Студопедия — Методы определения белков, выделение, очистка.
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Методы определения белков, выделение, очистка.






 

1) Качественные реакции

2) Количественное определение белка методом Кьельдаля – классический метод, с которым сравниваются результаты всех современных и его модификаций(ГОСТ); метод Лоури; биуретовый метод. Два последние простые для серийных анализов.

3) Выделение и очистка белка:

Первый этап-разрушение клеточной структуры материала(гомогенизаторы, дезинтеграторы). Следует учесть, что механическое воздействие может сопровождаться частичной денатурацией.

Второй этап-экстракция белков, т.е. извлечение, перевод белков в р-р (водой-альбумины, солью-глобулины, спиртом-проламины, щелочным р-ром-глютеины)

Третий этап-осаждение, выбор способа и режима зависит от задачи и индивидуальных особенностей объекта:

А) Осаждение трихлоруксусной кислотой позволяет отделить белки от а.к. и пептидов, но сопровождается необратимой денатурацией.

Б) Осаждение органическими растворителями-широко используется для получения ферментных препаратов.

В) Высаливание белка сульфатом алюминия с сохранением нативной структуры.

Г) Осаждение в изоэлектрической точке, изменяя pHбелкового р-ра, добиваемся седиментации с сохранением структуры.

Д) Осаждение тепловой коагуляции-проводят варьируя тепловую обработку белкового продукта. Термолабильные белки в осадок, термостабильные - в р-ре.

Четвертый этап-очистка белков. Если в дальнейшем необходимо получить белковый препарат высокой степени чистоты, то применяют методы фракционирования, основанные на индивидуальных ф.-х. свойствах различных белков:

а) Метод гельфильтрации (метод молекулярных сит) с его помощью разделяют компоненты по молекулярной массе. В качестве геля применяют препараты сефедаксов. Из разделительной колонны, заполненной гранулами с определенной величиной ячейки, белки высокой молекулярной массы будут выходить раньше, низкомолекулярные-позднее.

б) электрофоретическое разделение белков-разделение в электрическом поле постоянного тока. В буферных р-рах амфотерные белковые молекулы обладают зарядом и в электрическом поле постоянного тока движутся к аноду(-) или к катоду(+)

в) изоэлектрическое фокусирование – метод основан на том. Что разные белки имеют различные изоэлектрические точки. Разделение ведется в колонке, по высоте которой создается градиент pH. Белок движется под воздействием эл. Поля, пока не достигнет той области колонки, которая соответствует его изоэлектрической точке. Суммарный заряд белка становится равным 0, белок теряет свою подвижность и остается в этой зоне pH.

г) аффинная хроматография(по сродству) – основана на способности белков специфически и обратимо связываться с лигандами.

16. белки пищевого сырья: белки злаковых культур. Белки пшеницы, ржи, овса, ячменя, кукурузы, риса, гречихи.

А.к. состав суммарных белков злаковых культур определяется а.-к. составом отдельных фракций: альбуминов(Н2О), глобулинов(соль), проламинов(спирт) и глютелинов(NaOH).

У альбуминов высокое содержание лизина, треонина, метионина, изолейцина и триптофана. Глобулиновая беднее, чем альбуминовая по содержанию лизина, триптофана и метионина. Но в обеих фракцияхвысокое содержание глютаминовой и аспарагиновой к-т, но низкое содержанием пролина. В проламиновой фракции высокое содержание лизина, мало треонина, триптофана, аргинина и гистидина. Глютелиновая по а.-к. составу занимает промежуточное положение между проламинами и глобулинами, т.е. аргинина, гистидина и лизина в них больше, чем в проламинах.

Белки неравномерно распределяются между морфологическими частями зерна. Их основное кол-во(до 70%) локализовано в эндосперме, меньшее-в алейроновом слое(15%) и зародыше(20%). В эндосперме белки распределены таким образом, что концентрация их снижается при продвижении от субалейронового слоя к центру. Белки зародыша и алейронового слоя представлены в основном альбуминами и глобулинами, выполняющими каталитическую функцию(ферменты, отвечающие за прорастание зерна). Белки эндосперма – это альбумины, глобулины, проламины и глютелины. Это в основном запасные белки(до 80%), большая часть из которых приходится на проламины и глютелины. При изучении белкового комплекса любых культур происходит разрушение природной структуры белковой молекулы. Разрушаются или изменяются нековалентные связи, т.е. происходит первичная денатурация. Далее экстракция альбуминов, связанная с нарушением гидрофобного взаимодействия, меняет структуру белковой молекулы. При извлечении щелочерастворимых белков происходит разрыв дисульфидных связей.

Белки пшеницы (альбумины 5%, глобулины 13%, проламины 36%, глютелины 28%). В зерне пшеницы проламины и глютелины образуют клейковину. Проламин пшеницы наз-ся глиадин(лучше растворяется в спирте 60%, изоэл. точка pH=7.0). В нем мало лизина и триптофана, но много пролина и глютаминовой к-ты. Глютелин пшеницы наз-ся глютенин, содержит много глютаминовой к-ты. Алюбумин пшеницы наз-ся лейкозин. Легко денатурирует с потерей растворимости. Пшеница хар-ся низким содержанием лизина, изолейцина и треонина, немного метионина. Главное достоинство-клейковина-сложный белковый комплекс, состоящий из двух фракций глиадиновой и глютениновой(1:1) Содержание белка 85%, углеводов 15%, липидов от 2 до 8%.

Клейковина разного качества имеет одинаковый а.-к. состав и состоит из одних и тех же белковых соединений. В крепкой клейковине плотность упаковки белковых компонентов выше, чем слабой. В формировании клейковины задействованы дисульфидные и водородные связи. Прочность и подвижность структуры клейковины создается специфическими реологическими св-ми(упругость, вязкость, растяжимость), что объяснено наличием нековалентных легко рвущихся и легко возникающих свойствах. Качество клейковины связано с кол-вом дисульфидных связей и оценивается отношением –S-S- связей и кол-ву –SH- групп. В зависимости от реологических групп. В зависимости от реологических свойств клейковины сорта пшеницы делят на твердые и мягкие. У твердой – клейковина крепкая, коротко рвущаяся, тесто прочное, с высокой упругостью, малорастяжимое(макаронные изделия, манная крупа). У мягкой пшеницы клейковина упругая, эластичная и растяжимая. Тесто имеет хорошую газоудерживающую способность, имеет пористую структуру. Группа мягкой пшеницы разделяется на сильные, слабые и средние сорта. Мука из сильных сортов дает упругое эластичное тесто, хлеб хорошей формы с пористой. Тесто имеет ограниченную растяжимость и понижает газоудерж. способность. При подмешивании сильной пшеницы к муке с низкими хлебопекарными св-ми получаем муку хорошего качества. Сорта сильной пшеницы-улучшители. Мука средней пшеницы – относит.хороший хлеб, но улучшителем не явл-ся. Слабые сорта дает низкий расплывчатый хлеб с плохой пористостью.

Белки зерна ржи. (альб.-24%, глоб.-14%, прол.-31%,глют.-23%) Рожь бедна лизинном и изолейцином, незначит. содержание метионина. Неплохо сбалансир. По а.к. составу. Зерно содержит глиадин и глютенин, в обычных условиях клейковина не отмывается, т.к. а.-к. состав белков ржи отлч-ся от а.к.с. пшеницы, содержит меньшее кол-во водородных и –S-S- связей. Проламины ржи наз-ся секамин. Хлеб из чисто ржаной муки нужд-ся в улучшителях.

Белки ячменя. (альб.-6%, глоб.-7%,прол.-42%,глют.-27%) ячмень беден лейцином и изолейцином. Проламины ячменя наз-ся гордеин. Клейковина похожа на слабую коротко рвущуюся клейковину пшеницы(серый цвет, плохая растяжимость). Мука имеет неприятный вкус. Исп-ся там, где нет пшеницы и ржи.

Белки овса (альб.-8, глоб.-32, прол.-14, глют.-34) богаты лизином. Проламиновая фракция (авелин), содержит большое его кол-во. Преобладающая фракция-глютелиновая. По сод-ию отдельных а.к. белки овса отлич-ся высокой биологической ценностью.

Белки кукурузы (а-10%, глоб-5, п-30, глют.-40) Проламин кукурузы-зеин. По а.к. составу сбалансированы плохо. Может применятся при изготовлении бумаги и пластмассы, т.к. не содержит лизина, ни триптофана вообще.

Рис (а-11, глоб.-5, прол.-4, глют.-63.) Основная масса белков представлена глютелинами(оризеин) в состав белков риса входят все незаменимые а.к., что обуславливает его высокую биологическую ценность. Первая лимитирующая кислота-лизин, вторая-трионин. Такой а.к.с. делает рис неотъемлемым компонентом детского и диетического питания, а.к.с. риса приближается к гречихе.

Гречиха (а.-22, глоб.-47, прол.-1, глют.-12) Преобладающая фракция –глобулиновая. Вторая-альбуминовая. Белки гречихи отл-ся отличным составом а.к. По содержанию лизина превосходит зерно пшеницы, ржи и риса, приближаясь к сое. По сод-ию валина приравниваются к молоку, по сод-ию лейцина к говядине, по фенилаланину и триптофану не уступают белкам животного происхождения(молоко, мясо.) Лимитирующим для гречихи является содержание метионина(серосодержащие а.к)

 







Дата добавления: 2015-08-12; просмотров: 1792. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Аальтернативная стоимость. Кривая производственных возможностей В экономике Буридании есть 100 ед. труда с производительностью 4 м ткани или 2 кг мяса...

Вычисление основной дактилоскопической формулы Вычислением основной дактоформулы обычно занимается следователь. Для этого все десять пальцев разбиваются на пять пар...

Расчетные и графические задания Равновесный объем - это объем, определяемый равенством спроса и предложения...

Кардиналистский и ординалистский подходы Кардиналистский (количественный подход) к анализу полезности основан на представлении о возможности измерения различных благ в условных единицах полезности...

В эволюции растений и животных. Цель: выявить ароморфозы и идиоадаптации у растений Цель: выявить ароморфозы и идиоадаптации у растений. Оборудование: гербарные растения, чучела хордовых (рыб, земноводных, птиц, пресмыкающихся, млекопитающих), коллекции насекомых, влажные препараты паразитических червей, мох, хвощ, папоротник...

Типовые примеры и методы их решения. Пример 2.5.1. На вклад начисляются сложные проценты: а) ежегодно; б) ежеквартально; в) ежемесячно Пример 2.5.1. На вклад начисляются сложные проценты: а) ежегодно; б) ежеквартально; в) ежемесячно. Какова должна быть годовая номинальная процентная ставка...

Выработка навыка зеркального письма (динамический стереотип) Цель работы: Проследить особенности образования любого навыка (динамического стереотипа) на примере выработки навыка зеркального письма...

Меры безопасности при обращении с оружием и боеприпасами 64. Получение (сдача) оружия и боеприпасов для проведения стрельб осуществляется в установленном порядке[1]. 65. Безопасность при проведении стрельб обеспечивается...

Весы настольные циферблатные Весы настольные циферблатные РН-10Ц13 (рис.3.1) выпускаются с наибольшими пределами взвешивания 2...

Хронометражно-табличная методика определения суточного расхода энергии студента Цель: познакомиться с хронометражно-табличным методом опреде­ления суточного расхода энергии...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.014 сек.) русская версия | украинская версия