Коли-титр воды - это наименьший объем воды (мл), в котором обнаруживается 1 кишечная палочка

Коли-индекс - количество кишечных палочек в 1 л воды.

Установив коли-титр, можно произвести пересчет на коли-индекс. В отличие от других микроорганизмов, кишечная палочка может размножаться при температуре до 45°С, легко сбраживать углеводы с образованием кислоты и газа. Это свойство микроба положено в основу определения коли-титра.

Существует несколько методов определения ОКБ, ТКБ и коли-титра.

Метод мембранных фильтров. Сущность этого метода заключается в концентрировании микробов из определенного объема воды на мембранных фильтрах с последующим выращиванием их на фильтрах на среде Эндо и дифференцированием выросших колоний.

Мембранные фильтры № 3 кипятят в дистиллированной воде, кладут на асбестовый фильтр Зейтца и фильтруют через него определенное соответствующей методикой количество воды (например, питьевой воды - 333 см³, воду открытых источников - в нескольких объемах: 100 см³, 10 см³, 1 см³, 0,1 см³). После окончания фильтрации фильтр захватывают стерильным пинцетом и кладут на поверхность среды Эндо в чашках Петри. Инкубируют в термостате 18-24 ч. При обнаружении на фильтре колоний, характерных для кишечных палочек (темно-красных с металлическим блеском или без него), готовят мазки, окрашивают по Граму, ставят оксидазную пробу. Оксидазной пробой дифференцируют кишечную палочку от других грамотрицательных водных сапрофитов, которые в отличие от кишечной палочки обладают ферментом оксидазой (например, Pseudomonas sp.)

Подсчитывают лактозоположительные оксидазоотрицательные колонии грамотрицательных микробов, что характерно для кишечной палочки, и вычисляют коли-индекс.

Пример: профильтровано три объема воды по 100 см³. На первом фильтре выросло 3 колонии кишечной палочки, на втором - 5 колоний, на третьем - 4 колонии. Среднее арифметическое (3+5+4): 3=4 колонии при посеве 100 мл воды, соответственно в 1000 мл - 40 кишечных палочек. Значит коли-индекс равен 40, коли-титр равен 25 (1000: 40).

Бродильный метод. Сущность этого метода заключается в посеве определенных объемов воды в дифференциально-диагностические среды. При наличии изменений сред, характерных для роста кишечной палочки, пересевают культуру на среду Эндо и проводят ее идентификацию.

В зависимости от водоисточника, проводят посев различных объемов воды. Например, при исследовании воды открытых водоемов – 100 см³,
10 см³, 1 см³, 0,1 см³. Объемы 100 см³ и 10 см³ высевают в колбы или флаконы, 1 см³ и 0,1 см³ — в пробирки.

Для исследования воды бродильным методом используют дифференциально-диагностические среды Кода (с лактозой и индикатором бромтимоловым синим), Хейфеца (с маннитом, розоловой кислотой и метиленовым синим), Кесслера (с лактозой и генцианом фиолетовым), Булира (с маннитом и нейтральным красным с поплавком). Посевы воды культивируют в термостате при 37°С или при 44°С в течение суток. Из пробирок и флаконов, в которых отмечено помутнение среды, образование кислоты или газа при расщеплении углевода, производят пересев на среду Эндо бактериологической петлей густым штрихом для получения изолированных колоний. При обнаружении темно-красных колоний с металлическим блеском или без него проводят микроскопию с окраской по Граму и дальнейшую идентификацию кишечной палочки по общепринятой методике.

Результат анализа выражают в виде коли-индекса, который определяют по специальным таблицам. Так, например, при отсутствии роста кишечной палочки во всех объемах воды (100 см³, 10 см³, 1 см³, 0,1 см³) коли-индекс будет менее 9, коли-титр — более 111.

По ГОСТу коли-титр водопроводной воды в городах должен быть не менее 300 (коли-индекс не более 3), в многомиллионных городах коли-титр не менее 500 (коли-индекс не более 2). Вода открытых водоемов считается хорошей при коли-титре 100, коли-индексе 10.

В настоящее время наряду с определением коли-титра в воде проводят также определение титра Enterococcus faecalis. Для этого цельную воду и ее разведения в объеме 1 см³ засевают в одну из жидких элективных сред для энтерококков (щелочно-полимиксиновая энтерококковая среда и др.), а затем проводят идентификацию данных микроорганизмов.

В качестве СПМО воды используют также бактериофаги кишечной палочки – коли-фаги, а также фаги сальмонелл и шигелл. Их обнаруживают там, где есть соответствующие бактерии, к которым эти фаги адаптированы. Фаги выживают во внешней среде более 9 мес. Они ценны как показатель фекального загрязнения, особенно энтеровирусами, так как фаги выделяются из сточных вод с той же частотой, что и энтеровирусы (например, возбудитель гепатита А человека). По устойчивости к хлору фаги сравнимы с энтеровирусами, поэтому их считают одним из показателей качества очистки сточных вод.

Коли-фаги – бактериальные вирусы, способные лизировать E.coli и формировать при температуре 37⁰С через 18 ч зоны лизиса бактериального газона (бляшки, негативные колонии) на питательном агаре.

Метод определения коли-фагов в питьевой воде заключается в предварительном накоплении их в среде обогащения на культуре E.coli и последующем выявлении зон лизиса (просветления) газона E.coli на питательном агаре. Метод предназначен для проведения текущего контроля качества питьевой воды.