Стадии БТ производств

Осуществляется в несколько стадий, число и характер, которых зависят от св-в используемого МО и св-в выпускаемого продукта, масштаба и способа производства, и от применяемого оборудования.

1)Приготовление питательной среды

2)Приготовление посевного материала клеток

3)получение готового продукта

Центральная стадия – культивирование клеток МО продукта от исходной до конечной концентрации в заданное время при определенных оптимальных условиях. Клетки растут и размножаются, осуществляется обмен и превращения с помощью ферментов компонентов пит среды в собственную биомассу. Сама биомасса клеток, а чаще всего метаболиты, являются целевым продуктом, они могут образовываться одновременно с накоплением биомассы, или несколько позже (вторичные метаболиты), в этом случае оптимальные условия для роста клеток могут не совпадать с таковыми для биосинтеза целевого продукта тогда эти 2 стадии необходимо разделить. В крайнем случае сменяя ростовую среду на поддерживающую, которая обеспечивает высокую биосинтетическую активность. Эту стадию называют ферментацией, а аппарат – ферментатор. Получение целевого продукта так же невозможно при загрязнении посторонней микрофлоры.

Конкурируя с клетками продукта за источники питания может уменьшиться ростовая и биосинтетическая активность культуры продукта вплоть до гибели. Попадая в готовый продукт клетки посторонний культуры могут уменьшить качество продуктата.

Культивирование клеток при небольшом объеме пр-ва осущ-ся периодическим способом позволяющим в большей степени обеспечить асептическое протекание проц-са. Культивирование начинается с инокуляции (это помещение стерильной среды в стерильном аппарате посевной культуры без посторонней микрофлоры) затем продолжается на протяжении всей работы биореактора в асептических условиях для этого ап-т должен надежно герметизирован, воздух очищен, отстерилизован, подача стерильных добавок и отбор проб осущ-ся в соответствии с правилами асептики. Проблемой яв-ся очистка воздуха, подаваемого в ап-т от взвешенных, тв., и жид. частиц, особенно от МО, в 1 м³ сод-ся до 10⁴ МО. В биореакторы на аэрацию подаются до 10 объемов воздуха на 1 объем среды в час, для поверх-ой аэрации до 120 объемов воздуха на 1 объем среды в час при барботажной аэрации. Цикл биореактора длится от 30 до 200-360 ч. Воздых на входе и на выходе должен быть очищен до приемлемых норм. Проводят в 3 этапа: 1) перед компрессором (заборный фильтр) удаляется до 50 % примесей, 2) основное фильтрование (головной фильтр), удаляется не менее 98% 3) перед биореактором (индивидуальный фильтр) окончательная очистка и стерилизация. Соблюдение асептических условий при культивировании МО способствует поддержанию в производст-ом помещении требуемого уровня чистоты. Практика показала, что при работе биореактора с надежной герметизацией с такими высокочувствительными культурами, как клетки млекопитающих вполне достаточно поддержание в рабочем помещении положительного давления с подачей стерильного воздуха, систематической обработки поверхности помещений дез. раствором, типа перекиси водорода, переодевание персонала в спец одежду, и проход в раб. помещение через воздушный шлюз, это соответствует зоне D по правилам GMP.