Лекционный материал. ДНК-диагностика - это максимально точный способ диагностики: при нем риск ошибки составляет всего 3 %

ДНК-диагностика - это максимально точный способ диагностики: при нем риск ошибки составляет всего 3 %, быстрый: результаты доступны в течение 1-3 дней, универсальный: способ применим к широкому спектру микробов.

Различают два метода ДНК-диагностики:

Полимеразная цепная реакция, или ПЦР (подходит для исследования практически любого материала);

Лигазная цепная реакция, или ПЦР.

ПЦР, как самый распространенный метод, позволяет выявлять единичные клетки возбудителей многих инфекционных заболеваний, потому что технология ПЦР основана на многократном увеличении количества копий тестируемых специфических последовательностей ДНК.

ДНК-диагностика является наиболее удачной для диагностики большинства пациентов.

Преимущества ДНК-диагностики:

1. непосредственное выявление ДНК-возбудителей;

2. точность;

3. предельная чувствительность к возбудителю;

4. универсальность;

5. выявление вялотекущих и скрытых инфекций.

ДНК-диагностика идеальна для выявления скрытых, бессимптомных и хронически протекающих инфекций, в основном это инфекции, передающиеся половым путем (ИППП). Урология, венерология, гинекология, андрология – все эти отрасли медицины наиболее распложены к использованию ДНК-диагностики. Единственно, подобный метод не рекомендуется использовать при обильных и гнойных выделениях.

С помощью ДНК-диагностики возможно определение наличия хламидий, гонококков, микроплазм, уреаплазм, трихомонад, гонореи, трихомониаза, гадрднереллеза, вируса герпеса, цитомегаловируса, папилловируса и пр. Также ДНК-диагностика применяется для определения эффективности лечения заболевания – и в этом случае значение метода нельзя приуменьшить. Трудно выявляемые инфекции, устойчивые микроорганизмы, атипичные формы бактерий – все это может быть диагностировано только с помощью ДНК-метода.

Обобщая все вышесказанное, можно уверенно считать ДНК-диагностику действительно одним из наиболее эффективных и современных методов.

ДНК-диагностика — это один из наиболее современных высокотехнологичных методов исследования. ДНК-анализы широко применяются в диагностике инфекционных заболеваний, позволяя обнаруживать даже единичные микроорганизмы в организме человека.

ДНК-диагностика объединяет несколько методов исследования, самый распространенный из них — метод ПЦР (полимеразной цепной реакции).

ПЦР — (Polymerase chain reaction, PCR diagnostics) - расшифровывается как полимеразная цепная реакция.

ПЦР диагностика — это метод лабораторной диагностики инфекционных заболеваний, в частности, этот метод широко применяется и для диагностики ЗППП — заболеваний, передающихся половым путем.

Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач. «Небольшой фрагмент ДНК» — это несколько сотен пар оснований ДНК — кирпичиков, расположенных в строго определенной последовательности, и потому образующих неповторимый узор. Для ПЦР-диагностики инфекций достаточно небольшого фрагмента, поскольку любая ДНК включает в себя не менее нескольких тысяч оснований.

При проведении ПЦР-анализа ведется поиск такого фрагмента ДНК инфекции, который специфичен только для данного микроорганизма. Это значит, что этот фрагмент ДНК «особенный» — он встречается только у этого микроба (или группы родственных микробов), но не встречается ни у одного другого микроба.

Сама полимеразная цепная реакция (пцр диагностика) используется для того, чтобы найденный фрагмент размножить, клонировать: чтобы однозначно «увидеть» эти фрагменты ДНК, к окончанию реакции их должно быть не мене 1012 штук.

История открытия ДНК и разработки метода ПЦР

Первоначально сам принцип метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) был разработан Кэри Мюллисом в 1983г. Открытие ПЦР стало одним из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии за последние 20 лет, и за разработку ПЦР-анализа Кэрри Мюллис уже в 1993 г. был удостоен Нобелевской премии в области химии.

Появлению метода проведения полимеразной цепной реакции предшествовали определенные достижения молекулярной генетики: к тому времени уже были расшифрованы нуклеотидной последовательности геномов ряда микроорганизмов и выделены специфические.

Также появлению ПЦР много способствовало открытие уникального фермента ДНК-полимеразы (или taq-полимеразы). Именно этот фермент катализирует и «контролирует» все процессы во время проведения анализа методом ПЦР. Особенность этого фермента — он термостабилен, исключительно термостоек: он выдерживает нагревание до температуры кипения без потери активности, а «любимый» его температурный режим во время работы — 72оС. Многие реакции при проведении ПЦР идут почти исключительно при повышенной температуре.

С момента появления метода, ПЦР-исследования завоевывают все большую и большую популярность. Врачи, лаборанты и микробиологи, без преувеличения, просто в восторге от этого метода – диагностика пцр. По словам врачей и лаборантов нашего медицинского центра «Евромедпрестиж», ПЦР-анализ прост в исполнении, обладает непревзойденными показателями чувствительности и специфичности. Все эти показатели способствовали тому, что диагностика методом ПЦР стремительно распространилась по всему миру.

В настоящее время метод ПЦР-диагностики развивается семимильными шагами. Во всем мире совершенствуются, модифицируются и разрабатываются всевозможные модификации ПЦР-анализа. Каждый год на медицинский рынок поступает десятки новых разработок и тест-систем ПЦР-диагностики, предназначенных для выявления нуклеотидных последовательностей различных микроорганизмов — возбудителей инфекционных заболеваний. Новые разработки для проведения ДНК-исследований с каждым разом снижают себестоимость ПЦР-анализа, делая его доступным для широкого использования в диагностических и лечебных целях.

Материал для сдачи ПЦР-анализа

Материалом для проведения ПЦР-диагностики может служить:

a) соскоб эпителиальных клеток (соскоб из уретры у мужчин и у женщин, соскоб из цервикального канала)

b) кровь, плазма, сыворотка крови

c) биологические жидкости (сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкости, слюна)

d) моча (используется первая порция утренней мочи)

e) мокрота

f) биопаты желудка и двенадцатиперстной кишки

g) слизь и другие биологические выделения

Как правильно подготовиться к ПЦР-анализу (ДНК-диагностике)

Достоверность результатов лабораторной диагностики пцр зависит не только от опыта и профессионализма врача-лаборанта, возможностей данной лаборатории, но и от того, соблюдал ли пациент рекомендации врача, насколько правильной была его подготовка к проведению анализа. На самом деле ничего сложного в правильной подготовке нет. При сдаче анализа методом ПЦР врачи рекомендуют соблюдать следующие правила:

За сутки до проведения анализа не жить половой жизнью

Сдача ПЦР анализа крови проводится натощак, т. е. необходимо ничего не есть, не пить и не жевать жвачку

Для ПЦР-анализа мочи используется первая утренняя порция, собранная в чистый, стерильный контейнер

Срок изготовления

Результат ПЦР-диагностики обычно можно получить через 1,5—2 суток после сдачи анализа. Возможно получение результатов ПЦР-теста в течение одного дня.

Вопросы:

1. Различают два метода ДНК-диагностики:

2. ДНК-диагностика

3. Преимущества ДНК-диагностики

4. ПЦР — (Polymerase chain reaction, PCR diagnostics) - расшифровывается как полимеразная цепная реакция.

5. История открытия ДНК и разработки метода ПЦР

6. Материал для сдачи ПЦР-анализа

7. Как правильно подготовиться к ПЦР-анализу (ДНК-диагностике)

8. Срок изготовления

 

ТОО «Есикский медицинский колледж» г.Есик