Студопедия — Руководство по лабораторной работе
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Руководство по лабораторной работе






Поместите 12 пробирок для сбора фракций в штатив. Пронумеруйте свои пробирки цифрами от 1 до 10. Оставшиеся две подпишите как «Слив» и «Буфер». Или на штативе, или на пробирках, нужно написать также свои имена и класс.

С помощью пипетки отлейте 4 мл буфера для хроматографии в пробирку, подписанную «Буфер».

Снимите верхнюю крышку с колонки и отломите нижнюю пробку. Излишек буфера, в котором хранилась колонка, слейте в пробирку с надписью «Слив». БУФЕР НЕ ДОЛЖЕН СТЕЧЬ НИЖЕ ГРАНИЦЫ СОРБЕНТА. Затем закройте нижнюю часть колонки желтой крышкой.

 

 

Поместите колонку в пробирку для сбора фракций 1. Не надо стараться плотно вставить колонку в пробирку. Теперь вы готовы нанести образец (смесь белков) на колонку (или это сделает за вас учитель).

 

 

Снимите крышку, закрывающую нижнюю часть колонки. Пронаблюдайте, как выглядит верхний слой сорбента - весь буфер из колонки должен вытечь. Можно увидеть «зернистую» структуру сорбента. Осторожно нанесите одну каплю смеси белков на поверхность сорбента. Засуньте пипетку внутрь колонки и аккуратно капните, не повредив поверхность геля.

 

 

Дайте образцу время, чтобы войти в гель. Затем осторожно (по стенке) добавьте 250 мкл буфера. Вытекающая из колонки жидкость будет собираться в пробирку 1.

Когда вся жидкость из колонки вытечет, добавьте еще 250 мкл буфера. Также собирайте вытекающую жидкость в пробирку 1.

 

 

Когда вся жидкость вытечет, нанесите на колонку 3 мл буфера. Это можно сделать последовательно, нанеся три раза по 1 мл. Образец уже вошел в сорбент, так что легкое взмучивание поверхности не ухудшит разделение. Сразу после добавления 3 мл буфера перенесите колонку в пробирку номер «2» и начните считать вытекающие из колонки капли. Соберите 5 капель в пробирку 2.

 

 

8. После того, как вы собрали 5 капель во вторую пробирку, перенесите колонку в пробирку номер «3». Перемещая колонку от пробирки к пробирке, собирайте в каждую пробирку фракции по 5 капель..

 

 

Собирайте по 5 капель в каждую следующую пробирку, пока не дойдете до 10й. В нее соберите 10 капель. После этого опять закройте колонку крышкой. Учитель скажет вам, как вы будете хранить собранные фракции и колонку.

 

Урок 3 – анализ результатов работы. Вопросы.

1. Почему наносимый на колонку образец имел красно-коричневый цвет?

2. Как вы думаете, почему во время нанесения образца верхняя часть колонки должна быть «сухой» (над поверхностью сорбента не должно быть буфера)?

3. Почему вам нужно было добавлять дополнительный буфер после нанесения белка? (шаги 7 и 8)

4. Посмотрите на собранные вами 10 фракций. Какие из них содержат «пики» (самые большие количества) гемоглобина и витамина В12? Фракции с самой высокой концентрацией белка или витамина окрашены наиболее интенсивно.

5. Какая из молекул, гемоглобин или витамин В12, вышла из колонки первой? Эта молекула будет самой большой или самой маленькой из двух?

 

 

Приложение А. Ответы на вопросы для учителей.

Урок 1. Вопросы по теме «Хроматография»

 

1а. Назовите два разных метода колоночной хроматографии







Дата добавления: 2015-09-07; просмотров: 562. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Расчетные и графические задания Равновесный объем - это объем, определяемый равенством спроса и предложения...

Кардиналистский и ординалистский подходы Кардиналистский (количественный подход) к анализу полезности основан на представлении о возможности измерения различных благ в условных единицах полезности...

Обзор компонентов Multisim Компоненты – это основа любой схемы, это все элементы, из которых она состоит. Multisim оперирует с двумя категориями...

Композиция из абстрактных геометрических фигур Данная композиция состоит из линий, штриховки, абстрактных геометрических форм...

Йодометрия. Характеристика метода Метод йодометрии основан на ОВ-реакциях, связанных с превращением I2 в ионы I- и обратно...

Броматометрия и бромометрия Броматометрический метод основан на окислении вос­становителей броматом калия в кислой среде...

Метод Фольгарда (роданометрия или тиоцианатометрия) Метод Фольгарда основан на применении в качестве осадителя титрованного раствора, содержащего роданид-ионы SCN...

Основные структурные физиотерапевтические подразделения Физиотерапевтическое подразделение является одним из структурных подразделений лечебно-профилактического учреждения, которое предназначено для оказания физиотерапевтической помощи...

Почему важны муниципальные выборы? Туристическая фирма оставляет за собой право, в случае причин непреодолимого характера, вносить некоторые изменения в программу тура без уменьшения общего объема и качества услуг, в том числе предоставлять замену отеля на равнозначный...

Тема 2: Анатомо-топографическое строение полостей зубов верхней и нижней челюстей. Полость зуба — это сложная система разветвлений, имеющая разнообразную конфигурацию...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.008 сек.) русская версия | украинская версия