Возбудитель рожи В-гемолитический стрептококк группы А,

включающей большое число серологических вариантов (49 ти­пов). Бета-гемолитические стрептококки группы А являются факультативными анаэробами и широко распространены в ок­ружающей среде, к условиям которой довольно устойчивы. Хорошо переносят высушивание, низкую температуру, при на­гревании до 56 °С погибают через 30 мин. Дезинфицирующие средства (хлорная известь, хлорами, лизол и др.) в рабочих концентрациях губительно действуют на стрептококка. Чувст­вительность к антибиотикам (пенициллин, тетрациклин, лево-мицетин и др.) высокая.

2. Малая высеваемость стрептококков является, по-видимому, результатом подавления их роста более устойчивым стафило­кокком, а также реакциями сенсибилизированного организма. Ассоциация стрептококка с другими микробами, чаще со ста­филококком, имеет значение в ряде случаев при развитии гнойных местных осложнений, некроза и сепсиса. В этиологии неосложненных форм рожи другие микробы, в том числе ста­филококк, значения не имеют. Лабораторные исследования в постановке диагноза значения не имеют.

 

Вопрос 70. Возбудитель газовой гангрены

1. Морфология, биология и культуральные свойства возбудителя газовой гангрены

2. Устойчивость к физическим и химическим факторам

3. Лабораторная диагностика газовой гангрены

1. Газовая гангрена — заболевание, возникающее в результате попадания в раны патогенных анаэробов после травм, ранений и т. д. Классическая картина газовой гангрены с явлениями мионекроза, отека тканей, сильного газообразования в них, а также общей интоксикации, "гемолитической анемии" бывает обусловлена главным образом Clostridium perfringens типа А. Однако заболевание могут вызывать и другие типы клостридий (В, С, D, E, F). Как правило, возникают ассоциации несколь­ких типов клостридий со стрептококками, стафилококками, кишечной палочкой.

Морфология: клостридий перфрингенс типов А, В, С, D, Е и F —

крупные грамположительные образующие капсулу палочки. Жгутиков не имеют, неподвижны, образуют при определенных условиях центральные или субтерминальные споры. Клетки разных штаммов могут отличаться друг от друга по своей тол­щине и длине. В одних случаях это короткие толстые палочки, в других — длинные нити с заостренным краем, клетки в 6—8 очаговых культурах грамположительны, хорошо красятся метиленовым синим и другими основными красками. Старые клетки становятся грамотрицательными. Они не воспринима­ют метиленовый синий, и их окрашивают фуксином.

Биология, кулътуральные свойства возбудителя газовой гангрены:

в жидких анаэробных питательных средах, приготовленных из гидролизатов мяса или казеина, при 37—43 °С, клостридии перфрингена всех типов растут быстро (3—8 ч) с бурным газо­образованием, изменением рН-среды в кислую сторону. На щелочных средах, богатых белком и не содержащих сбражи­вающих углеводов, возбудители газовой гангрены способны образовывать споры.

Существуют следующие варианты колоний:

• гладкие (S);

• слизистые (М);

• шероховатые (R).

Гладкие формы колоний на поверхности агара в начале роста напоминают пенные капли росы, затем теряют свою прозрач­ность. Они прочные, сочные, куполообразные, с гладкой бле­стящей поверхностью и ровным краем. В мазках из S-форм колоний содержатся короткие бескапсульные клетки.

Слизистые (М) колоний похожи на гладкие и отличаются от последних более высоким куполом и слизистой консистенцией. Они состоят из клеток, имеющих капсулу, которые при росте на жидких средах могут образовывать густую слизь.

Шероховатые (R) варианты на плотных средах имеют колонии неправильной формы с изрезанным "фестончатым" краем, иногда с отростками в виде шипов и неровную бугристую по­верхность.

Колонии возбудителя газовой гангрены, выросшие на поверх­ности кровяного агара, часто окружены 1 или 2 зонами гемо­лиза и при выдерживании на воздухе приобретают зеленоватую окраску. Большинство штаммов клостридин перфригенс обла­дают слабыми протеолитическими свойствами, вырабатывают ферменты, расплавляющие желатин. Все штаммы сбраживают с образованием кислот и газа глюкозу, галактозу, лактазу, ле­вулезу, мальтозу, сахарозу и не ферментируют маннит.

Образование токсинов: деление клостридии перфрингенс на 6 типов основано на способности этих микроорганизмов выраба­тывать различные по своим антигенным свойствами летальные и некротические токсины. Большинство этих веществ выделяется в окружающую среду в процессе роста микроорганизмов, не задерживаясь внутри клеток. Различные типы возбудителя вызывают определенные заболевания людей и животных. Кло­стридии перфрингенс А, вырабатывающий а-токсин в большом количестве, считается в данное время основным возбудителем газовой гангрены, вызывающим это заболевание в 70—80% случаев.

2. Устойчивость к физическим и химическим факторам. Токсины Clostridium perfringens относительно быстро (несколько часов) разрушаются под влиянием различных факторов внешней среды.

Наибольшей устойчивостью отличаются прототоксины, кото­рые в неактивной форме могут переносить даже кипячение (до 30 мин — 1 ч). В содержимом кишечника трупов токсины мо­гут сохранять свою активность в течение нескольких часов, а иногда даже суток. Затем они разрушаются.

Устойчивость клостридии перфрингенс к действию различных физических и химических факторов зависит от индивидуаль­ных свойств штамма. Вегетативные формы этих микробов бы­стро Погибают при действии кислорода воздуха, солнечного света, высокой температуры, кислот, щелочей, спиртов, де­зинфицирующих средств и антибиотиков, действующих на грамположительную флору. Споры клостридии перфрингенс типов С, Д и Е убиваются обычно при кипячении в течение 15— 30 мин. Однако отдельные штаммы типа А образуют термоус­тойчивые споры, переносящие кипячение или автоклавирова-ние от 1 до 6 ч. Такие споры могут попадать из окружающей среды на сырье, используемое для изготовления различных пищевых продуктов (в том числе консервов), и способны вы­держать длительную обработку. При определенных условиях жизнеспособные споры могут прорастать.

3. Лабораторная диагностика газовой гангрены

Для бактериологического исследования на газовую гангрену берут экссудат, кусочки измененной ткани из раны больного, а так­же кровь из вены. Трупный материал следует брать по воз­можности быстрее после смерти, так как в ткани трупа могут проникать различные патогенные анаэробные микроорганиз­мы, всегда имеющиеся в желудочно-кишечном тракте. Все взя­тые материалы помещают в стерильную герметически закры­вающуюся стеклянную посуду и немедленно пересылают в бактериологическую лабораторию. Все пробы подвергают мик­роскопии. Для этой цели готовят мазки-отпечатки и окраши­вают их по Граму. Наличие в пробе большого количества крупных грамположительных палочек служит ориентировочным признаком для подозрения на клостридиальную инфекцию.

Бактериологическое исследование: плотные материалы стериль­но измельчают, кровь или экссудат подвергают центрифугиро­ванию в течение 30 мин. Взвесь исследуемого материала засе­вают на кровяной агар, агар Вильсона-Блэра и бензидиновый агар. Посевы инкубируют в анаэробных условиях при 37 °С, просматривают на следующий день и затем через каждые 2 дня (до 7 суток) для выделения подозрительных колоний. Выра­женные колонии, вызывающие гемолиз на кровяном агаре, проверяют на чистоту и наличие грамположительных палочек (путем микроскопии) и затем отсевают в пробирки с жидкой казеиново-грибной средой под слоем вазелинового масла либо на анаэробную среду Китта-Тароцци. Выделенные чистые куль­туры проверяют на токсичность и вирулентность, а также про­водят биологическую пробу на лабораторных животных (мы­шах, морских свинках).

 

Вопрос 71. Возбудитель столбняка

1. Морфология, биология и культуральные свойства возбудителя столбняка

2. Токсины

3. Лабораторная диагностика столбняка

1.Столбняк — инфекция, возникающая после различных травм и ранений в связи с загрязнением ран почвой, содержащей столб­нячную палочку (Clostridium tetani).

Морфология: возбудитель столбняка — это подвижная палочка 4—8 мкм в длину и 0,4—0,6 мкм в ширину с закругленными концами. Образует крупные споры, в результате этого приоб­ретает вид барабанной палочки. Имеет жгутики, подвижна. Хорошо окрашивается всеми анилиновыми красками. По Гра­му красится положительно, но в старых культурах встречаются и грамотрицательные особи. Споры окрашиваются плохо. При окраске метиленовым синим или по Граму споры имеют вид колечек. Вегетативная форма бактерий столбняка малоустой­чива к воздействию температуры и химических агентов, тогда как их споры обладают значительной устойчивостью. Во влажной среде споры выдерживают нагревание до 80 °С в течение 4—6 ч и более, при кипячении они погибают через 40—50 мин. В сухом состоянии споры переносят еще более высокие темпе­ратуры* нагревание при 115 °С разрушает их только через 20 мин, споры совершенно нечувствительны к низким темпе­ратурам. Они годами переносят температуру 40—60 °С, 1%-ный раствор сулемы или 5%-ный раствор карболовой кислоты уби­вают споры только через 10—12 ч. Под действием рассеянного света споры погибают только через длительное время. Будучи защищены от света, в почве и на различных предметах внеш­ней среды споры могут сохраняться в течение десятков лет. В условиях анаэробиоза при температуре 37 "С, достаточной влажности и в присутствии аэробных бактерий (стафилококки, сенная палочка и др.) споры прорастают в развивающиеся ве­гетативные формы.

Биология, культуральные свойства: возбудитель столбняка — строгий анаэроб и очень чувствителен к кислороду. Микроб хо­рошо растет в глубине жидких питательных сред при наличии в них глюкозы, кусочков печени или мышц {среда Китта-Тароцци). Для культивирования столбнячной палочки применя­ют бульон Мартена (мясо-пептонный с добавлением глюкозы, подщелоченной раствором соды), среду Вейнберга (мясной агар).

Питательные среды должны иметь нейтральную или слабокис­лую реакцию. Жидкие среды заливаются слоем вазелинового масла, и перед посевом из них удаляют кислород путем кипя­чения на водяной бане в течение 10—15 мин. Оптимальная температура роста 35—37 °С. На плотных питательных средах — кровяном и печеночном агаре — столбнячная палочка растет только при полном удалении кислорода. На чашках с агаром при температуре 35—37 °С через 2—4 суток вырастают отдельные прозрачные или слегка сероватые колонии величиной 2—5 мм с неровной зернистой поверхностью, края шероховатые, ветвя­щиеся. На кровяном агаре колония бывает окружена зоной ге­молиза. При почве на скошенном агаре в пробирках микроб растет в виде тонких, едва заметных нитевидных отростков, выползающих на поверхность агара. В столбике желатина через 5—6 дней растет в виде елочки, желатина при этом не разжижая. В биохимическом отношении возбудитель столбняка малоакти­вен, обладает слабовыраженными сахаролитическими и протео-литическими свойствами.

Антигенная структура: по антигенной структуре возбудитель столбняка неоднороден. Выделяют групповой соматический О-антиген и типоспецифический жгутиковый Н-антиген, по которому различают 10 серологических типов. Все они выраба­тывают один и тот же специфический токсин.

2. Токсинообразование является важнейшей биологической особенно­стью вегетативной формы столбнячной палочки. Столбнячный токсин относится к экзотоксинам и состоит из 2 фракций:

• тетаноспазмина со свойствами нейротоксина, который пора­жает двигательные клетки центральной нервной системы и вы­зывает сокращение поперечно-полосатых мышц;

• тетаногемолизина, лизирующего эритроциты.

Экзотоксин является одним из сильнейших бактериальных ядов, уступая по силе лишь ботулиническому токсину. Токсин не содержит углеводов, относится к протеинам. Он малостоек, быстро разрушается под влиянием нагревания, солнечного све­та, щелочной среды. Ферменты и энзимы желудочно-кишеч­ного тракта не разрушают токсин, но он не всасывается через слизистую оболочку кишечника, в связи с чем безопасен при попадании через рот. Под действием формалина и при содер­жании в термостате при 37—38 "С в течение суток токсин утра­чивает ядовитые, но сохраняет антигенные свойства. Получен­ный таким образом столбнячный анатоксин используют для активной иммунизации против столбняка.

3. Лабораторная диагностика столбняка. Бактериологическое ис­следование: исследуется материал, взятый из раны:

• гной;

• кусочки тканей;

• инородные тела;

• обрывки одежды;

• тампоны, закладываемые в рану при перевязке;

• перевязочный материал, содержащий выделения из раны;

• в случаях столбняка после родов или аборта берут на исследо­вание выделения из влагалища и матки;

• при подозрении на столбняк у новорожденного исследованию подвергают выделения из пуповины;

• при исследовании трупа также берут материал из раны, если она имеется, из различных воспалительных очагов и старых рубцов.

В некоторых случаях столбняка происходит генерализация ин­фекции, возбудитель может быть обнаружен во внутренних ор­ганах. Поэтому берут на исследование от трупа кровь, кусочки печени и селезенки. Исследование материала производится с целью обнаружения в нем столбнячного токсина и возбудителя столбняка.

Обнаружение столбнячного токсина: исследуемый материал растирают в стерильной ступке, добавляют двойной объем фи­зиологического раствора. Часть материала засевают в 2 флако­на с жидкой питательной средой. Для постановки реакции нейтрализации на животных экстракт исследуемого материала вводят внутримышечно 2 мышам по 0,5 мл экстракта, а еще 2 мышам — те же дозы с противостолбнячной сывороткой. В зависимости от количества токсина симптомы столбняка у животных развиваются на 1-е или 2-е сутки. У животных, по­лучивших токсин с противостолбнячной сывороткой, симпто­мы не появляются, что свидетельствует о наличии в исследуе­мом материале столбнячного токсина.

Одновременно с постановкой реакции нейтрализации произ­водят посев растертого материала в 2 флакона или 2 пробирки с питательной средой {бульон Мартена, бульон Вейнберга) под слоем вазелинового масла. Перед посевом из среды удаляют кислород путем кипячения 15 мин, а затем охлаждают до 40— 50 °С и в нее добавляют 0,5% глюкозы. После культивирования при температуре 35 "С на 2, 4, 6 и 10-е сутки микроскопируют мазки из посевов и исследуют культуральную жидкость на на­личие столбнячного токсина. Для этого ставят реакцию нейтра­лизации с противостолбнячной сывороткой. При обнаружении в посеве столбнячного токсина и наличии грамположительных па­лочек с крупными спорами дают положительный ответ.

 

Вопрос 72. Морфология и биология возбудителя сибирской язвы

/. Морфологические свойства возбудителя сибирской язвы