Работа 4. Подсчет количества эритроцитов в крови при помощи камеры Горяева.

Для подсчета количества эритроцитов используется счетная камера Горяева. Она представляет собой толстое стекло, которое четырьмя поперечными желобками разделено на три узкие площадки. Средняя площадка ниже боковых на 0,1 мм и на этой площадке по обе стороны от поперечного желобка, делящего её на две части, нанесены сетки Горяева. Так как высота боковых площадок на 0,1 мм боль­ше средней, то, если к ним притереть покровное стекло, над сетками обра­зуются камеры глубиной в 0,1 мм. Каждая сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов (15x15). Каждый третий квадрат разделен дополнительно попе­речными и продольными линиями на 16 маленьких квадратиков. Таких больших квадратов, разделенных на малые, в сетке 25. Сторона малого квадратика равняется 1/20 мм, площадь -1/20 ^. 1/20 = 1/400 мм². Объем столбика жидкости над каждым малым квадратиком равен 1/400 ^. 1/10 =1/4000 мм³. В этом объ­еме подсчитывают эритроциты. Для подсчета эритроцитов кровь разводят в 200 (или 100) раз.

Методика выполнения работы: 1. Обработать безымянный палец левой руки спиртом, проколоть скарификатором, снять ватным там­поном первую каплю крови. Выдавить вторую каплю крови и натянуть в капилляр смесителя (меланжера) крови до отметки 0,5. Не давая крови свернуться, быстро втянуть в капилляр 1 % раствор хлорида натрия до от­метки 101. Хорошо перемешать кровь с раствором в расширенной части смесителя и положить в лоток. 2. Приготовить камеру Горяева к работе. Для этого протереть камеру и покровное стекло спиртом, просушить, затем накрыть покровным стеклом так, чтобы его края располагались на боковых площадках, и притереть его, двигая с небольшим усилием вдоль площадок, до появле­ния радужных колец. 3. Аккуратно размешать раствор в смесителе, выпустить первые две капли крови на ватку и прикоснуться кончиком смесителя к краю притертого покровного стекла. В силу капил­лярности раствор заполнит камеру. Считать эритроциты при малом уве­личении с окуляром 15, объективом 20. 4. Сосчитать количество эритроцитов в 80 малых квадратах, т.е. в 5 больших, разделенных на 16 малых. Для полу­чения точного результата необходимо считать эритроциты, лежащие внутри, на верхней и левой границе маленького квадрата. При подсчете рекомендуется на листе бумаги нарисовать 5 больших квадратов, разделить их на 16 малых и в каждый квадрат вписать подсчитанное количество эритроцитов. После заполнения квадратов найти сумму эритроцитов в 5 больших квадратах и вычислить по формуле количество эритроцитов в 1 мм³ крови.

ФОРМУЛА ВЫЧИСЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ЭРИТРОЦИТОВ:

где:

X - искомое число эритроцитов, Э - сумма эритроцитов в 80 малых квадратах, 80 - количество малых квадратов, 200 - разведение крови, 1/4000 - объем столбика жидкости над малым квадратом.

Рекомендации к оформлению протокола. При оформлении протоко­ла вписать в 80 малых квадратов найденное ко­личество эритроцитов. Сравнить результат исследований крови с нормой. При отклонении от нормы указать возможные причины данного несоответ­ствия.