Опыт 1. Пристеночное пищеварениеЦель опыта: показать значение сорбирования ферментов на мембранах клеток слизистой кишечника в пищеварении. Порядок проведения работы. Кусочек слизистой оболочки верхней четверти тонкой кишки крысы весом 10-15 мг поместить в стаканчик Хагедорна, в который налито 4 мл охлажденного раствора Рингера (t +3, 5 градусов). Встряхивая в течение 30 секунд, смывают амилазу, которая не была сорбирована на поверхности кишки. Эта фракция (амилаза С) участвует в полостном пищеварении и используется как показатель полостного пищеварения. Кусочек отмытой слизистой перенести в ступку и проводят его гомогенизацию в 4 мл раствора Рингера. Гомогенизат перелить в стаканчик Хагедорна и встряхивать 5 минут. Так отмывается фракция амилазы гомогената (Г-амилаза), которая характеризует мембранное пищеварение. Профильтровать экстракты С и Г фракции амилазы и определить в них амилолитическую активность по методу Вольгемута (определяется убыль крахмала при ферментативном гидролизе по изменению окраски йодо-крахмальных комплексов (по мере убыли крахмала синяя окраска постепенно слабеет и исчезает). Ход определения амилолитической активности: В 2 штатива поставить 6-8 пробирок, в которые налить по 1 мл р-ра Рингера, затем в 1-ю пробирку одного штатива добавить 1 мл экстракта, содержащего фракцию С-амилазы, а в 1-ю пробирку 2 штатива - 1 мл экстракта, содержащего фракцию Г-амилазы. После встряхивания пробирок 1 мл смеси последовательно переносят в следующую пробирку, вновь встряхивают и т.д. Из последней пробирки 1 мл смеси выливают. Таким образом, получен ряд разведений в 2 раза. Затем в пробирки налить по 2 мл 1% р-ра крахмала и поместить пробы в водяную баню при 38 градусов на 30 минут, после чего реакцию остановить добавлением во все пробирки по 1 мл 1% р-ра соляной кислоты. Затем во все пробирки прилить по 1 капле йодного раствора. Активность амилазы рассчитывается по разведению фермента в последней пробирке, которая не отличается по окраске от контроля (в контроле имеются все компоненты, кроме амилазы, ее заменяет 1 мл р-ра Рингера). Результат выражается в условных единицах Вольгемута, характеризующих степень разведения. Пример: 4-я пробирка -16 единиц; 5-я 32 ед.и т.д. После определения амилолитической активности С и Г фракций находят отношение мембранного пищеварения (М) к полостному (С) М/С. В норме эта величина больше 2, 5-3. Оформить протокол. Сделать вывод о значении мембранного пищеварения.
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ ПОДГОТОВКИ:
1. Пищеварительный конвейер - основа полноценного гидролиза питательных веществ и их всасывания. 2. Роль толстого кишечника в иммунитете.
ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ИТОГОВОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ:
1. Какие виды пищеварения происходят в тонком кишечнике? 2. В чем заключается роль ферментов кишечного сока в общей цепи пищеварительного процесса? 3. Объясните особенности этапов полостного гидролиза: а)монофазный, б) гетерофазный. 4. Как регулируется сокообразование в тонком кишечнике? 5. Назовите основные стимуляторы и ингибиторы внешнесекреторной функции поджелудочной железы 6. Назовите ферменты, участвующие в мембранном пищеварении тонкого кишечника. 7. Как происходит всасывание питательных веществ в тонком кишечнике? 8. Что собой представляет " пищеварительный конвейер"? 9. Объясните происхождение метеоризма, выберите правильные ответы: а) нарушение кровоснабжения тонкого кишечника; б) гниение, брожение в кишечнике; в) преобладание давления газов в просвете кишки над его напряжением в крови. 10. Какие ферменты образуются в толстом кишечнике под влиянием микроорганизмов? 11. Образуются ли в толстом кишечнике витамины? Какие? 12. Возможна ли гипокалиемия при длительных поносах? Почему?
Задачи к занятию смотреть в сборнике «Контрольные вопросы по курсу нормальной физиологии» в разделе «Физиология питания и пищеварения» (занятие №4).
Занятие № 6
|
