КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ
Количественное определение проводят спектрофотометрическим методом по реакции диазотирования и азосочетания с реактивом Грисса. Полученные данные сравнивают с данными предельно допустимого содержания и дают заключение о возможности употребления в пищу данных продуктов. 3.1. Количественное определение нитрит – ионов Приготовление стандартного раствора нитрита натрия. Для приготовления основного стандартного раствора нитрита натрия 0,4927 г дважды перекристаллизованного и высушенного до постоянной массы при 110 0С нитрита натрия помещают в мерной колбу на 1000 мл, растворяют в дистиллированной воде и доводят до метки. Для консервации добавляют 2 мл хлороформа с таким расчетом, чтобы общий объем раствора был 1000 мл. Раствор устойчив в течении шесть месяцев при хранении в холодильнике при 4 – 5 °С. Концентрация нитритного азота составляет 100 мкг/мл. Рабочий стандартный раствор нитрита натрия готовят разбавлением в 100 раз основного раствора в день проведения анализа. Для этого 1 мл основного раствора помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор используют свежеприготовленным. Концентрация нитритного азота в рабочем растворе составляет 1 мкг/мл. Построение калибровочного графика. В мерные колбы на 25 мл вносят соответственно 1,0; 2,0; 3,0; 5,0; 7,0 мл рабочего стандартного раствора нитрита натрия и доводят до метки дистиллированной водой. Растворы перемешивают и переливают в конические плоскодонные колбы на 50 мл. Затем в каждый раствор добавляют 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты и тщательно перемешивают. Значение pH полученной смеси должно быть около 1,4. Дают раствору постоять 3 – 10 мин, затем приливают 0,5 мл раствора α – нафтиламина, 1,0 мл раствора ацетата натрия и хорошо перемешивают. Полученный окрашенный раствор должен иметь pH в границах 2,0 до 2,5. Через 10 – 30 мин определяют его оптическую плотность при λ = 520 нм (см. рис. 2) в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют дистиллированную воду. По средним значениям из 3 определений строят калибровочный график (рис. 3). Полученные данные заносят в таблицу: Таблица 2. Данные для построения калибровочного графика.
Количественное определение нитритов, изолированных из биологического материала, проводят следующим образом. Если анализируемая жидкость после диализа окрашена или содержит тонкую взвесь, вводят по 2 мл густой суспензии гидроокиси алюминия на каждые 100 мл жидкости, тщательно взбалтывают, дают постоять несколько минут и фильтруют, отбрасывая первые порции фильтрата. Затем нейтрализуют анализируемую жидкость раствором кислоты или щелочи до pH = 6,5 – 7,5.
Рис. 2. Спектр поглощения нитрит-ионов по реакции с реактивом Грисса.
Рис. 3. Калибровочный график.
Отбирают 25 мл диализата и добавляют к ним указанные выше реактивы, контролируя при этом pH. Измеряют оптическую плотность полученного раствора при λ = 520 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. В качестве раствора сравнения дистиллированную воду. По калибровочному графику (рис. 3) находят содержание нитрит - иона и рассчитывают концентрацию его в исходном биологическом материале по формуле: C (мкг/кг) = (Cx · Vд)/mн, где Cx – концентрация нитрит-иона, мкг/мл, найденная по калибровочному графику Vд – объем диализата (100-200 мл) mн – масса навески биоматериала. Если при определении нитритов образуется очень интенсивная окраска, не укладывающаяся при определении оптической плотности в пределы калибровочной кривой, необходимо повторить определение, взяв меньшее аликвотное количество диализата для анализа и доведя анализируемый объем до 25 мл дистиллированной водой. Далее провести анализ, как указано выше, учитывая при расчетах разведение этого раствора.План занятия 1. Рассказать преподавателю ход выполнения работы.2. Взять задание у преподавателя и поставить диализ.3. Сдать преподавателю теоретический допуск.4. Провести качественные реакции диализата в сравнении с известными веществами и показать преподавателю.5. Приготовить калибровочные растворы, снять их оптическую плотность и построить калибровочный график.6. Провести количественное определение нитритов в диализате.7. Выполнить необходимые расчеты, показать полученные данные преподавателю.8. Сделать вывод о возможности употребления анализируемого биологического материала.9. Написать отчет о проделанной работе и сдать его преподавателю.ВОПРОСЫ для контроля 1. Токсикологическое значение нитритов, нитратов.2. Источники попадания нитритов, нитратов в организм человека3. Процессы метаболизма нитритов и нитратов в организме человека, биомишени.4. Симптомы отравления нитритами, нитратами5. Метод изолирования данных ионов из биологического материала.6. Что такое диализ? Область применения диализа. Законы, на которых основан процесс диализа.7. Что такое мембрана, виды мембран, принцип их действия.8. Написать уравнения реакций:8.1. Нитрита и нитрата с дифениламином.8.2. Нитрита с реактивом Грисса.8.3. Нитрата с цинковой пылью в щелочной среде.9. Условия проведения реакции с реактивом Грисса.10. Для чего необходимо добавлять ацетат натрия при количественном определении нитритов11. Суть метода спектрофотометрии.12. Что такое длина волны? От чего зависит длина волны?13. Основной закон светопоглощения.14. Чем обусловлен выбор длины волны, размера кюветы?15. Как должен выглядеть калибровочный график для данной работы?16. Написать все необходимые формулы для расчета, указать единицы измерения.
|
