Количественное определение.

Около 0,4 г порошка растертых таблеток по 0,05 г или около 0,25 г по 0,1 г (точная навеска) помещают в коническую колбу емкостью 150 мл, приливают 10 мл 95% спирта, нейтрализованного по фенолфталеину, и кипятят на водяной бане с обратным холодильником в течение 15 минут. Выделившееся при кипячении на стенках колбы вещество переводят в раствор встряхиванием колбы.

По окончании нагревания нижний конец холодильника (под пробкой) внутри и снаружи смывают 4-5 мл спирта в ту же колбу. Содержимое колбы титруют 0,05 н. раствором едкого натра со смешанным индикатором (3 капли) до изменения фиолетового окрашивания в зеленое.

1 мл 0,05 н. раствора едкого натра соответствует 0,02042 г C₂₂H₁₆O₈, которого соответственно должно быть 0,045-0,055 г или 0,09-0,11 г, считая на среднюю массу одной таблетки.

Задание 3. Количественное определение лекарственного препарата – Neodicumarinum:

Около 0,4 г препарата (точная навеска) растворяют в 30 мл ацетона, прибавляют 20 мл воды, 5 капель смешанного индикатора и титруют 0,1 н. раствором едкого натра

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 н. раствора едкого натра соответствует 0,04084 г C₂₂H₁₆O₈, которого в препарате должно быть не менее 98,5%.

 

 

Тема № 11 - Анализ лекарственных средств хромановых соединений: витамины группы Е (3 часа)

 

Цель: Познание способов анализа лекарственных препаратов производных хромановых соединений

Задачи обучения: использование в оценке качества лекарственных препаратов окислительно-восстановительных методов, определение качества лекарственных препаратов с использованием фотоколориметрических методов.

Основные вопросы темы:

1. Природные источники получения витаминов группы Е.

1. Фармакопейный анализ лекарственных препаратов группы Е.
2. Методы цериметрии.

4. Хранение и применение в медицинской практике.

Методы обучения и преподавания: разбор теоретических вопросов и самостоятельное выполнение сопровождающих титрование расчетов.

Литература:

1. Арзамасцев А.П. Фармацевтическая химия: учебное пособие, 3-е изд., испр. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. – 640 с.

2.Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии: Э.Н. Аксенова, О.П. Андрианова, А.П. Арзамасцев и др. – М.: Медицина, 2001. – 384 с.

3.Лабораторные работы по фармацевтической химии /Под ред. В.Г. Беликова. – М.: Высшая школа, 1989. – 375 с.

1. Государственная фармакопея СССР, Х издание. – М.: Медицина, 1968.

Контроль (вопросы, тесты):

1.Какие существуют природные источники получения витамина Е?

2.Какие окислительно-восстановительные методы предлагаются для титрования токоферола ацетата?

3.На чем основано количественное определение витамина Е?

4.Какие продукты окисления образуются при действии на токоферола ацетат реагентов различной степени окисления?

5.Как определяют удельный показатель поглощения 0,01% раствора препарата токоферола ацетата в абсолютном спирте?

6.Какие токоферолы различаются в группе веществ, обладающих Е-витаминной активностью?

 

Тесты

1. Количественное определение токоферола ацетата проводят методом …

A) комплексонометрического титрования;

B) нитритометрического титрования;

C) потенциометрического титрования

D) цериметрии;

E) вытеснения нейтрализации.

 

2. Чему равен грамм-эквивалент токоферола ацетата при цериметрическом титровании?

A) М.м/2;

B) М.м;

C) 2М.м;

D) М.м/4;

E) М.м/6.

 

3. По расположению метильных групп в молекулах токоферолов различают …

A) 12 токоферолов;

B) 2 токоферола;

C) 5 токоферолов;

D) 7 токоферолов;

E) 6 токоферолов.

 

4. Укажите реакцию, подтверждающую подлинность препарата токоферола ацетата…

A) нагревание с концентрированной азотной кислотой;

B) с калия гидроксидом;

C) с солью диазония;

D) с диметилформамидом;

E) с раствором ванилина в соляной кислоте.

 

ПРИЛОЖЕНИЕ

Задание 1. Установить оценку качества токоферола ацетата.

Описание. Светло-желтая прозрачная вязкая маслянистая жидкость со слабым запахом. На свету окисляется и темнеет.

Растворимость. Практически нерастворим в воде, растворим в 95% спирте,очень легко растворим в эфире, ацетоне, хлороформе и растительных маслах.

Подлинность. Около 0,02 г препарата растворяют в 10 мл абсолютного спирта, добавляют 2 мл дымящей азотной кислотой и нагревают в течение 15 минут на водяной бане при температуре около 80⁰; появляется красно-оранжевое окрашивание.

Задание 2. Выполнить испытания на доброкачественность токоферола ацетата.

Показатель преломления. 1,4960-1,4985

Удельный показатель поглощения. Е _1см ^1% от 42 до 47 при длине волны 285 нм (0,01% раствор в абсолютном спирте).

Задание 3. Выполнить количественное определение токоферола ацетата.

Количественное определение. Около 0,12 г препарата (точная масса) растворяют в 10 мл абсолютного спирта, добавляют 10 мл раствора серной кислоты в абсолютном спирте и кипятят в течение 2 часов на водяной бане в колбе с обратным холодильником. После охлаждения до комнатной температуры смесь переносят в мерную колбу емкостью 50 мл и доводят объем раствора до метки абсолютным спиртом. К 20 мл этого раствора добавляют 20 мл абсолютного спирта, 10 мл воды и 2 капли раствора дифениламина и титруют при постоянном перемешивании 0,01 н. раствором сульфата церия со скоростью 25 капель в 10 секунд, защищая титруемый раствор от действия прямого солнечного света, до появления сине-фиолетового окрашивания, устойчивого в течение 10 секунд.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,01 н. раствора сульфата церия соответствует 0,002364 г С₃₁Н₅₂О₃, которого в препарате должно быть не менее 95,0 %.

П р и м е ч а н и е. Приготовление раствора серной кислотой в абсолютном спирте. К 75 мл абсолютного спирта осторожно приливают 20 мл концентрированной серной кислотой и перемешивают.

Тема № 12 - Анализ лекарственных средств фенилхромановых соединений: рутин, кверцетин, дигидрокверцетин (3 часа)

 

Цель: Анализ лекарственных средств фенилхромановых соединений в соответствии с требованиями государственной фармакопеи

Задачи обучения: общее представление о фенилхромановых соединениях, ознакомление с методами фармакопейного анализа, выполнение основных требований к контролю качеству лекарственных препаратов

Основные вопросы темы:

1. Флавоноиды (витамины группы Р).
2. Классификация производных флавана, обладающих Р-витаминной активностью.

3. Общие требования к контролю качества лекарственных препаратов фенилхромановых соединений.

4. Контроль качества допустимых и недопустимых примесей в лекарственном препарате «Рутин».

5. Источники получения индивидуальных лекарственных веществ производных фенилхромановых соединений.

6. Спектрофотометрия в УФ-области спектра.

Методы обучения и преподавания: информационно-дидактический блок по основным вопросам темы занятия.

Литература:

1.Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии: Э.Н. Аксенова, О.П. Андрианова, А.П. Арзамасцев и др. – М.: Медицина, 2001. – 384 с.

2.Лабораторные работы по фармацевтической химии /Под ред. В.Г. Беликова. – М.: Высшая школа, 1989. – 375 с.

3.Государственная фармакопея Республики Казахстан: первое издание. – Астана: Изд. дом «Жибек жолы», 2008. – 592 с.

4.Государственная фармакопея СССР, ХI издание. – М.: Медицина, 1987.

Контроль (вопросы, тесты):

1.Какое распространение в природе имеют витамины группы Р?

2.Дайте классификацию производным флавана?

3.Как осуществляется в настоящее время профилактика и лечение гипо- и авитоаминоза Р?

4.Какие фармакопейные требования предъявляются к содержанию примесей в лекарственном препарате «Рутин»?

5.Какие частные требования возлагаются к качеству препарата «Кверцетин»?

6.Как используется спектрофотометрия в УФ-области для количественного определения рутина?

7.Обоснуйте химизм реакции, лежащей в основе образования халкона?

Тесты

1.В ГФ Х издания включен препарат, представляющий 3-рамноглюкозид кверцетина …

A) камфора;

B) ибупрофен;

C) оксафенамид;

D) рутин;

E) триметоприм.

 

2. Для испытания подлинности рутина ГФ Х рекомендует цветную реакцию с раствором …

A) аммония сульфата;

B) натрия гидроксида;

C) натрия гидрокарбоната;

D) натрия хлорида;

E) нингидрина.

 

3.Кверцетин является агликоном …

A) глюкозы;

B) аминалона;

C) пирацетама;

D) рутина;

E) рибофлавина.

 

4.Источником получения рутина служит …

A) каменноугольная смола;

B) зеленые листья шпината;

C) зеленая масса гречихы;

D) листья кокаинового куста;

Е) корни скополии.

 

1. По ГФ Х примесь кверцетина в рутине определяют …

A) титрованием методом нейтрализации в неводной среде;

B) по реакции с хлорамином Б;

C) сравнением бумажных хроматограмм испытуемого раствора препарата и стандартного раствора примеси;

D) по соотношению значений оптических плотностей при разных длинах волн;

E) по реакции с аммиачным раствором нитрата серебра.

 

6. Укажите фармакопейный метод количественного определения рутина …

A) фотоколориметрический метод;

B) спектрофотометрический метод в УФ-области;

C) нитритометрический метод;

D) комплексонометрический метод;

E) меркуриметрический метод.

 

ПРИЛОЖЕНИЕ

Задание 1. Провести реакции подлинности лекарственного препарата – Rutinum:

А) 1 г препарата кипятят со 100 мл 0,5% раствора соляной кислоты и фильтруют. К 5 мл фильтрата прибавляют 0,3 мл раствора едкого натра и 3 мл раствора Фелинга; при кипячении смеси образуется красный осадок;

Б) 5 мг препарата растворяют в 5 мл 1 н. раствора едкого натра; появляется желто-оранжевое окрашивание;

В) 0,02 г препарата растворяют в 5 мл горячего 95% спирта, добавляют несколько капель концентрированной соляной кислоты и 0,05 г порошка магния или магниевой стружки; постепенно раствор окрашивается в красный цвет.

С) 0,002% раствор препарата в абсолютном спирте при измерении на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см имеет максимумы поглощения при длинах волн 259 + 1 нм и 362,5 + 1 нм.

Задание 2. Выполнить испытание на чистоту лекарственного препарата - Rutinum:

- определение примеси, нерастворимой в спирте

0,1 г препарата кипятят с 6 мл 95% спирта в колбе с обратным холодильником в течение 5-6 минут. Раствор должен быть прозрачным;

- определение хлорофилла и пигментов, растворимых в эфире

0,1 г препарата взбалтывают с 5 мл эфира; эфир должен быть бесцветным;

- определение алкалоидов

К 2-3 мл насыщенного спиртового раствора препарата приливают 2-3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты. Не должен выделяться осадок;

- определение кверцетина

Определяют оптическую плотность раствора препарата, приготовленного для количественного определения спектрофотометрическим методом при длинах волн 375 нм (D₁) и 362,5 нм (D₂). Если отношение (D₁)/(D₂) не превышает 0,879, то препарат не содержит кверцетина, если оно превышает 0,879, то содержание кверцетина в процентах (Х) рассчитывают по формуле:

 

Х = 5,43 · D₁ – 5,200 · D₂ / а,

 

D₁ – оптическая плотность испытуемого раствора при длине волны 375 нм;

D₂ – оптическая плотность испытуемого раствора при длине волны 362,5 нм;

А – навеска в граммах.

Содержание кверцетина в пересчете на сухое вещество должно быть не более 5,0 %.

- определение потери в массе при высушивании

Около 0,5 г препарата (точная навеска) сушат при 135⁰ до постоянной массы. Потеря в массе должна быть не менее 6% и не более 9%.

Задание 3. Определение содержания рутина.

Реактивы: 1) 0,5% раствор стрептоцида в 10% растворе серной кислоты; 2) 0,2% раствор едкого натра.

Стандартный раствор: в 1 мл стандартного раствора содержится 0,02 мг рутина в 95% спирте.

Методика. В мерную колбу емкостью 25 мл вносят 1 мл раствора стрептоцида в 10% растворе серной кислоты и 2 мл раствора нитрита натрия и взбалтывают в течение 2 мин. Затем прибавляют 1 мл исследуемого спиртового раствора рутина (от 0,002 до 0,018 мг) и 1 мл раствора едкого натра. Смесь взбалтывают в течение минуты, а затем доводят водой до метки. Через минуту измеряют оптическую плотность полученного раствора на ФЭК при синем светофильтре в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствором сравнения служит смесь 1 мл раствора стрептоцида, 2 мл нитрита натрия, 1 мл спирта и 2,1 мл воды.

Построение калибровочного графика. В 5 мерных колб емкостью 25 мл вносят по 1 мл раствора стрептоцида и 2 мл раствора нитрита натрия. Смесь взбалтывают и через 2 мин прибавляют соответственно 0,1; 0,3; 0,5; 0,8 и 0,9 мл стандартного раствора рутина, а далее поступают, как описано выше.

Определение содержания рутина в лекарственном препарате «Рутин».

Методика количественного определения. Около 0,025 г препарата (точная навеска) растворяют в 10 мл горячего абсолютного спирта и фильтруют через стеклянный фильтр №4 при слабом разрежении. Фильтр промывают горячим абсолютным спиртом (2 раза по 10 мл). Объединенные фильтраты переносят в мерную колбу емкостью 100 мл, охлаждают и доводят объем раствора тем же спиртом до метки. 5 мл спиртового раствора помещают в мерную колбу емкостью 50 мл и доводят объем раствора абсолютным спиртом до метки. Определяют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длинах волн 375 нм (D₁) и 362,5 нм (D₂) в кювете с толщиной слоя 1 см. Если отношение D₁/D₂ находится в пределах 0,875 + 0,004, то содержание рутина в процентах (Х) вычисляют по формуле:

 

Х = D₂ · 1000 / 325,5 · а,

 

где 325,5 - удельный показатель поглощения Е _1см ^1% чистого рутина (безводного) в абсолютном спирте при длине волны 362,5 нм;

а – навеска в граммах.

 

Если отношение D₁/D₂ превышает 0,879, то содержание рутина в процентах (Х) вычисляют по формуле:

 

Х = 14,60 · D₂ - 13,18 · D₁ / а.

 

Содержание C₂₇H₃₀O₁₆ в пересчете на сухое вещество должно быть не менее 95,0%.

 

Тема № 13 - Анализ макроциклических производных пиррола: цианокобаламин – витамин В₁₂, гидроксикобаламин, кобамид (3 часа)

 

Цель: Анализ макроциклических производных пиррола в соответствии с требованиями государственной фармакопеи

Задачи обучения: ознакомление с группой макроциклических производных пиррола, изучение физико-химических свойств представителей группы, знакомство с общими требованиями государственной фармакопеи по контролю качества цианокобаламина.

Основные вопросы темы:

1. Корриновые витамины.
2. Промышленное получение цианокобаламина.

3. Существование координационного комплекса в молекуле цианокобаламина.

4. Общие фармакопейные требования к оценке качества лекарственных препаратов производных пиррола.

5. Промышленный способ получения В₁₂.

6. Применение производных пиррола в медицинской практике.

Методы обучения и преподавания: информация по основным вопросам темы занятия

Литература:

1.Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии: Э.Н. Аксенова, О.П. Андрианова, А.П. Арзамасцев и др. – М.: Медицина, 2001. – 384 с.

2.Лабораторные работы по фармацевтической химии /Под ред. В.Г. Беликова. – М.: Высшая школа, 1989. – 375 с.

3. Государственная фармакопея Республики Казахстан: первое издание. – Астана: Изд. дом «Жибек жолы», 2008. – 592 с.

4.Государственная фармакопея СССР, ХI издание. – М.: Медицина, 1987.

 

Контроль (вопросы, ситуационные задачи и тесты):

1.При производстве какого вещества из культуральной жидкости актиномицета Streptomyces griseus получают В₁₂?

2.Опишите нуклеотидный фрагмент молекулы цианокобаламина?

3.Какой метод рекомендует ГФ Х издания для испытания подлинности и доброкачественности, а также количественного определения цианокобаламина?

4.Какая структура цианокобаламина представлена гидрированными пиррольными циклами?

5.Какие возможные методы количественного определения можно предложить для производных пиррола?

6.Какие условия хранения допускаются для лекарственных препаратов производных пиррола?

7.Что включает координационный комплекс цианокобаламина?

Тесты

1. В состав координационного комплекса цианокобаламина входит атом …

A) железа;

B) цинка;

C) кобальта;

D) меди;

E) ртути.

 

2. Нуклеотидный фрагмент молекулы цианокобаламина включает структурный элемент…

A) D-1-аминопропанола-2;

B) l-пропиламина-3;

C) хлорпропил-бис-амина гидрохлорида;

D) метоксихинолила;

E) циклогексена.

 

3. Внутрикомплексное соединение кобальта в цианокобаламине образуется при действии …

A) нафтола;

B) диметилформамида;

C) гидроксиламина;

D) нитрозо-R-соли;

E) β-аланина.

 

4. Положительный заряд иона кобальта в цикле цианокобаламина нейтрализуется отрицательно заряженным анионом …

A) аминокапроновой кислоты;

B) хлороводородной кислоты;

C) серной кислоты;

D) азотной кислоты;

Е) фосфорной кислоты.

 

5. Какой метод количественного определения цианокобаламина основан на поглощении электромагнитного излучения?

A) нейтрализации;

B) УФ-спектрофотометрии;

C) аргентометрии;

D) потенциометрического титрования;

E) комплексонометрии.

 

6. Цианокобаламин как побочный продукт получают при производстве …

A) терпингидрата;

B) стрептомицина;

C) аминалона;

D) пирацетама;

E) природного пенициллина.

 

ПРИЛОЖЕНИЕ

Задание 1. Провести испытание на подлинность и на чистоту лекарственного препарата – Cyanocobalaminum.

Подлинность:

А) 0,002% раствор препарата имеет максимумы поглощения при 278 + 1 нм, 361 + 1 нм и 548 + 2 нм.

Б) 1 мг препарата сплавляют с 0,05 г бисульфата калия в фарфоровом тигле, охлаждают, прибавляют 3 мл воды и нагревают до растворения плава. Затем нейтрализуют раствором едкого натра по фенолфталеину, прибавляют 0,5 г ацетата натрия, 0,5 мл разведенной уксусной кислоты и 0,5 мл 0,5% раствора нитрозо-Р-соли; появляется красное окрашивание, сохраняющееся после прибавления 0,5 мл соляной кислоты и кипячения в течение 1 минуты.

Испытание на чистоту:

- определение примеси псевдоцианокобаламина

1 мг препарата растворяют в 20 мл воды, помещают в делительную воронку, добавляют 5 мл смеси равных объемов свежеперегнанного крезола и четыреххлористого углерода и энергично взбалтывают в течение 1 минуты. Дают отстояться до полного разделения слоев. Сливают нижний слой в другую делительную воронку, приливают 5 мл разведенной серной кислоты, сильно взбалтывают и отставляют стоять до разделения слоев. Более полное разделение может быть достигнуто центрифугированием. Верхний слой должен быть бесцветным или окраска его не должна превышать окраску эталона, состоящего из 0,15 мл 0,1 н. раствора перманганата калия, разведенных водой до 250 мл.

Задание 2. Провести описание и испытание на подлинность лекарственного препарата – Solutio Cyanocobalamini pro injectionibus.