Все экспресс-методы выполняют после обеззараживания материала.

Микробиологическая диагностика чумы и туляремии

Перечень бактериологических лабораторий, проводящих исследования с особо опасными возбудителями заболеваний

1. Лаборатория отдела особо опасных инфекций центра ГосСанЭпидНадзора СПб. (Санкт-Петербург, Лиговский пр., 29)

2. Лаборатория особо опасных и вирусологических исследований (СПб, ул. Оборонная, д.35, лит.А).

3. Лаборатория особо опасных инфекций центр Гигиены и Эпидемиологии в Ленинградской области (Санкт-Петербург, ул. Ольминского, 27)

 

Задача:В лабораторию поступил материал от пациентов со схожими симптомами – главным из которых, был - наличие бубонов в шейной области. Материал из бубонов обоих пациентов был доставлен в лабораторию особо опасных инфекций.

Й этап

Образец 1	Образец 2
Опишите морфологию возбудителя. Окраска по Граму, х100 _____________________________________ _____________________________________	Опишите морфологию возбудителя. Окраска по Граму, х100 _______________________________________ _______________________________________
Морфология клеток Y.pestis вакцинный штамм EV, УТС, ув.х80000
Диагностикум с флюоресцирующими АТ к Y.pestis. Результат РИФ: _____________________________________ _____________________________________	Диагностикум с флюоресцирующими АТ к Francisella tularensis. Результат РИФ: _____________________________________ _____________________________________
Контроль(+) Образец 1 Образец2
Оцените результат реакции ПЦР на выявление Y.pestis ____________________________________________________________________________

Предположительный диагноз:

Пациент №1_________________________________________________

Пациент №2_________________________________________________

2 этап (2-5 часов от начала исследования):

выдача предварительного положительного ответана Y.pestis на основании наличия в мазках биполярно окрашенных грамотрицательных овоидных палочек, их специфического свечения при окраске мазка флюоресцирующими иммуноглобулинами, положитель­ной ПЦР.

Исследование Образца № 1 (подозрение на Y.pestis)

Оцените посев на кровяной агар _____________________________________ _____________________________________	Оцените характер роста на сердечно-мозговом бульоне
	Образец Контроль(-)
Оцените результат пробы нативного мате­риала с диагностическим бактериофагом Покровской и/или Л-413С к Y.pestis _____________________________________ _____________________________________	Оцените результат латекс-агглютинационной тест-системы для выявления капсульного антигена F1 Y. pestis). _____________________________________ _____________________________________
Контроль (-) Образец	____________________________________ _____________________________________
Оцените результат биопрбы на животных (заражение внутрибрюшинно, подкожно и/или накожно).

В качестве стимуляторов роста Y.pestis используют сульфит натрия в концентрации 1:4000 (1 мл 2,5 % раствора на 100 мл агара), гемолизированную кровь в концентрации 0,01-1 %, стимулятор роста чумного микроба из сарцин (стимулятор Карпузиди) согласно инструкции по применению препарата. В оча­гах, где циркулируют тиаминзависимые штаммы, в качестве стиму­лятора роста используют витамин B1 в концентрации 0,0001 мг на 100 мл среды или синтетическую среду 199 (3 мл на 100 мл среды).

Для подавления роста посторонней микрофлоры используют генцианвиолет в концентрации 1:100000-1:800000. Рабочую дозу определяют для каждой серии препарата перед обследовательским сезоном и указывают в паспорте на рабочий раствор генцианвиолета.

Помимо этого, для ингибирования посторонней флоры могут быть использованы теллурит калия в концентрации 1 300000, дезоксихолат натрия - 1 мг %, фосфомицин 50-100 мкг/мл.

 

3 этап (24-48 часов от начала исследования):

выдача подтверждения предварительного положительного ответа на основании наличия характерного роста на жидких и плотных питательных средах, наличия в мазках из этих сред грамотрицательных овоидных палочек с биполярным окрашиванием, положительной пробой с бактериофагами (лизис культуры чумны­ми бактериофагами Покровской и Л-413С).

Тетра-циклин	Ферментация: Глюкоза + Сахароза – Лактоза – Рамиоза-   Эскулин + Мочевина–
Чувствительность к АМП:	Проведите окончательную идентификацию культуры

_____________________________________

_____________________________________

 

Диагноз чумы у человека ставится на основании выявления у не­го возбудителя - выделение и идентификация культуры, обнаружения специфического для Y.pestis антигена FI и специфических антител к антигену FI в сыворотках больных и переболевших.

Все экспресс-методы выполняют после обеззараживания материала.

Окончательный положительный ответ может быть поставлен
через 2-6 суток по результатам идентификации культуры чумного
микроба и подтверждения ее выделением идентичной культуры от
биопробного животного.

Окончательный отрицательный диагноз дают на 5-8-е сутки,
как и при исследовании материала от больного.