ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ СОВМЕСТИМОСТИ

Наиболее распространённой методикой определения индивидуальной совместимости в условиях ОРИТ в настоящее время считается комбинация из двух проб: пробы на плоскости при комнатной температуре (которая имеет целью выявить у реципиента полные групповые антигены) и одной из двух реакций конглютинации с 10% желатином или с 33% полиглюкином (последняя менее чувствительная, однако занимает меньше времени).

Проба на плоскости при комнатной температуре. На пластинку наносят 2-3 капли сыворотки реципиента и добавляют небольшое количество эритроцитов, чтобы соотношение эритроцитов и сыворотки было 1:10. Далее эритроциты перемешивают с сывороткой, пластинку слегка покачивают, наблюдая за ходом реакции в течение 5 минут. По истечении указанного времени можно добавить 1-2 капли физиологического раствора для снятия возможной неспецифической агглютинации эритроцитов. Наличие агглютинации эритроцитов означает, что кровь донора несовместима с кровью реципиента и не должна быть ему перелита. Если через 5 минут агглютинация эритроцитов отсутствует, это означает, что кровь донора совместима с кровью реципиента по групповым агглютиногенам.

Реакция конглютинации с 10% желатином. В пробирку вносят 1 небольшую каплю (0,02-0,03 мл) эритроцитов донора, для чего выдавливают из пипетки небольшую каплю эритроцитов и касаются ею дна пробирки, добавляют 2 капли (0,1 мл) желатина и 2 капли (0,1 мл) сыворотки реципиента. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, после чего их помещают в водяную баню на 15 минут (или термостат на 30 минут) при температуре + 46-48^о С. По истечению указанного времени в пробирки добавляют 5-8 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путём 1-2-х кратного переворачивания пробирок. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что кровь реципиента и донора несовместимы, отсутствие агглютинации является показателем совместимости.

Реакция конглютинации с 33% полиглюкином. В пробирку вносят 2 капли (0,1 мл) сыворотки реципиента, 1 каплю (0,05 мл) эритроцитов донора и добавляют 1 каплю (0,1 мл) 33% полиглюкина. Пробирку наклоняют до горизонтального положения, слегка потряхивая, затем медленно вращают таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам тонким слоем. Контакт эритроцитов с сывороткой больного при вращении пробирки следует продолжать не менее 3 минут. Через 3-5 минут в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путём 2-3-х кратного перевёртывания пробирки, не взбалтывая. Наступившая агглютинация свидетельствует о несовместимости крови реципиента и донора, её отсутствие наоборот говорит о совместимости.

 

Однако наиболее чувствительной является двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином. Она предусматривает выявление полных и неполных антител, в том числе групповых гемолизинов. Однако она требует достаточного времени (более 30 минут) и оснащения (двойное центрифугирование, помещение в термостат), и в настоящее время проводится преимущественно в условиях специализированной лаборатории. Проведение непрямой пробы Кумбса, которая предназначена для выявления у реципиента неполных групповых антител также осуществляется как правило в лаборатории она может быть заменена на пробу с 10% желатином или 33% полиглюкином.

 

Определение групп крови, резус-принадлежности и проведение проб на индивидуальную совместимость должно проводить при температуре окружающего воздуха в пределах 15-25^о С. При температуре ниже 15^о С может происходить холодовая агглютинация, а при повышенной температуре более 25^о С гемагглютинирующие сыворотки и цоликлоны могут утрачивать свою активность. Оптимальное соотношение эритроцитов и тестовых реагентов при использовании гемагглютинирующих сывороток 1:10, при использовании цоликлонов и реагентов приготовленных в комбинации с коллоидами 2-3:10. При избыточном количестве эритроцитов агглютинация может быть не замечена, при недостаточном может наступать более поздно, что также может привести к неправильной трактовке результатов.

 

Следует помнить, что антиген А, содержащийся в эритроцитах группы А(II) и АВ(IV), может быть представлен двумя вариантами – А₁ и А₂. Эритроциты А₂ отличаются более низкой агглютинационной способностью по отношению к антителам анти-А. При переливании эритроцитов подгруппы крови значения не имеют. Лицам имеющим антиген А₂ можно переливать эритроциты А₁, и наоборот. Однако сыворотка реципиентов, имеющих экстраагглютинины a₁ и a₂ агглютинирует на плоскости или в пробирках при комнатной температуре с эритроцитами А₁ и А₂ соответственно. Поэтому реципиентам А₂a₁ (II) переливают эритроциты 0(I), реципиентам А₂Вa₁(IV) переливают эритроциты В(III) или 0(I).

 

При аутоиммунной гемолитической анемии и гемолитической болезни новорождённых может наблюдаться неспецифическая агглютинация, которую трудно отличить от специфической, поэтому при наличии агглютинации с реагентами анти-А, анти-В, анти-АВ, анти-D необходимо провести пробу со стандартной сывороткой АВ (IV) и физиологическим раствором. В противном случае реципиент может быть ошибочно отнесён к группе АВ (IV) резус-положительной. Если из-за неспецифической агглютинации эритроцитов группу крови больного установить не удается, образец крови направляют в специализированную лабораторию, а больному при наличии жизненных показаний переливают эритроциты группы 0(I). В результате неоднократного переливания эритроцитарной массы или взвеси группы 0(I) реципиентам другой группы в их крови одновременно циркулируют две популяции эритроцитов, отличающихся по группе крови и другим антигенам, так называемые трансфузионные кровяные химеры. Установление истинной группы крови при кровяных химерах затруднено, таким реципиентам переливают эритроцитарную массу или взвесь не содержащие антигены, по отношению к которым могут присутствовать антитела.

При сепсисе, циррозе печени и некоторых других патологических состояниях может наблюдаться повышенная агглютинабельность эритроцитов (они могут склеиваться в собственной сыворотке и физиологическом растворе). При лейкозах наоборот наблюдается снижение агглютинабельности.

Во всех случаях нечёткого, сомнительного результата необходимо повторить исследование, используя дополнительные стандартные реагенты другой серии. Если результаты остаются неясными образец крови направляют на исследование в специализированную лабораторию.

БИОЛОГИЧЕСКАЯ ПРОБА

Перед началом переливания контейнер с трансфузионной средой (эритроцитарная масса, взвесь, СЗП) выдерживают при комнатной температуре в течение 30 минут или согревают в водяной бане при температуре 37^о С под контролем термометра.

Однократно переливается 10 мл гемотрансфузионной среды со скоростью 2-3 мл/мин, затем переливание прекращают и в течение 3 минут наблюдают за пациентом, контролируя у него пульс, ЧД, АД, общее состояние, цвет кожи, температуру. Такую процедуру повторяют дважды.

При появлении даже одного из таких симптомов как озноб, чувство жара, боли в пояснице, стеснения в груди, головной боли, рвоты требует немедленного прекращения трансфузии и отказа от переливания данной трансфузионной среды. Возможно снижение АД, увеличение ЧСС, ЧД, бледность и цианоз лица.

Экстренность трансфузии компонентов крови не освобождает от выполнения биологической пробы. Во время её проведения возможно продолжение переливания солевых растворов.

При необходимости переливания нескольких доз компонентов крови биологическую пробу проводят перед началом переливания каждой новой дозы.

После окончания переливания донорский контейнер с небольшим количеством оставшейся гемотрансфузионной среды, и пробирка с кровью реципиента, использованная для проведения проб на индивидуальную совместимость, подлежат обязательному сохранению в течение 48 часов в холодильнике.

Реципиент после переливания наблюдается в течение двух часов, ему ежечасно измеряют температуру тела, АД, почасовой диурез, цвет мочи с фиксацией этих показателей в истории болезни. Появление красной окраски мочи свидетельствует об остром гемолизе. На следующий день после переливания производят клинический анализ крови и мочи.