Программа №1.

Для определения количества белка в образце используется ряд методик:

§ Биуретовый метод

§ Основан на образовании биуретового комплекса (имеет фиолетовый цвет) пептидных связей белков с двухвалентными ионами меди. В методе используют т. н. биуретовый реактив, состоящий из KOH, CuSO₄ и цитрата натрия (или тартрата натрия). В образовавшемся комплексе медь связана с 4 азотами координационными связями, а с 2 кислородами — электростатическими. Полноценный комплекс образуется лишь с пептидами, состоящими более чем из 4 остатков. Оптическую плотность раствора (прямо пропорциональную концентрации пептида) определяют при 540—560 нм.

§ К достоинствам метода стоит отнести его низкую чувствительность к посторонним веществам, невысокую погрешность.

§ Чувствительность метода — 2-10 мг/мл.

§ Микробиуретовый метод

§ Метод основан на образовании окрашенного в фиолетовый цвет комплекса, образующегося в результате взаимодействия пептидных связей с Cu2+ в щелочной среде. К 0,2 мл ПМ лимфоцитов, сыворотки или плазмы добавляли 3,5 мл раствора NаОН и 0,2 мл реактива Бенедикта. Выдерживали 15 мин при комнатной температуре и спектрофотометрировали на СФ — 46 при 330 нм. Построение калибровочного графика проводили по стандартному раствору белка.

§ Метод Бредфорда

§ Метод основан на реакции красителя кумасси (coomassie) с аргинином и гидрофобными аминокислотными остатками. Связанная форма имеет голубую окраску с максимумом поглощения при 595 нм. Таким образом увеличение адсорбции раствора при длине волны, равной 595 нм, пропорционально количеству белка в растворе.^[2]

§ Метод даёт хорошее значение концентрации белка в пределах от 2 мкг/мл до 120 мкг/мл (в этих границах соблюдается линейная зависимость увеличения адсорбции от концентрации, в целом чувствительность метода зависит от соотношения концентраций определяемого белка и красителя: чем больше красителя, тем чувствительней метод), менее «капризный» по сравнению с методом Лоури.

§ Метод Лоури

§ В щелочной среде ионы Cu⁺² образуют комплекс с пептидными связями, переходя в Cu⁺. Одновалентные ионы меди реагируют с реактивом Фолина (фосфомолибденовая кислота сфенолом), образуя нестабильный продукт, переходящий в молибденовую синь, с максимумом адсорбции при 750 нм. Увеличение адсорбции при 750 нм пропорционально концентрации белка. Метод очень чувствителен к наличию в растворе посторонних восстановителей (что затрудняет его использование при определении белка в неочищенных препаратах), чувствительность к белку - 10 - 100 мкг/мл.

§ Спектрофотометрический метод

 

Программа №1.

1 круг

1. Скручивания в TRX

2. Становая тяга на прямых ногах

3. Разведение гантелей лежа на горизонтальной скамье

4. Приседания со штангой на плечах

5. Подъем корпуса на "римской скамье"

6. Прыжки на скакалке

7. Тяга горизонтального блока

Время прохождения круга 12 минут, ЧСС средний 140 ударов минуту, ЧСС максимальный 150 ударов в минуту. Стремиться уложиться в указанное время

 

2 круг.

1. Скручивания в TRX (усложнение техники)

2. Становая тяга на прямых ногах (увеличение внешнего отягощения)

3. Разведение гантелей лежа на фитболе (усложнение за счет баланса)

4. Сплит-приседания со штангой на плечах (усложнение за счет координации)

5. Скручивания на BOSU с симметричной тягой (усложнение за счет баланса и координации)

6. Прыжки на скакалке (увеличение времени под нагрузкой)

7. Тяга стоя в наклоне (модификация упражнения из регионального в глобальное)

Время прохождения круга 14 минут, ЧСС средний 145 ударов минуту, ЧСС максимальный 160 ударов в минуту. Стремиться уложиться в указанное время

 

1. Скручивания в TRX (усложнение техники)

2. Становая тяга на прямых ногах стоя на core платформе (усложнение за счет баланса)

3. поочередное разведение гантелей лежа на фитболе (усложнение за счет координации)

4. Сплит-приседания с шагом назад (усложнение за счет координации и плиаметрики)

5. Скручивания на фитболе с отягощением (модификация и усложнение за счет баланса и внешнего отягощения)

6. Прыжки на скакалке (увеличение времени под нагрузкой)

7. Тяга в TRX (модификация и усложнение за счет координации и баланса)

Время прохождения круга 14 минут, ЧСС средний 150 ударов минуту, ЧСС максимальный 170 ударов в минуту. Стремиться уложиться в указанное время