КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ. Метод основан на способности дезоксирибозы, входящей в состав ДНК, давать синее окрашивание с дифениламиновым реактивом.
ПРИНЦИП РАБОТЫ: Метод основан на способности дезоксирибозы, входящей в состав ДНК, давать синее окрашивание с дифениламиновым реактивом.
РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ: 1) дифениламиновый реактив, 1% раствор; 2) водный раствор ДНК; 3) пробирки обычные и мерные; 4) кипящая водяная баня (!); 5) КФК, кюветы шириной 5 мм.
ХОД РАБОТЫ: 1. В опытную пробирку наливают 1 мл исследуемого водного раствора ДНК и 2 мл дифениламинового реактива. 2. В контрольную пробирку наливают 1 мл дистиллированной воды и 2 мл дифениламинового реактива. 3. Обе пробирки нагревают на кипящей водяной бане 10 мин. 4. После охлаждения измеряют оптическую плотность при красном светофильтре (КФК, кюветы шириной 5 мм) против контроля. 5. Построение калибровочного графика.
В 3 пробирки помещают по 1 мл раствора ДНК с концентрациями 50, 100 и 200 мкг/мл соответственно. Добавляют в каждую пробирку по 2 мл дифениламинового реактива и нагревают на кипящей водяной бане 10 мин. После охлаждения измеряют оптическую плотность (см. п. 4). Калибровочный график строят, откладывая на оси абсцисс концентрации использованных растворов ДНК, а на оси ординат - значения оптической плотности.
Данные для построения калибровочного графика:
РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОДЫ:
Работа №6
|
