Цикл Кребса, глиоксилатный цикл. Характеристика основных стадий циклов

4.4.1. Характеристика основных этапов цикла Кребса

В присутствии достаточного количества кислорода (аэробная фаза дыхания) пируват полностью окисляется до СО₂ и Н₂О в дыхательном цикле, получившем название цикла Кребса или цикла ди- и трикарбоновых кислот. Английский биохимик Г. А. Кребс в 1937 г. предложил схему последовательности окисления ди- и трикарбоновых кислот до СО₂. Этот цикл и был назван его именем. Цикл Кребса был открыт на живот­ных объектах. Существование его у растений впервые доказал английский исследователь А. Чибнелл (1939).

Все участки этого процесса локализованы в матриксе или во внутренней мембране мито­хондрий. Весь процесс можно разделить на три стадии:

Первая стадия − окислительное декарбоксилирование пирувата. Непосредственно в цикле окисляется не сам пируват, а его производное - ацетил-СоА, образующегося в ходе окислительного декарбоксилирования. Окислительное декарбоксилирование пирувата осуществляется при участии пируватдегидрогеназного мульти-ферментного комплекса, включающего три фермента и пять коферментов − тиаминпирофосфат (ТПФ) (фосфорилированное производное витамина В1), липоевая кислота, коэнзим A, FAD и NAD ⁺.

Общая формула данного процесса:

СН₃СО=S−СоА + 3Н₂О 2СО₂ + 4Н₂ + НS-СоА

В результате этого процесса образуется активный ацетат − ацетил-КоА, восстановленный НАД и выделяется СО₂ (первая молекула).

Вторая стадия − цикл Кребса. Дальнейшее окисление ацетил-СоА осуществляется в ходе циклического процесса, в котором происходит постепенное преобразование ряда органических кислот. Ацетил-КоА конденсируется с енольной формой щавелевоуксусной кислоты (ЩУК) с образованием лимонной кислоты.

В этой реакции под действием фермента цитратсинтазы образуется лимонная кислота. Следующий этап цикла включает две реакции и катализируется ферментом аконитазой, или аконитатгидратазой. В первой реакции в ре­зультате дегидратации лимонной кислоты образуется цис-аконитовая. Во второй реакции аконитат гидратируется и синте­зируется изолимонная кислота. Изолимонная кислота под действием НАД- или НАДФ-зависимой изоцитратдегидрогеназы окисляется в нестойкое соединение — щавелевоянтарную кислоту, которая тут же декарбоксилируется с образованием α-кетоглутаровой кислоты (α -оксоглутаровой кислоты).

α -Кетоглутарат подвергается реакции окислительного декарбоксилирования. При этом выделя­ется СО₂, образуются NADH и сукцинил-СоА − высокоэнер­гетический тиоэфир. При участии сукцинил-СоА-синтетазы из сукцинил-СоА, ADP и Н₃РО₄ образуются янтарная кислота (сукцинат), АТР, регенерирует молекула СоА. АТР образуется в результате субстратного фосфорилирования.

Третий этап. Янтарная кислота окисляется до фумаровой. Реакция катализируется сукцинатдегидрогеназой, коферментом которой является FAD. Фумаровая кислота под действием фумаразы или фумаратгидратазы, присоединяя Н₂О, превращается в яблочную кислоту (малат).

Четвертый этап. Яблочная кислота с помощью NAD-зависимой малатдегидрогеназы окисляется в щавелевоуксусную. ЩУК, которая самопроизвольно переходит в енольную форму, реагирует с очередной молекулой ацетил-СоА и цикл повторяется снова.

Большинство реакций цикла обра­тимы, однако ход цикла в целом практически необратим.

На протяжении одного оборота цикла при окислении пирувата происходит выделение трех молекул СО₂, включение трех молекул Н₂О и удаление пяти пар атомов водорода. Роль Н₂О в цикле Кребса подтверждает правильность урав­нения Палладина, который постулировал, что дыхание идет с участием Н₂О, кислород которой включается в окисляемый субстрат.

Большинство ферментов цикла Кребса локализовано в матриксе митохондрий, аконитаза и сукцинатдегидрогеназа - во внутренней мембране мито­хондрии.

4.4.2. Энергетический выход цикла Кребса, его связь с азотным обменом.

Цикл Кребса играет чрезвычайно важную роль в обмене веществ растительного организма. Он служит конеч­ным этапом окисления не только углеводов, но также белков, жиров и других соединений. В ходе реакций цикла освобож­дается основное количество энергии, содержащейся в окисляе­мом субстрате, причем большая часть этой энергии утилизируется при образовании высоко­энергетических конечных фосфатных связей АТР.

В ходе окисления пирувата имеют место 5 дегидрирований, при этом получаются 3НАДН, НАДФH и ФАДH₂. Окисление каждой молекулы НАДH (НАДФH) дает по 3 молекулы АТФ, а окисление ФАДH₂ − 2ATФ. Таким образом при полном окислении пирувата образуются 14 молекул АТР. Кроме того, 1 молекула АТР синтезируется в цикле Кребса в ходе субстратного фосфорилирования. Сле­довательно, при окислении одной молекулы пирувата может образоваться 15 молекул АТР. А поскольку в процессе гли­колиза из молекулы глюкозы возникают две молекулы пиру­вата, их окисление даст 30 молекул АТР.

Итого в ходе окислительного распада молекулы глюкозы в общей слож­ности образуются 38 молекул АТФ (8 АТФ связаны с глико­лизом). Энергия третьей сложноэфирной фосфатной связи АТР равняется 41,87 кДж/моль (10 ккал/моль), то энергетический выход гликолитического пути аэробного дыхания составляет 1591 кДж/моль (380 ккал/моль), причем основное количество этой энергии − 1256 кДж/моль (300 ккал/моль) − поставляют реакции цикла Кребса. Эффективность использования энергии через гликолиз и ЦТК оказывается весьма высокой − 55,4%.

Не менее важную роль цикл Кребса играет в азотном обмене через участие ряда органических кислот в синтезе и распаде белковых веществ. Из кетокислот в ходе реакций переаминирования и восстанови­тельного аминирования образуются аминокислоты. Из пировиноградной кислоты возникает аланин, из щавелевоуксусной и α-кетоглутаровой − соответственно аспарагиновая и глутаминовая кислоты. Для синтеза липидов, полиизопренов, углеводов и ряда других соединений используется ацетил-СоА. Особенно важно, что через реакции цикла Кребса устанавливается тесная связь между обменом трех важнейших групп соединений — белков, жиров и углеводов.

4.4.3. Глиоксилатный цикл

Глиоксилатный цикл можно рассматривать как модификацию цикла Кребса. Этот цикл в 1957 г. был впервые описан у бактерий и плесневых грибов Г. Л. Корнбергом и Г. А. Кребсом. Затем оказалось, что он активно функционирует в про­растающих семенах масличных растений и в других расти­тельных объектах, где запасные жиры превращаются в сахара (глюконеогенез). Глиоксилатный цикл локализован в специализированных микро­телах - глиоксисомах. В клетках животных этот цикл отсутствует.

В глиоксилатном цикле из ЩУК и ацетил-СоА синтези­руется лимонная кислота, образуются цис-аконитовая и изолимонная (изоцитрат), как и в цикле Кребса. Затем изолимонная кислота под действием изоцитратлиазы распадается на глиоксиловую и янтарную кислоты. Глиоксилат с участием малатсинтазы взаимодействует со второй молекулой ацетил-Co А, в результате чего синтезируется яблочная кислота, которая окисляется до ЩУК.

В отличие от цикла Кребса в глиоксилат­ном цикле в каждом обороте участвует не одна, а две моле­кулы ацетил-СоА и этот активированный ацетил используется не для окисления, а для синтеза янтарной кислоты. Янтарная кислота выходит из глиоксисом, превращается в ЩУК и участвует (как показано на рис. 4.1 и 4.11), в глюконеогенезе (обращенном гликолизе) и других процессах биосинтеза. Глиоксилатный цикл, позволяет утилизировать запасные жиры, при распаде которых образуются молекулы ацетил-СоА. Кроме того, на каждые две молекулы ацетил-СоА в глиоксилатном цикле восстанавливается одна молекула НАДH, энергия кото­рой может быть использована на синтез АТФ в митохондриях или на другие процессы.