Качественный анализ
Для обнаружения кумаринов в растительном сырье используют их лактонные свойства, способность флуоресцировать при УФ- освещении и давать окрашенные растворы с диазосоединениями, микросублимацию и хроматографический анализ спиртовых или хлороформных экстрактов сырья. Ввиду плохой растворимости кумаринов в водных и лучшей в неполярных фазах разделение их осуществляется путем распределительной хроматографии на импрегнированной бумаге. В качестве подвижной фазы используют бензин, петролейный эфир (tкип= 60-100°С), смесь петролейный эфир - бензол - метиловый спирт (5:4:1), в качестве неподвижной фазы - 20%-ный водный раствор этиленгликоля или пропиленгликоля, 10%-ный формамид в метиловом спирте. Как правило, неподвижной фазой предварительно пропитывается хроматографическая бумага. Хроматографирование осуществляется нисходящим способом в течение 1,5-2ч. Хроматограммы после высушивания просматривают в УФ-свете. Кумарины в зависимости от структуры имеют голубую, синюю, фиолетовую, зеленую, желтую флуоресценцию, флуоресцирующие пятна кумаринов отмечают и хроматограммы обрабатывают щелочью. После этого их высушивают в сушильном шкафу при 120°С и вновь просматривают под УФ-лампой; как правило, флуоресценция усиливается. Затем хроматограмму обрабатывают диазотированным сульфаниламидом, от действия которого кумарины в зависимости от структуры окрашиваются в оранжевый, красно-оранжевый и фиолетовый цвета. В некоторых случаях после просматривания хроматограммы в УФ—свете ее обрабатывают реактивом Драгендорфа или иодом. Кумарины проявляются в виде пятен, окрашенных в коричневый цвет. Помимо бумажной хроматографии широко используют метод тонкослойной хроматографии. Хроматографию проводят в тонком слое оксида алюминия или силикагеля. Хорошее разделение кумаринов в тонком слое было достигнуто при применении следующих систем растворителей: этилацетат - бензол (1:2); хлороформ - петролейный эфир (1:2). Проявление кумаринов на хроматограммах проводится точно так же, как в случае проявления бумажных хроматограмм.
|
