Студопедия — Занятие № 10
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Занятие № 10

Культура клеток – это клетки многоклеточных организмов (человека, животных), живущие и размножающиеся in vitro. Подразделяются на:

Ø первичные (неперевиваемые);

Ø полуперевиваемые;

Ø перевиваемые.

Первичные (неперевиваемые) культуры клеток – клетки, полученные непосредственно из органов и тканей организма (почек, легких, кожи, тимуса, тестикул эмбриона человека или молодых животных).

Этапы приготовления первичных культур клеток:

Ø выделение органа/ткани;

Ø измельчение и гомогенизация ткани до частиц размером 2-4 мм;

Ø разъединение клеток путем трипсинизации;

Ø внесение в пробирку (флакон, матрас) с питательной средой (среда 199, Игла);

Ø инкубирование в термостате – клетки начинают делиться до покрытия поверхности стекла в один слой и прекращают размножаться (контактное торможение).

Первичные культуры клеток живут ≈ 7-21 день, при пересевах меняют форму и гибнут.

Полуперевиваемые культуры клеток – диплоидные клетки человека, выдерживающие до 50-100 пассажей (после перевивания в новую пробирку со свежей питательной средой вновь начинают размножаться до образования монослоя).

Перевиваемые культуры клеток – это клетки, способные к размножению вне организма неопределенно длительное время (злокачественные/опухолевые клетки с гаплоидным набором хромосом, выдерживающие бесконечное количество пассажей): например, HeLa – клетки рака шейки матки (получены от женщины, умершей в 1956 г.), Нep-2 – клетки карциномы гортани и др.

Методы индикации вируса в культуре клеток:

1) цитопатическое действие (ЦПД) вируса на клетки – дегенеративные морфологические изменения клеток (мелкозернистое перерождение, округление, фрагментация, образование симпластов);

2) образование вирусом специфических внутриклеточных включений;

3) бляшкообразование (феномен Дальбекко) – образование в монослое клеток «стерильных пятен» (бляшек – деструктивные клетки, разрушенные вирусом и неспособные окрашиваться красителем нейтральным красным (количество бляшек соответствует количеству вирусных частиц);

4) цветная проба Солка – сохранение первоначального цвета среды (красного) при наличии вируса, тогда как активные незараженные вирусом клетки метаболизируют и изменяют цвет среды (желтый);

5) РГА с культуральной жидкостью;

6) реакция гемадсорбции (РГадс) – адсорбция эритроцитов на поверхности пораженной вирусом клетки;

7) феномен интерференции (используется для обнаружения вирусов, не оказывающих ЦПД и не вызывающих гемагглютинацию) – в зараженную материалом культуру клеток вносят индикаторный вирус (ВВС – вирус везикулярного стоматита) с известным ЦПД (симпластобразование) – при наличии в культуре клеток исследуемого вируса индикаторный вирус ЦПД не окажет (клетка может поражаться только одним вирусом).

Достоинства – получение максимальной концентрации вируса.

Недостатки – не все вирусы культивируются в культуре клеток.

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ДЛЯ ОБУЧАЮЩИХСЯ

по дисциплине «микробиология»

для специальности 060301 – Фармация (очная форма обучения)

 

К ЛАБОРАТОРНОМУ ЗАНЯТИЮ № 10

Тема: «Методы культивирования вирусов. Бактериофаги»

Утверждены на кафедральном заседании

протокол № ____ от «___»____________ 20__ г.

 

Заведующая кафедрой микробиологии им. доц. Б.М. Зельмановича

к.б.н., доц. ___________________Перьянова О.В.

 

Составители:

к.б.н., доц. ___________________Перьянова О.В.

ст. препод. ___________________Подгрушная Т.С.

 

 

Красноярск

Занятие № 10

Тема: «Методы культивирования вирусов. Бактериофаги»

2. Форма организации занятия: лабораторное занятие

3. Значение изучения темы

Лекарственно-устойчивые микроорганизмы возникли и стали развиваться после внедрения химиопрепаратов и антибиотиков в клиническую практику. Этот процесс наблюдается не только среди патогенных, но и условно- патогенных форм микроорганизмов. Последние часто становятся причиной осложнения, вплоть до тяжелых форм гнойно-септических заболеваний. Поэтому весьма актуально использование уже имеющихся и конструирование новых препаратов бактериофагов. В отличие от химиотерапевтических средств фаги действуют избирательно на клетки определенного вида, не затрагивают представителей нормальной микрофлоры и безвредны для человеческого организма. При создании препаратов бактериофагов необходимо обеспечивать их широкую валентность - полноту лизируемости циркулирующих штаммов.

Расширение путей введения фагов а организм требует разработки безбелковых безаллергенных сред для их приготовления, особенно в случае введения фагов детям грудного возраста, а также страдающим диатезами и другими аллергическими заболеваниями.

Неотложной задачей является расширение номенклатуры бактериофагов в соответствии со структурой гнойно-септических заболеваний - фаги к клебсиеллам, цитробактериям, провиденциям, гафниям, расширение валентности стафилококкового фага с включением рас, активных не только к золотистым, но и эпидермальным стафилококкам.

4. Цели обучения:

- - общая (обучающийся должен обладать ОК и ПК):

- способностью и готовностью к формированию системного подхода к анализу медицинской информации, опираясь на всеобъемлющие принципы доказательной медицины, основанной на поиске решений с использованием теоретических знаний и практических умений в целях совершенствования профессиональной деятельности (ПК-3);

- учебная:ознакомиться с практическим использованием бактериофагов в медицине и микробиологии

на основе теоретических знаний и практических умений обучающийся должен:

знать:

1. Умеренные и вирулентные бактериофаги, особенности их взаимодействия с клеткой

хозяина.

2. Практическое использование бактериофагов в микробиологии и медицине.

уметь

1Установить феномен бактериофагии на плотных и жидких питательных средах,

2.Оценить полученные результаты.

5. План изучения темы:




<== предыдущая лекция | следующая лекция ==>
Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций. | Тема 1.1 ОБЩИЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ СВЕДЕНИЯ

Дата добавления: 2015-09-15; просмотров: 813. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Картограммы и картодиаграммы Картограммы и картодиаграммы применяются для изображения географической характеристики изучаемых явлений...

Практические расчеты на срез и смятие При изучении темы обратите внимание на основные расчетные предпосылки и условности расчета...

Функция спроса населения на данный товар Функция спроса населения на данный товар: Qd=7-Р. Функция предложения: Qs= -5+2Р,где...

Аальтернативная стоимость. Кривая производственных возможностей В экономике Буридании есть 100 ед. труда с производительностью 4 м ткани или 2 кг мяса...

Тактика действий нарядов полиции по предупреждению и пресечению правонарушений при проведении массовых мероприятий К особенностям проведения массовых мероприятий и факторам, влияющим на охрану общественного порядка и обеспечение общественной безопасности, можно отнести значительное количество субъектов, принимающих участие в их подготовке и проведении...

Тактические действия нарядов полиции по предупреждению и пресечению групповых нарушений общественного порядка и массовых беспорядков В целях предупреждения разрастания групповых нарушений общественного порядка (далееГНОП) в массовые беспорядки подразделения (наряды) полиции осуществляют следующие мероприятия...

Механизм действия гормонов а) Цитозольный механизм действия гормонов. По цитозольному механизму действуют гормоны 1 группы...

Классификация и основные элементы конструкций теплового оборудования Многообразие способов тепловой обработки продуктов предопределяет широкую номенклатуру тепловых аппаратов...

Именные части речи, их общие и отличительные признаки Именные части речи в русском языке — это имя существительное, имя прилагательное, имя числительное, местоимение...

Интуитивное мышление Мышление — это пси­хический процесс, обеспечивающий познание сущности предме­тов и явлений и самого субъекта...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.013 сек.) русская версия | украинская версия