Диагностика субклинических маститовСкрыто протекающий мастит диагностируют путем исследования молока одним из быстрых диагностических тестов с последующим подтверждением диагноза пробой отстаивания и бактериологически. Лактирующих коров в хозяйстве обследуют на скрыто протекающий мастит один раз в месяц. Исследуют порции молока после доения. Лабораторные методы основаны на прямых и косвенных методах подсчёта соматических клеток. К прямому методу относят подсчет на стекле по Прэскотту-Бриду, который является и контрольным при автоматическом подсчёте соматических клеток в молоке. При этом чистое предметное стекло кладут на лист бумаги расчерченный на квадраты со стороной 1 см. Пробу молока тщательно перемешивают и с помощью микропипетки наносят на 3-4 квадрата предметного стекла по 0,01 см3. Нанесенную каплю молока равномерно распределяют по площади квадрата стеклянной палочкой или препаровальной иглой. Мазок высушивают на воздухе, фиксируют и одновременно обезжиривают нанесением сначала метилового спирта на 10-15 мин, а затем спирт-эфирной смеси до высыхания. Окрашивают мазок рабочим раствором краски Романовского-Гимза (3-4 мл продажного раствора на 100 мл дистиллированной воды) методом подслаивания или при вертикальном положении стекла в течение 20-30 мин. После окрашивания мазок промывают водой и высушивают при комнатной температуре. Подсчет соматических клеток ведут под микроскопом с иммерсионным объективом. В каждом мазке просматривают 100 полей зрения. Подсчитанное число клеток умножают на коэффициент с учетом значений объектива и окуляра и определяют их количество в 1 см3 молока. Для выведения коэффициента с помощью объект-метра определяют диаметр поля зрения микроскопа и вычисляют площадь одного поля зрения по формуле яR2. Затем вычисляют, сколько полей зрения микроскопа размещаются на площади 1 см2. Полученный результат переводят на объем. Пример:определение коэффициента пересчета при окуляре 7 и объективе 90. В поле зрения размещается 17 делений объект-метра. Величина одного деления - 0,01 мм. Диаметр поля зрения - 0,01 мм х 17 = 0.17 мм, радиус - 0,085 мм. площадь одного поля зрения - 3,14 х 0,0852 = 0,023 мм2 или 0,00023 см2. Площадь полей зрения будет равна 0,00023 см2 х 100 = 0,023 см2. На площади 1 см2 таких участков будет: 1: 0,023 = 43,48. Взятый объем молока 0,01 см3 в 100 раз меньше 1см3. Коэффициент в данном случае будет равен 4348 (43,48x100). За окончательный результат принимают среднее арифметическое двух параллельных определений. К прямым методам подсчета соматических клеток относят камерные методы по Н.М. Хилькевичу, И.И. Архангельскому и др. в модификации В.И. Слободяника, подсчет с помощью электронного прибора "Фоссоматик". электронных счетчиков частиц: целлоскоп, "Культер-Каунтер", пикоскель, гемоцитометр кондуктометрический марки ГЦМК-3 и др. Косвенно соматические клетки определяют с помощью диагностических реактивов беломастина, мастидина, димастина, мастоприма, пробы Уайтсайда, содержащих поверхностно-активные вещества (ПАВ). ПАВ разрушают мембраны клеток, высвобождают из ядер ДНК и вступают с ней в реакцию, образуя желе. По степени образования желеобразного сгустка косвенно судят о количестве соматических клеток в молоке. Реакцию молока с диагностическим реактивом проводят на молочно-контрольных пластинках ПМК-1 или ПМК-2, имеющих 4 луночки, соответственно долям вымени коровы. Определение соматических клеток с помощью диагностических реактивов проводят в молоке из отдельных долей вымени или удоя коровы. После каждого исследования необходимо промывать молочно-контрольные пластинки. Проба с беломастином. Реакция основана на способности поверхностно-активного вещества образовывать гель с молоком, содержащим соматические клетки. При исследовании молока (секрета) из вымени коров, диагностикум разводят дистиллированной или кипяченой водой в соотношении 1: 3 (к 100 мл беломастина добавляют 300 мл воды). Срок использования рабочего раствора 8 месяцев. Для проведения пробы с беломастином в луночки молочно-контрольной пластинки (МКП-1) из соответствующих долей вымени выдаивают по 1 мл испытуемого молока и добавляют 1 мл рабочего раствора диагностикума с помощью пипетки. Смесь молока с реактивом перемешивают стеклянной палочкой в течении 9-10 секунд. Результаты реакции: · отрицательная реакция (-) - жидкая смесь остаётся однородной; · сомнительная реакция (-, +) - в смеси образуются слизистые нити; · положительная реакция (+) - смесь приобретает консистенцию слизистой массы или желеобразного сгустка. · Для контроля результатов лечения больных маститами животных молоко исследуют на 10-14 день после введения препаратов. · В сборном молоке при отрицательной реакции в 1 мл содержится до 500 тыс. соматических клеток, при сомнительной - от 500 тыс. до 1 млн; при положительной - свыше 1 млн.
· отрицательная реакция (-) - однородная жидкость; · сомнительная реакция (-, +) - следы образования желе; · положительная реакция (+) - ясно видимый сгусток, который можно выбросить из луночки палочкой при перемешивании. · На пластинке ПМК-2 при отрицательной реакции: · (-) - образуется однородная смесь; · (-,+) - при сомнительной реакции во время вращения пластинки на дне луночки заметны тонкие нити (тяжи) без тенденции образования сгустка; · (+) - положительная реакция отчетливое появление слабого или быстро образующегося плотного сгустка, концентрирующегося при вращении пластинки в центре луночки.
Проба с 1% раствором мастоприма. Препарат мастоприм представляет собой порошок желтоватого цвета, состоящий из смеси сульфанола (4 части) с едким натрием (1 часть). Раствор мастоприма готовят на дистиллированной воде. Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2% раствором мастидина. Проба с димастином (по В.И. Мутовину.) Димастин включает в себя 2 реагента: поверхностно активное вещество акрилсульфонат и индикатор бромкрезол пурпур. Проба позволяет одновременно выявлять в молоке щелочную реакцию и повышенное содержание клеток. Для этого в лунку молочно-контрольной пластинки вносят пипеткой по 1 мл исследуемого молока. Добавьте к нему из склянки 1 мл 5% раствора димастина. Стеклянной палочкой смешивают0 молоко с реагентом и сравните показания реакции. Молоко из больной четверти приобретает малиновый цвет и образует желеобразный сгусток. Молоко из здоровой доли - оранжевый цвет, а его консистенция не изменяется. Проба Уайтсайда. Проба основана на косвенном учете повышенного содержания лейкоцитов и эпителиальных клеток. В лунку молочно-контрольной пластинки вносят глазной пипеткой 5 капель молока и добавляют 2-3 капли 4% водного раствора едкого натра. Реактивную смесь перемешивают стеклянной палочкой 20-30 сек. Молоко из больной доли вымени дает образование желеобразного сгустка. Проба с розоловой кислотой. В лунку молочно-контрольной пластинки вносят 10 мл молока и добавить 1 мл 0,1% раствора розоловой кислоты на 65% спирте. В норме содержимое приобретает светло-розовую окраску. При патологии окраска содержимого имеет цвет от светлого до темно-красного. Проба с мастит-диагностом. В состав мастит-диагноста входит: вода 100 мл, сульфанол-30, тринолинфосфат-5г, бромтимоловый синий - 0,02г, 1% раствор розоловой кислоты-0,5 мл. В лунки молочно-контрольной пластинки вносят 1 мл молока и 1 мл реактива и смешивают. Гомогенная смесь - молоко от здоровых коров; наличие плотного желеобразного сгустка, тягучей массы или редко слизи - положительная реакция на скрытый мастит. Бромтимоловая проба по Эрасту. Реактив: 0,1 г бромтимолблау + 100 мл 960 спирта. Берут 5 мл молока и добавляют 1 мл реактива, встряхивают в пробирке. При норме цвет желтоватый, желтый, желто-салатовый, желто-зеленый. Патология - светло-зеленый, зеленый, ярко-зеленый, сине-зеленый и синий цвет Бромтимоловая проба по Логвинову. Реактив: 0,1 г бромтимолового индикатора + 20 мл 960 спирта + 80 мл дистиллированной воды. Берем 1 мл молока и 1 мл бромтимоловой пробы в луночки прибора для определения качества молока. Если появляется синяя окраска смеси, то реакция положительная. Если желтоватый цвет или без изменений, то реакция отрицательная. Проба с бензидином. Используется для выявления в молоке пигментов крови. В пробирку наливают 5 мл 3% -ного раствора перекиси водорода и 2 мл насыщенного раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте. После тщательного взбалтывания в смесь прибавляют 2-10 капель молока. Положительная реакция - смесь окрашивается сначала в зеленый, а через минуту в темно-синий цвет; отрицательная - смесь светлая с беловатым хлопьевидным осадком.
|
