Студопедия — Метод Сангера и Коулсона (энзиматический метод)
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Метод Сангера и Коулсона (энзиматический метод)






В его основе лежит принцип копирования анализируемой цепи ДНК с помощью ДНК полимеразы. Если врастущую цепь ДНК включается дидезоксинуклеотид, то синтез ДНК обрывается, потому что в 3’-положении отсутствует гидроксильная группа. Если включается дезоксинуклеотид в растущую цепь ДНК, то синтез ДНК может быть продолжен

Образец ДНК разделяют на четыре порции

Во все порции добавляют:

-ДНК-полимеразу

-дНТФ (дАТФ, дТТФ, дЦТФ, дГТФ)

-затравку – олигонуклеотид, комплементарный анализируемой цепи ДНК

В первую порцию добавляют ддАТФ, во вторую – ддТТФ, в третью – ддЦТФ, в четвертую – ддТТФ

1 проба:

-ДНК- полимераза будет включать в растущую цепь нуклеотиды в соответствии с принципом комплементарности

-Напротив Т она может включить либо дАМФ, либо ддАМФ. Процесс включение является вероятностным

-Если в растущую цепь ДНК включится ддАМФ, то синтез ДНК оборвется, если в растущую цепь ДНК включится дАМФ, то синтез ДНК будет продолжен.

С помощью электрофореза определяют длину фрагментов ДНК. Если длина фрагментов ДНК равна 13, 18 и 23 нуклеотидам, следовательно в 13, 18 и 23

положении фрагмента будет находится А, а в анализируемой цепи Т. Аналогично определяют положение других нуклеотидов в анализируемой цепи ДНК.

 

43. Полимеразная цепная реакция

Суть - многократное копированиеопределенного участка ДНК. В течение нескольких часов с помощью ПЦР из одного фрагмента молекулы ДНК можно получить более 50 млрд. идентичных молекул.

Стадии ПЦР-анализа

1. Подготовка пробы

2. Амплификация

3. Детекция посредством электрофореза в агарозном геле

Компоненты реакционной смеси ПЦР

-Праймеры – искусственно синтезированные олигонуклеотиды (15-30 п.н.) идентичные концевым участкам ДНК-мишени, способные с ними образовывать гибриды

-Tag-полимераза – термостабильная ДНК-полимераза

дНТФ

-Анализируемый образец

Режим эксперимента

1. Денатурация – реакционную смесь нагревают до 92-95 оС, в результате двухцепочечная ДНК расплетается

2. Отжиг – праймеры присоединяются к одноцепочечным ДНК

3. Элонгация – Tag-полимераза обеспечивает синтез второй цепи ДНК

Цикл повторяется 30-35 раз







Дата добавления: 2015-08-12; просмотров: 660. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Практические расчеты на срез и смятие При изучении темы обратите внимание на основные расчетные предпосылки и условности расчета...

Функция спроса населения на данный товар Функция спроса населения на данный товар: Qd=7-Р. Функция предложения: Qs= -5+2Р,где...

Аальтернативная стоимость. Кривая производственных возможностей В экономике Буридании есть 100 ед. труда с производительностью 4 м ткани или 2 кг мяса...

Вычисление основной дактилоскопической формулы Вычислением основной дактоформулы обычно занимается следователь. Для этого все десять пальцев разбиваются на пять пар...

ОСНОВНЫЕ ТИПЫ МОЗГА ПОЗВОНОЧНЫХ Ихтиопсидный тип мозга характерен для низших позвоночных - рыб и амфибий...

Принципы, критерии и методы оценки и аттестации персонала   Аттестация персонала является одной их важнейших функций управления персоналом...

Пункты решения командира взвода на организацию боя. уяснение полученной задачи; оценка обстановки; принятие решения; проведение рекогносцировки; отдача боевого приказа; организация взаимодействия...

Вопрос 1. Коллективные средства защиты: вентиляция, освещение, защита от шума и вибрации Коллективные средства защиты: вентиляция, освещение, защита от шума и вибрации К коллективным средствам защиты относятся: вентиляция, отопление, освещение, защита от шума и вибрации...

Задержки и неисправности пистолета Макарова 1.Что может произойти при стрельбе из пистолета, если загрязнятся пазы на рамке...

Вопрос. Отличие деятельности человека от поведения животных главные отличия деятельности человека от активности животных сводятся к следующему: 1...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.009 сек.) русская версия | украинская версия