Тема: гель-хроматографияСиноним – гель-фильтрация. В этом простейшем методе хроматографии используется колонка, заполненная частицами полимерного материала, образующего поры разных размеров. В подавляющем большинстве случаев применения гель-фильтрации для биологических целей рабочей жидкостью служат водно-солевые растворы. Таким образом, неподвижная фаза представлена жидкостью, находящейся внутри пор, а подвижная фаза – той же жидкостью, свободно протекающей по колонке. В гель-хроматографии молекулы разделяемых веществ не должны обладать никаким специальным сродством к неподвижной или подвижной фазам. Разделение веществ происходит в соответствии с размерами молекул. Если в составе смеси имеются очень крупные молекулы, вовсе не проникающие внутрь пор, то они будут выходить из колонки или достигать края хроматографической пластины вместе с передним фронтом подвижной фазы («фронтом элюции»). В то же время мелкие молекулы, свободно диффундирующие внутрь гранул, часть времени будут находиться в неподвижной фазе. Статистически эта часть времени одинакова для всех молекул такого размера и зависит от соотношения объемов жидкости в неподвижной и подвижной фазах. Таким образом, все мелкие молекулы достигнут конца хроматографического пути более или менее одновременно и заведомо позднее, чем крупные. Молекулы промежуточных размеров должны, очевидно, перемещаться вдоль колонки или пластины с промежуточной скоростью.
Гель-хроматография обычно применяется для анализа высокомолекулярных соединений, например, белков или синтетических полимеров.
|
