обмене. Обезвреживающая функция печени. Характеристика основных типов желтух. Обмен железа в организме, роль трансферрина, ферритина, гаптоглобина, гемосидерина.
II.1.Работа № 1. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИЛИРУБИНА В КРОВИ.
Билирубин (свободный или непрямой) образуется в процессе распада гемоглобина в тканях ретикулоэндотелиальной системы, костного мозга, печени, селезенки. Затем он транспортируется альбумином крови в печень, где связывается глюкуроновой кислотой при участии фермента глюкуронилтрансферазы, превращаясь в связанный (прямой) билирубин. Свободный билирубин нерастворим в воде, хорошо растворим в органических растворителях, токсичен, не проходит через почечный фильтр и не выделяется с желчью. Прямой билирубин менее токсичен, хорошо растворим в воде, проходит через почечный фильтр, секретируется в желчь. В кишечнике билирубин последовательно превращается в мезобилирубин, мезобилиноген (уробилиноген), стеркобилиноген, стеркобилин.
Принцип метода. Диазореактив дает с прямым билирубином розовое окрашивание, интенсивность которого пропорциональна концентрации билирубина и может быть определена фотометрически. Непрямой билирубин можно перевести в растворимое состояние добавлением к сыворотке кофеинового реактива и определить с помощью диазореакции. Общая концентрация обеих форм билирубина в сыворотке крови составляет общий билирубин. По разнице между количеством общего и прямого билирубина определяют уровень свободного билирубина. Порядок выполнения работы.
NB! Реактивы к сыворотке сначала добавить в 2 пробирку, а через 8 мин в 1 и в контрольную (тогда экспозиция закончится одновременно). Оставить пробирки на столе на 10 мин. Затем фотоколориметрировать против контроля в кювете 10 мм при зеленом светофильтре (630 нм). По калибровочному графику, зная оптическую плотность, определить концентрацию прямого и общего билирубина, рассчитать количество непрямого билирубина. Клинико-диагностическое значение. В норме содержание общего билирубина составляет 1,7-20,5 мкмоль/л; непрямого - 1,7-17,1 мкмоль/л; прямого - 0,86-4,3 мкмоль/л. У новорожденных общего билирубина в норме до 23,17 мкмоль/л. При физиологической желтухе общий билирубин увеличен, в основном, за счет непрямого вследствие функциональной недостаточности печени. Определение фракций билирубина имеет большое значение для дифференциальной диагностики различных типов желтух. Коэффициент пересчета в единицы СИ равен 17,104. РЕЗУЛЬТАТ:
ВЫВОД:
Работа № 2. КАЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖЕЛЧ- НЫХ ПИГМЕНТОВ В МОЧЕ. Желчные пигменты появляются в моче в виде щелочных солей при желтухе. Моча, содержащая желчные пигменты, имеет желтовато-коричневое или зеленое окрашивание. Большинство химических проб на желчные пигменты основано на способности билирубина и биливердина легко окисляться с образованием различно окрашенных продуктов: биливердина (зеленого), билицианина (синего), холетелина (желтого) и др. Порядок выполнения работы. 1. Проба Гмелина. К 20 кап. конц. HNO3 в пробирку осторожно наслоить исследуемую мочу так, чтобы жидкости не смешивались. Отметить появление на границе раздела жидкостей различно окрашенных колец. (Первым должно появиться зеленое кольцо). РЕЗУЛЬТАТ: 2. Проба Розенбаха (видоизменение пробы Гмелина). Профильтровать около 2 мл исследуемой мочи через маленький фильтр. Затем внести 1 кап. азотной кислоты в конце фильтра и наблюдать появление окрашенных колец, как в пробе Гмелина. РЕЗУЛЬТАТ:
III.2. Контрольные вопросы. Какова нормальная концентрация общего билирубина и его фракций в крови взрослого человека (новорожденного)? Какие фракции билирубина Вы знаете? Чем отличается прямой билирубин от непрямого? Какой желчный пигмент выделяется в норме с мочой и в каком количестве? Что понимают под уробилиногеном?
Материал для самоподготовки. а)1 c.503-508, 551-566, 577, 584. II, III
|
