Культуральное исследование

Культуральное исследование является высокочувстви­тельным и специфическим методом лабораторной диагности­ки микозов. Его необходимо производить независимо от ре­зультатов микроскопии, так как культуральный метод позво­ляет иногда выявлять возбудителя при отрицательных данных микроскопии; он дает возможность определять род и вид возбудителя и, следовательно, проводить адекватную те­рапию и профилактику заболевания. Особенно полезен культуральный метод для диагностики латентных форм ми­козов, носительства дерматофитов здоровыми людьми.

Перед посевом патологического материала его расщепля­ют на предметном стекле на мелкие кусочки, 5 - 6 из них переносят на поверхность косого агара и располагают на расстоянии 1 - 2 см один от другого. Материалом одной про­бы засевают не менее 2 - 3 пробирок (волосы) или 4 - 5 про­бирок (кожные и ногтевые чешуйки). Для первичной изоля­ции дерматофитов лучше всего пригодны стандартная агари-зированная среда Сабуро с 2 - 4% глюкозы или сусло-агар, содержащие антибиотики (пенициллин 50 мкг/мл + стреп­томицин или биомицин (50 мкг/мл и 200 мкг/мл соответст­венно) и антидрожжевой антибиотик актидон (циклогексамид) 0,1 - 0,5 мг/мл. Актидон не влияет на рост дермато­фитов и подавляет многие плесневые грибы, а также виды Candida и Cryptococcus [Аравийский Р. А., Горшкова Г. И., 1995].

Посев производят в боксе над пламенем газовой или спиртовой горелки платиновой петлей, микологическим крючком или лопаточкой из нихрома. Держа пробирку в ле­вой руке, охватывают ее над пламенем горелки, захватывая пробку мизинцем правой руки, которой одновременно дер­жат петлю. Прокаленную докрасна петлю остужают и одно­временно увлажняют прикосновением к поверхности среды в стороне от места предполагаемого посева. Затем берут час­тицу материала и наносят на поверхность агара. Пробирку закрывают пробкой, предварительно обожженной над пламе­нем. Так же производят пересев из пробирки в пробирку.

Аналогичным образом производят посев на чашку Пет­ри. Необходимо, чтобы имеющаяся в ней среда как можно меньше соприкасалась с окружающим воздухом, поэтому крышку следует приподнимать настолько, чтобы в нее сво­бодно могла пройти только петля с патологическим материа­лом.

Посевы инкубируют при 22 - 30 °С (лучше всего 28 °С). Появление роста дерматофитов отмечается с 4-го по 12-й день инкубации в точках посева по краям внесенного мате­риала. При отсутствии роста в течение 30 дней результаты культивирования считаются отрицательными. В оптимальных условиях первичные культуры многих дерматофитов можно идентифицировать на 7 - 10-й день после посева, но следить за посевами нужно в течение 20 - 30 дней. Первич­ные культуры растут сравнительно медленно, при появлении роста в первичным посеве необходимо произвести отсев от края колонии на свежую дифференциальную среду для по­лучения чистой культуры, которая будет служить материа­лом для идентификации выделенного дерматофита.