Б)Куриные эмбрионы

В тканях эмбриона, его оболочках, желточном мешке способны размножаться многие патогенные вирусы человека и животных. При этом имеет значение избирательность вирусов к той или иной ткани: вирусы группы оспы хорошо репродуцируются и накапливаются в клетках хорион-аллантоисной оболочки, вирус паротита – в амнионе, вирусы гриппа – в амнионе и аллантоисе, вирус бешенства – в желточном мешке. Строение 12-дневного куриного эмбриона представлено на рисунке 2.

1 – эмбрион; 2 – хорион-аллантоисная оболочка; 3 – аллантоисная полость; 4 – амниотическая полость; 5 – белок; 6 – экстраэмбриональная полость; 7 – желточный мешок; 8 – воздушная полость.

Рисунок 2 –Строение 12-дневного куриного эмбриона

Метод культивирования вирусов в развивающихся эмбрионах имеет ряд преимуществ перед другими методами:

· плотная скорлупа довольно надежно защищает внутреннее содержимое от микроорганизмов;

· эмбрионы не имеют антител и восприимчивы ко многим группам вирусов;

· при заражении куриных эмбрионов получают больший, чем при других методах культивирования, выход вируссодержащего материала;

· метод заражения куриных эмбрионов прост и доступен любым вирусологическим лабораториям, эмбрионы обладают достаточной жизнеспособностью и устойчивостью к возбудителям внешних факторов.

Однако куриные эмбрионы не всегда свободны от латентных вирусных и бактериальных инфекций. Трудно наблюдать за динамикой патологических изменений, происходящих в эмбрионе после заражения его вирусом. При вскрытии зараженных эмбрионов часто не обнаруживают видимых изменений и выявляют вирус с помощью реакции гемагглютинации и другими методами. В зараженных эмбрионах невозможно проследить за нарастанием титра антител. Метод культивирования в куриных эмбрионах пригоден не для всех вирусов.

Для вирусологических исследований используют эмбрионы 7-12-дневного возраста, которые получают из птицеводческих хозяйств. Можно выращивать эмбрионы в обычном термостате, на дно которого ставят лотки с водой для увлажнения воздуха. Температура в термостате должна быть 37 °С, а влажность воздуха – от 60 % до 65 %. Отбирают крупные, чистые (но немытые), оплодотворенные яйца от белых кур, хранившиеся не более 10 суток при температуре от 5 °С до 10 °С. Оплодотворенные яйца распознают по наличию зародышевого диска, который при просвечивании с помощью овоскопа имеет вид темного пятнышка. В термостате яйца содержат на специальных деревянных или металлических подставках, имеющих несколько рядов отверстий размером от 3,5 до 4 см. В процессе инкубации яйца следует ежедневно выносить из термостата на время от 20 до 30 мин для проветривания и периодически просматривать их в затемненной комнате под овоскопом с целью контроля за развитием эмбриона.

При работе с вирусами могут быть использованы различные методы заражения эмбрионов, но наибольшее практическое применение получили нанесение вируса на хорион-аллантоисную оболочку, введение в аллантоисную, амниотическую полости и желточный мешок (рисунок 3). Выбор метода зависит от биологических свойств изучаемого вируса. Перед заражением определяют жизнеспособность эмбриона на овоскопе. Живые эмбрионы подвижны, хорошо видна пульсация сосудов оболочек. При овоскопировании отмечают простым карандашом на скорлупе границы воздушного мешка или место расположения эмбриона, которое определяют по его тени на скорлупе.

Куриные эмбрионы заражают в боксе в строго асептических условиях, используя инструменты, стерилизованные кипячением. При любом методе заражения скорлупу над воздушным пространством прожигают на огне, затем смазывают 2 % йодной настойкой, снова протирают спиртом и обжигают.