ОТЧЕТ ПО УЧЕБНОЙ ПРАКТИКЕОТЧЕТ ПО УЧЕБНОЙ ПРАКТИКЕ (с 11 мая по 23 мая)
студентки 4 курса Гаркач П.А.
Научный руководитель: Универ Научный руководитель: С места прохождения
МИНСК 2015 Введение Наименование базы прохождения практики: микробиологическая лаборатория ГУ «Минский зональный центр гигиены и эпидемиологии» Целью учебной практики является приобретение навыков работы в микробиологической лаборатории: отбор проб, проведение микробиологических исследований, приготовление сред, посевы материала, анализ полученных результатов. 1. Материалы и методы исследования. 1.1. Объекты исследования: - питьевая вода из источников централизованного водоснабжения исследовалась на соответствие требованиям СанПиН 10-124 РБ 99[1] и нецентрализованного водоснабжения на соответствие требованиям СанПиН «Гигиенические требования к источникам нецентрализованного питьевого водоснабжения населения»[2]; - смывы с медицинских инструментов исследовались на соответствие требованиям Гигиенический Норматив «Показатели безопасности изделий медицинского назначения, медицинской техники и материалов, применяемых для их изготовления»[3]; - вода из чаши бассейна на соответствие требованиям СанПиГН «Гигиенические требования к устройству, оборудованию и эксплуатации плавательных бассейнов» [4], инструкция по применению «Методы санитарно-микробиологического контроля воды плавательных бассейнов [5]. Таблица 1 – Микробиологические показатели безопасности для питьевой воды из источников централизованного водоснабжения
Примечания: 1. При определении проводится трехкратное исследование по 100 см3 отобранной пробы воды. 2. Превышение норматива не допускается в 95% проб, отбираемых в точках водоразбора наружной и внутренней водопроводной сети в течение 12 месяцев, при количестве исследуемых проб не менее 100 за год. 3. Определение проводится в системах водоснабжения из поверхностных источников перед подачей воды в распределительную сеть 4. Определение проводится при оценке эффективности технологии обработки воды. Таблица 2 - Микробиологические показатели безопасности для питьевой воды из источников нецентрализованного водоснабжения
Таблица 3 – Таблица 4 –
1.1.1 Отбор проб Отбор проб питьевой воды из источника централизованного водоснабжения Отбор проб на стерильность с медицинского инструмента Взятие смывов происходит согласно Инструкции 4.2.10-22-1-2006 [6]. Взятие смывов производят стерильным ватным тампоном на палочках, вмонтированных в пробирки или марлевыми салфетками, размером 5х5 см, простерилизованными в бумажных пакетах или в чашках Петри. Для увлажнения тампонов в пробирки с тампонами наливают по 5,0 мл стерильного раствора нейтрализатора. При применении дезинфектантов, содержащих хлор или перекись водорода, в качестве увлажняющей жидкости следует использовать раствор нейтрализатора (1% пептонная вода + 3% ТВИН-80 + 0,5% тиосульфата натрия), при применении других - 1% пептонная вода + 3% ТВИН-80 + 0,3% лецитина. При использовании салфеток стерильный раствор нейтрализатора разливают в стерильные флаконы по 5,0 мл. Салфетку захватывают стерильным пинцетом, увлажняют нейтрализатором и, после протирания исследуемого объекта, помещают во флакон. При контроле мелких предметов смывы забирают с поверхности всего предмета; при контроле предметов с большой поверхностью смывы проводят в нескольких местах исследуемого предмета площадью примерно в 100-200 см2. Отбор проб воды из чаши бассейна
1.2 Питательные среды: 1.2.1 Тиогликолевая среда Состав: гидролизат казеина (в пересчете на сухой остаток) 15 г дрожжевой экстракт (10% в пересчете на сухой остаток) 5 г натрий хлорид 2,5 г глюкоза 5 г цистин 0,75 г тиогликолевая кислота 0,3 мл раствор резазурина 1:1000 свежеприготовленный 1 мл агар-агар 0,75 г вода дистиллированная 1000 мл рН среды после стерилизации 7,0-7,2 Приготовление: Смешивают все компоненты среды, кроме глюкозы и тиогликолевой кислоты. Цистин предварительно растворяют в небольшом количестве ди-стиллированной воды при постепенном добавлении 10-20% раствора NaOH до его полного растворения. Смесь подщелачивают 10% раствором NaOH до рН 8,0-8,2, кипятят, постоянно помешивая до расплавления агара (5-10 минут). Можно автоклавировать 20 минут при 1000С, затем прибав-ляют горячую воду до первоначального объема, прибавляют глюкозу и тиогликолевую кислоту, фильтруют, устанавливают рН 7,2-7,3. Добавляют раствор резазурина, смешивают и разливают в стерильные пробирки по 20 мл. Стерилизуют 20 минут при 1200С. Допускается приготовление среды без раствора резазурина натрия. Допускается применение других сортов агара, но с заранее вытитро-ванным количеством. Тиогликолевую среду хранят до посева, предохраняя ее от света, при комнатной температуре не более 7 суток со дня приготовления. 1.2.2 Питательный агар с 0,5% глюкозы Состав: анкреатического гидролизата казеина (в пересчете на сухой остаток) 15 г дрожжевого экстракта (10%) (в пересчете на сухой остаток) 5 г глюкозы 5 г натрия хлористого (с учетом содержания в гидролизате) 5 г агара (в зависимости от плотности агара) 10-20 г воды дистиллированной 1000 мл рН среды после стерилизации 7,2-7,4 Приготовление: Смешивают все компоненты среды, кроме глюкозы, подщелачивают 10-20% раствором NaOH до рН 8,0-8,2 и оставляют на 20-30 минут для набухания агара. Затем его расплавляют в автоклаве текучим паром или в открытом котле с подогреванием в течение 30 минут, отстаивают 20-30 минут, отфильтровывают через ватный фильтр. В полученный после фильтрации объем среды добавляют глюкозу, устанавливают рН 7,3-7,5, разливают в стерильные пробирки по 5 мл. Стерилизуют при 110-1120С (0,5 атм) в течении 30 минут. Агар годен для применения в течении 3 месяцев при хранении в хо-лодильнике (4-100С) или 1 месяц при комнатной температуре. 1.2.3 Бульон Хоттингера с 0,5% (1,0%) глюкозы Состав: мясной перевар по Хоттингеру до разведения аминного азота на 140-160 мг%; натрий хлористый 0,5% глюкоза 0,5% (1,0%) вода дистиллированная 1000 мл рН среды после стерилизации 7,2-7,4 Приготовление. Смешивают мясной перевар по Хоттингеру с водой в таком соотно-шении, чтобы в среде содержалось 140-160 мг% аминного азота, добавля-ют хлористый натрий. Смесь подщелачивают 10% NaOH до рН 8,0-8,2, кипятят на открытом огне 10 минут или автоклавируют при 1000С 10 ми-нут. Если есть выкипание, доводят объем до первоначального кипяченой или дистиллированной водой. Фильтруют через ватный тампон, прибав-ляют 0,5% (1,0%) глюкозы, устанавливают рН 7,3-7,5 добавлением 5% HCl. Фильтруют и разливают в стерильную посуду. Стерилизуют при 1100С в течение 30 минут. 1.2.4 Среда Сабуро Состав: сухой пептон ферментативный 10 г глюкоза или мальтоза 100 г вода дистиллированная 1000 г рН среды после стерилизации 5,5-5,8 Приготовление. В воду добавляют пептон, кипятят 10 минут и фильтруют. К полу-ченному объему после фильтрации добавляют глюкозу или мальтозу. Если рН выше, чем 5,7, нужно подкислить 5% раствором HCl до рН 5,7. Разливают в стерильные пробирки по 10 мл. Стерилизуют при 1100С (0,5 кгс/кв. см - 30 минут). 1.2 Методы исследования К БГКП относятся факультативно-анаэробные, грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, сбраживающие лактозу (глюкозу) с образованием кислоты и газа при (37 + 1)0С в течение 24-48 часов, в основном, являющиеся представителями родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia (т.е. учитываются цитратположительные и цитратотрицательные варианты БГКП). Для выявления БГКП производят посев на среду обогащения, для чего тампон (марлевую салфетку) погружают в 10-20% желчный бульон или среду Кесслера. Через сутки инкубирования при (37 + 1)0С делают пересев на среду Эндо. При отсутствии на среде Эндо колоний, типичных для БГКП (красных и темно-красных с металлическим блеском или без него, розовых или бледно-розовых), выдают заключение об отсутствии БГКП. При наличии на среде Эндо характерных колоний из них готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют; выполняют пробу на оксидазу. Наличие в мазках грамотрицательных, оксидазоотрицательных палочек предполагает присутствие БГКП. Исследуемые колонии засевают на среду Гисса с лактозой или глюкозой. Инкубируют (37 + 1)0С 24 часа. Первичный учет проводят через 4-6ч. При обнаружении кислоты и газа выдают положительный ответ. При выявлении на среде Эндо мелких бесцветных колоний, подозрительных на наличие возбудителей кишечных инфекций, колонии снимают и изучают на принадлежность к патогенным микроорганизмам семейства Enterobacteriaceae. ВЫВОДЫ:
ЛИТЕРАТУРА: 1. СанПиН 10-124 РБ 99 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества», утвержденные постановлением главного государственного санитарного врача №46 от 19.10.1999 года, с изменениями и дополнениями от 26.03.2002 года №46; 2. СанПиН «Гигиенические требования к источникам нецентрализованного питьевого водоснабжения населения», утвержденные Постановлением Министерства здравоохранения Республики Беларусь №105 от 02.08.2010г; 3. Гигиенический Норматив «Показатели безопасности изделий медицинского назначения, медицинской техники и материалов, применяемых для их изготовления», утверждённый Постановлением МЗ РБ №128 от 16.12.2013 года; 4. СанПиГН «Гигиенические требования к устройству, оборудованию и эксплуатации плавательных бассейнов», утвержденные постановлением Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 22.09.2009г; 5. инструкция по применению «Методы санитарно-микробиологического контроля воды плавательных бассейнов», утвержденная Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 19.03.10г; 6. Инструкция 4.2.10-22-1-2006 «Методы микробиологического контроля санитарно-гигиенического состояния помещений в организациях здравоохранения и стерильности изделий медицинского назначения»;
|
