Приборы и материалы. Дистиллированная водаЭлектроплитка Водяная баня Раствор каталазы Дистиллированная вода Перекись водорода 2 % Серная кислота 10 % Перманганат калия 0,1 М
Описание работы Готовят контрольную пробу. Для этого в пробирку наливают 3 мл рабочего раствора каталазы и ставят ее в кипящую водяную баню на 5 минут для инактивации фермента. Далее в две колбы вместимостью 50 мл наливают по 7 мл дистиллированной воды и по 2 мл 2 % раствора перекиси водорода. В обе колбы вносят по 1 мл рабочего раствора каталазы: в опытную колбу - некипяченый раствор, а в контрольную - кипяченый раствор фермента. Затем обе колбочки оставляют при комнатной температуре на 30 мин. После инкубации в каждую колбу прибавляют по 5 мл 10 % раствора серной кислоты для прекращения действия фермента и создания кислой среды, необходимой для титрования нерасщепленной перекиси водорода. Титруют 0,1 М перманганатом калия до появления розовой окраски, держащейся 1 минуту. Активность фермента выражают в стандартных единицах, при этом учитывают, что 1 мл 0,1 М КмnО4 соответствует 1,7 мг перекиси водорода. Удельную активность рассчитывают по формуле:
где: а – количество KmnO4 , пошедшее на титрование в контроле, мл; в - то же самое в опыте, мл; 1,7 – коэффициент для пересчета KmnO4 на перекись водорода, мг; 34 – молекулярная масса перекиси водорода; t - время инкубации, мин; Ve- объем рабочего раствора фермента, мл; Vc - объем инкубационной среды, мл; 1000 – коэффициент для перевода в мкмоли; s - концентрация белка в мл рабочего раствора фермента, мг / мл.
|
,
