Занятие № 24

 

ТЕМА. ОКИСЛЕНИЕ И СИНТЕЗ ЖИРНЫХ КИСЛОТ. МЕТА-БОЛИЗМ КЕТОНОВЫХ ТЕЛ. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕ-ЛЕНИЕ ТРИГЛИЦЕРИДОВ В КРОВИ.

 

Цель занятия: 1.Усвоить химизм и значение b-окисления высших жирных кислот в тканях.

2.Уяснить процесс синтеза ВЖК в тканях.

3.Знать метаболизм кетоновых тел.

4.Овладеть методами качественного определения кетоновых тел и количественного определения триглицеридов в сыворотке крови.

Исходный уровень знаний:

- особенности строения ВЖК - компонентов липидов человека;

- структура нейтральных жиров;

- классификация и номенклатура ферментов;

- строение и биологическая роль витаминов РР, В₂, В₃, Н.

Содержание занятия.

I.2. Окисление ВЖК в тканях: локализация в клетке, химизм, энергетический выход (в молекулах АТФ).

Окисление глицерина в тканях.

Энергетический баланс окисления триацилглицеринов.

Синтез ВЖК: локализация в клетке, последовательность реакций, ферменты.

Участие витаминов в процессах окисления и синтеза ВЖК.

Современные представления о синтезе кетоновых тел (локализация в организме, химизм, значение).

 

II.1. Работа № 1. КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА АЦЕТОН И АЦЕТОУКСУСНУЮ КИСЛОТУ.

К кетоновым телам относятся ацетон, b-оксимасляная и ацетоуксусная кислоты. В крови в норме они содержатся в очень небольшом количестве - 13,4-185,2 мкмоль/л (0,14-1,9 мг%). В моче обычными реакциями ацетоновые тела у здоровых людей не определяются.

 

а) Проба Легаля на ацетон.

Принцип метода и химизм реакции.

Ацетон и ацетоуксусная кислота в щелочной среде образуют с нитропруссидом натрия продукт оранжево-красного цвета.

 

СН₃-СО-СН₃ + Na₂[Fe(CN)₅NO] + 2NaOH

aцетон нитропруссид натрия

 

Na₄[Fe(CN)₅NO=CH-CO-CH₃] + 2H₂O

комплексное соединение

 

После подкисления ледяной уксусной кислотой образуется соединение вишневого цвета.

 

Na₄[Fe(CN)₅NO=CH-CO-CH₃] + CH₃COOH

Na₃[Fe(CN)₅-NO-CH₂-CO-CH₃] + CH₃COONa

 

Порядок выполнения работы.

В пробирку внести 1 кап мочи, 1 кап. 10% раствора NaOH и 1 кап. нитропруссида Na. Отметить окраску. Добавить 3 кап. ледяной уксусной кислоты.

РЕЗУЛЬТАТ:

 

б) Проба Герхарда на ацетоуксусную кислоту.

Принцип метода и химизм реакции.

Енольная форма ацетоуксусной кислоты вступает в реакцию с хлорным железом с образованием комплексного соединения вишнево-красного цвета. При стоянии окраска бледнеет вследствие спонтанного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты.

Порядок выполнения работы.

К 5 кап. мочи прибавить по каплям 5% раствор хлорного железа. Зафиксировать появление сначала осадка (FeРО₄), а затем окрашивания.

N.B. При кипячении процесс протекает очень быстро. Сходное окрашивание возможно после приема салициловой кислоты, антипирина и др. лекарственных препаратов, но при этом окраска при стоянии и кипячении не исчезает.

РЕЗУЛЬТАТ:

 

 

Клинико-диагностическое значение.

 

Гиперкетонемия и кетонурия наблюдаются при сахарном диабете, приеме кетогенной пищи (дефицит углеводов), голодании, гиперпродукции гормонов (антагонистов инсулина), напр., кортикостероидов, болезни Гирке.

Гипокетонемия не имеет диагностического значения.

При сахарном диабете, когда печень бедна гликогеном, происходит усиленный распад жиров как источника энергии. В результате окисления ВЖК накапливается ацетил-КоА, что способствует его конденсации с накоплением кетоновых тел.

В раннем детском возрасте продолжительные желудочно-кишечные заболевания (дизентерия, токсикозы) могут вызвать кетонемию в результате голода и истощения.

 

Работа № 2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРИАЦИЛ-ГЛИЦЕРИДОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Принцип метода.

липаза

Триацилглицериды → глицерин + жирные кислоты

глицерокиназа

Глицерин + АТФ → глицерил-3-фосфат + АДФ

ГФО

Глицерил-3-фосфат + О₂ → диоксиацетонфосфат + 2Н₂О₂

пероксидаза

Н₂О₂ + 4-ААР + 4-хлорфенол → хинонимин + 4 Н₂О

Концентрация хинонимина, определяемая фотометрически, пропорциональна концентрации триглицеридов в пробе.

Порядок выполнения работы

 

Реактивы (мл)	Р-р сравнения	Эталон	Проба
Рабочий реагент	2,0	2,0	2,0
Дистиллированная вода	0,02	-	-
Калибратор	-	0,02	-
Сыворотка крови	-	-	0,02
	Содержимое пробирок перемешать, инкубировать не менее 15 мин. при t=26-250Сили 10 мин при t=370С

 

Измерить оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной пробы в кювете 1 см при длине волны 500 нм (490-520 нм). Окраска стабильна не менее часа после окончания инкубации при предохранении от прямого света.

РАСЧЕТ. По оптической плотности пробы (А) и калибратора (Б) рассчитать содержание триглицеридов (Х) пробы по формуле:

 

Х = А: Б • 200 мг/100мл

 

или Х = А: Б • 2,29 ммоль/л

 

В норме содержание триглицеридов в сыворотке крови составляет 0,15-1,71 ммоль/л или 13-160 мг/100 мл.

Группа риска - 1,71- 2,29 ммоль/л или 160-2060 мг/100 мл

Патологические показатели - >2,29 ммоль/л или 2000 мг/100 мл

РЕЗУЛЬТАТ:

 

ВЫВОД:

 

 

III.2. Контрольные вопросы.

Какие Вы знаете кетоновые тела?

Каково содержание кетоновых тел в крови в норме?

Где синтезируются кетоновые тела?

Как называется повышенное выделение кетоновых тел с мочой?

Каковы причины кетонурии?

Какова роль триацилглицеринов в организме?

Как подсчитывается энергетическая ценность окисления триацилглицеринов?

Сколько в норме в сыворотке крови триглицеридов?

 

Материал для самоподготовки. а)1 с.363-39; II, III