Принципиальные основы методаЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Принципиальные основы метода Для определения по экспериментальным данным кинетических параметров ферментативной реакции – константы Михаэлиса и максимальной скорости – используют уравнение Михаэлиса-Ментен: (III.18) Здесь – начальная скорость реакции, – максимальная скорость, – константа Михаэлиса (концентрация субстрата [S], при которой = /2). Уравнение Михаэлиса-Ментен можно записать в линейных координатах, удобных для обработки экспериментальных данных: (III.19) (III.20) (III.21) В первом случае зависимость от [S] графически изображается прямой с наклоном, равным , и отсекаемым на оси ординат отрезком (рис. III.2). Для определения параметров и по уравнениям (III.20) и (III.21) экспериментальные данные представляют в координатах ¸ или ¸ (рис. III.3 и рис. III.4). Начальную скорость ферментативной реакции определяют из экспериментальных кинетических кривых по тангенсу угла наклона начального линейного участка, как показано на рис. III.5
Рис. III.4. Зависимость от (график Лайнуивера–Берка)
Рис. III.5. Экспериментальные кривые накопления продукта реакции при различных начальных концентрациях H2O2. Начальная скорость измеряется как тангенс угла наклона линейного участка
Возможно выполнение нескольких вариантов задачи: 1. определение эффективной константы Михаэлиса и максимальной скорости по йодиду калия. 2. определение эффективной константы Михаэлиса и максимальной скорости по пероксиду водорода. 3. определение истинной константы скорости .
|