Задание 3. Качественный анализ микрофлоры воздухаОбъект исследования – посевы микрофлоры воздуха закрытых помещений. Необходимо проанализировать полученные посевы, подсчитать колонии микроорганизмов четырех основных групп, результаты исследования занести в таблицу, сравнить с нормативами.
При формулировании вывода учесть, что к группе желтопигментных относится большинство патогенных и условнопатогенных бактерий и преобладание их в посевах на МПА свидетельствует о санитарно-эпидемиологическом неблагополучии данного помещения. Большое количество колоний бацилл говорит о сильном загрязнении воздуха пылью, преобладание плесневых грибов может указывать на наличие комнатных цветов (в сочетании с небольшими значениями ОМЧ) или редко совершаемую влажную уборку помещения. Контрольные ВОПРОСЫ 1. Как заселена микроорганизмами атмосфера? От каких факторов зависит обилие микроорганизмов в воздухе? 2. Приведите качественный состав и обоснуйте значение микрофлоры воздуха. 3. Какие показатели используют при оценке санитарного состояния воздуха закрытых помещений? 4. Какие микроорганизмы являются санитарно-показательными для воздуха закрытых помещений и почему? Приведите норму их содержания в воздухе жилых помещений в летнее и зимнее время. 5. Что такое общее микробное число воздуха? Приведите нормы этого показателя для воздуха жилых помещений в летнее и зимнее время. 4.5. Микрофлора пищевых продуктов, лекарственного сырья Цель занятия Знакомство с методами изучения микрофлоры пищевых продуктов, лекарственного сырья и лекарственных препаратов. Основные сведения Микрофлора пищевых продуктов Многие пищевые продукты являются благоприятной средой для сохранения и размножения микроорганизмов. Микрофлору пищевых продуктов условно делят на специфическую (штаммы микроорганизмов, применяющиеся в технологическом процессе) и неспецифическую (случайные микроорганизмы, попадающие в пищевые продукты при их заготовке, доставке, переработке и хранении). Инфицирование пищевых продуктов микроорганизмами может приводить к возникновению у людей пищевых токсикоинфекций и других заболеваний. Микробиологические критерии безопасности пищевых продуктов: 1) санитарно-показательные микроорганизмы (бактерии группы кишечной палочки – представители родов Escherichia, Klebsiella, Citrobacter, Enterobacter, Serratia); 2) потенциально-патогенные микроорганизмы (коагулазоположительные стафилококки, бактерии рода Proteus, сульфитредуцирующие клостридии, Bacillus cereus) 3) патогенные микроорганизмы (сальмонеллы и др.); 4) показатели микробиологической стабильности продукта (дрожжи, плесневые грибки). Санитарно-бактериологическое исследование пищевых продуктов проводят в несколько этапов. 1. Отбор проб проводят стерильными инструментами в стерильную посуду. 2. Определение ОМЧ (общего количества микроорганизмов, содержащихся в 1 г или 1 см3 продукта). Для его определения используют методы кратных и продольных разведений: - метод кратных разведений. Плотные субстраты измельчают и готовят исходную взвесь в разведении 1: 1. Из полученной взвеси или исходного жидкого субстрата готовят ряд последующих разведений в физиологическом растворе с таким расчетом, чтобы при посеве двух последних разведений на чашке Петри выросло 50–300 колоний. Из двух последних разведений по 1 см3 вносят в чашки Петри и заливают 10–15 мл расплавленного и остуженного питательного агара. Чашки инкубируют при 37º С 48 часов, затем подсчитывают число выросших колоний и рассчитывают ОМЧ с учетом разведения исследуемого материала. - метод предельных разведений (титр). Из исходного жидкого субстрата готовят ряд десятикратных разведений до тех пор, пока в последней пробирке можно будет предположить наличие одной бактериальной клетки. Посев делают в жидкую элективную среду с последующим выделением микроорганизмов на плотной среде и изучением их характеристики. За титр принимают то наименьшее количество субстрата, в котором обнаружена одна клетка исследуемого микроорганизма. 3. Определение санитарно-показательных микроорганизмов, которые характеризуют продукт с точки зрения эпидемической опасности. В основном это бактерии группы кишечной палочки (БГКП), для их количественного учета используют методы определения наиболее вероятного числа (НВЧ) и титра БГКП. - Для определения НВЧ из исследуемого продукта делают разведения 10–1, 10–2, 10–3, из которых по 1 см3 засевают в три пробирки со средой Кесслера (для каждого разведения). Через 24 часа инкубации при 37º С в пробирках регистрируется изменение цвета седы и газообразование. В зависимости от числа проросших пробирок определяют НВЧ колиформных бактерий. - Для определения титра БГКП готовят десятикратные разведения анализируемого материала и высевают на среду Кесслера для выявления наименьшего количества продукта, в котором присутствуют колиформные бактерии. Посевы термостатируют при 43º С в течение 18–24 часов. Из каждой пробирки производят высев на чашки Петри со средой Эндо так, чтобы получить рост в виде изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37º С 18–24 часа, после чего из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму. При выявлении в мазках грамотрицательных палочек материал колоний пересеваю на среды Гисса с глюкозой. При наличии газообразования в пробирках с посевами констатируют присутствие БГКП. Титр устанавливают по наименьшему количеству продукта, в котором обнаружены БГКП, или по стандатным таблицам. 4. Обнаружение патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (сальмонелл, стафилококка, протея, патогенных грибков). Для этого взвеси исследуемых продуктов засевают на среды накопления (селенитовый, хлористо-магниевый бульоны). После суточной инкубации при 37º С производят пересев на плотные элективные среды (Эндо, Левина, Плоскирева, висмутсульфитный и желточно-солевой агар). Далее материал колоний индентифицируют путем учета особенностей роста на средах Гисса, Ресселя, Олькеницкого и в реакциях агглютинации с моновалентными сыворотками. Микрофлора лекарственного сырья и готовых лекарств Лекарственное растительное сырье (ЛРС) может обсеменяться микроорганизмами на всех этапах заготовки, переработки и хранения. Внешние проявления микробной порчи ЛРС – изменение цвета и консистенции, загнивание, плесневение, появление несвойственного запаха. При этом резко снижается содержание биологически активных веществ, использование такого сырья становится бесполезным. Состав микроорганизмов зависит от вида ЛРС, его структуры и химического состава. Преобладают грибки (Mucor, Penicillum, Aspergillus, Candida), актиномицеты и спорообразующие бактерии (Bacillus subtilis, B. megaterium). Микробной порче подвергаются также и готовые лекарственные формы (ЛФ). Лекарства с повышенной обсемененностью микробами могут вызывать инфекционные заболевания, размножение микроорганизмов в лекарственных средствах приводит к изменению их физических и органолептических свойств, а в отдельных случаях и к превращению лекарств в токсический продукт. Предупреждение микробной порчи готовых лекарственных препаратов возможно при соблюдении условий, исключающих их микробное загразнение: соблюдение правил личной гигиены сотрудниками аптек и фармацевтических производств, правильная обработка посуды и оборудования, обеззараживание воздуха; при необходимости – изготовление ЛФ в асептичесикх условиях. Инъекционные препараты, глазные капли и мази должны быть стерильными. Остальные ЛФ являются нестерильными и легко подвергаются обсеменению микроорганизмами. Бактериологический контроль ЛФ и ЛРС проводят также в несколько этапов по методикам, приведенным выше: 1) определение ОМЧ (общей обсемененности в 1г или 1мл препарата); 2) определение БГКП; 3) определение дрожжевых и плесневых грибов; 4) определение условно-патогенных и патогенных микроорганизмов (по специальным показателям). В соответствии с требованиями Государственной фармакопея XI издания приняты критерии оценки микробной обсемененности лекарственных средств, приведенные в таблице 5. Таблица 5.
|
