Смотреть лабораторную работу № 25

II. Краткие теоретические сведения.

Исследуя спектры поглощения можно производить количественный анализ смеси двух или нескольких веществ. Для данного анализа необходимо определить величину оптической плотности при двух или при нескольких длин волн

Оптическая плотность равна смеси равна сумме оптических плотностей компонентов:

Д = Д_а + Дв; тогда

и

Решая совместно вышеуказанные уравнения, получим выражение для концентрации веществ А (тирозин) и В (триптофан):

и

где - оптическая плотность смеси при двух длинах волн l₁ и l₂;

- молекулярные коэффициенты экстинкции тирозина и триптофана соответственно при тех же длинах волн;

С _а и С в – молекулярные концентрации тирозина и триптофана соответственно.

Длины волн, при которых производятся измерения, выбираются так, чтобы при l₁, поглощая преимущественно тирозин. А при l₂ – триптофан. Точность определения тем больше, чем больше различие молекулярных коэффициентов экстинкции определяемых веществ при каждой из этих двух длин волн. Это условие выполняется в большинстве случаев, если длины волн l₁ и l₂ соответствуют максимумам поглощения компонентов.

 

III. Порядок выполнения работы

1. Приготовить раствор яичного белка в концентрации 2 мг/мл в 0,1 Н растворе NaOH.

2. Установите рукоятку 11 в работе положения «Ф» в схеме включен (сурьмяно-цезиевый фотоэлемент) и рукоятку 9 в положение «Д» (включения дейтериевая лампа).

3. Закройте фотоэлемент, поставив рукоятку 17 шторки в положение ЗАКР., и рукоятный 8 установите ширину щели примерно 0,1 мм.

4. Включите тумблер СЕТЬ, должна загореться сигнальная лампа Д (стабильная работа СФ-26 после включения в течение 1 часа).

5. При переключении ламп, после минутного прогрева лампы автоматически загораются и одновременно загорается соответствующая индикаторная лампа.

6. Установите требуемую длину волны (270 нм), вращая рукоятку 6 сторону увеличения длин волн. Если при этом шкала повернется на большую величину, то возвратите ее назад на 3-5 нм и снова подведите к требуемому делению.

7. Поставьте рукоятку 19 в положение «1» (рабочее положение). Если поток излучения недостаточен и измеряемый контрольный образцы значительно поглощают излучение, установите рукоятку в положение «2», «3» или «4». При работе в положение КАЛИБР или «´0,01» рукоятки 16 рукоятку 19 установите также в одно положение «2», «3», «4».

8. Установите на пути потока излучения контрольный образец, перемещая каретку 10. При отсутствии образца сравнения величина потока, проходящего через свободное окно держателя фильтров, принимается за 100% пропускания.

9. Установите рукоятку 16 в положение «1».

10. Установите стрелку измерительного прибора на нуль рукояткой 18 НУЛЬ.

11. Откройте фотоэлемент, поставив рукоятку 17 шторки в положение ОТКР.

12. Установите стрелку измерительного прибора на деление «100%», вращая рукоятку 8 механизма изменения ширины щели.

13. Установите в рабочее положение изменяемый образец, перемещая каретку рукояткой 10, и снимите отсчет по шкале оптической плотности Д при длинах волн 270 и 300 нм. Данные занесите в таблицу 1.

14. Выведите из потока излучения измеряемый образец и введите контрольный образец при этом стрелка измерительного прибора должна вернуться к делению «100%».

15. Рассчитайте по уравнениям (1) и (2) содержание тирозина и триптофана в белке.

Таблица 1