Система подачи подвижной фазы

Для подачи потока элюента в колонку и детектор используются насосы, которые должны отвечать следующим требованиям:

· генерация давления до 15 МПа;

· слабые остаточные пульсации;

· химическая стойкость;

· обеспечение скорости потока от 0.1 до 10 мл/мин;

· воспроизводимость и контроль скорости потока с относительной погрешностью не более 0.5%.

По принципу действия насосы бывают шприцевые и плунжерные (возвратно-поступательные). В настоящее время в основном применяют плунжерные насосы. У них есть малая камера с клапаном, которая заполняется подвижной фазой и вновь опустошается при движении клапана вперед-назад. При этом создается поток с пульсациями, которые необходимо сглаживать. Шприцевые насосы работают без пульсаций, однако имеют серьезный недостаток – прерывание подачи подвижной фазы для заполнения цилиндра и промывки поршня. Их в основном используют в микроколоночной ВЭЖХ, так как в этом случае наблюдаются небольшие расходы элюента.

Существует два режима подачи элюента в хроматографическую колонку: изократический и градиентный. В случае изократичсекого режима состав элюента на протяжении всего хроматографического процесса остается постоянным. При градиентном элюировании состав элюента изменяется в процессе хроматографирования по специальной программе для достижения более эффективного разделения. Для осуществления градиентного элюирования в составе жидкостного хроматографа должно быть два насоса.

Следует отметить, что при использовании градиентного элюирования сокращается срок службы колонки. Это объясняется тем, что при изменении состава элюента, изменяется вязкость подвижной фазы, что, в свою очередь, приводит к изменению давления в системе, и колонки быстрее выходят из строя.

Система ввода пробы (инжектор)

Система ввода пробы должна обеспечивать введение объемов от 5 до 500 мкл. При этом в процессе ввода давление в системе должно оставаться постоянным. Основным типом устройства для ввода пробы является петлевой дозатор (рис. 2).

Рис. 2 Устройство петлевого дозатора для ВЭЖХ: а) заполнение дозирующей петли; б) ввод пробы в систему.

С помощью микрошприца раствор пробы через иглу поступает во входное отверстие петли 6-ходового крана. При этом элюент после насоса направляется непосредственно в колонку. При переключении крана определенный объем пробы поступает в систему под действием протекающего через петлю элюента. Затем кран переводится в исходное положение.

В некоторых хроматографах, таких как, например, «Миллихром», используется шприцевой дозатор, роль которого выполняет сам насос (при обратном ходе засасывается проба). Петлевые дозаторы являются более воспроизводимыми, чем шприцевые. Для выполнения большого количества серийных анализов используют автоматические системы ввода проб – автосэмплеры.