Организация работы микологической лаборатории

Устройство и режим работы микологической лаборатории должны обеспечивать предупреждение рассеивания патологического материала в окружающей среде, чтобы избежать заражения, аллергизации и распространения инфекции сре­ди сотрудников и больных.

Лаборатория должна иметь определенный набор поме­щений, включая комнату (или специально оборудованное место) для приема и регистрации анализов, бокс-посевную для посева и работы с культурами, комнату с автоклавами для стерилизации и уничтожения патологического материа­ла и культур, моечную, препараторскую, кладовую, гардероб для одежды, туалет. Пол и стены помещений, где проводится лабораторная диагностика микозов, должен выдерживать мытье дезинфицирующими растворами. Лаборатория уком­плектовывается легко подвергающейся дезинфекции мебе­лью, включая шкафы для чистой лабораторной посуды, реак­тивов, питательных сред; соответствующим оборудованием и инструментами.

Для работы необходимы спиртовка или газовая горелка, микробиологические петли, микологические лопаточки, шпатели, эпиляционные ланцеты, маникюрные кусачки, скальпе­ли, ножницы, ложечки Фолькмана, пипетки разные, пастеров­ские пипетки, иглы препаровальные, стеклянные палочки, шприцы, низкоскоростная центрифуга, аппарат для встря­хивания, чашки Петри, пробирки, стеклянная посуда, ультра­фиолетовая лампа Вуда с фильтром, микроскопы, осветители, термостаты, автоклавы, холодильники, сухожаровые шкафы, бактерицидные лампы.

Для работы с патологическим материалом и культурами грибов лабораторные столы следует покрывать стеклами с частично окрашенной в черный цвет обратной стороной: на черном фоне лучше видны обычно светлые культуры грибов, а также мелкие частицы исследуемого материала. Часть стекла окрашивается в белый цвет, так как на белом фоне хорошо видны оттенки пигмента у исследуемых колоний. Иногда для этих целей под стекла подкладывают листы чер­ной и белой бумаги.

Воздух в лаборатории стерилизуют дезинфицирующими аэрозолями или ультрафиолетовыми лучами. Водопровод и система подачи газа должны быть всегда исправны. Необхо­димо достаточное количество дезинфицирующих средств. Пол, рабочие столы в помещениях, где производится работа с патологическим материалом, ежедневно убираются влажным способом с применением дезинфицирующих средств (5% раствор хлорамина, 5% осветленная хлорная известь). Тер­мостаты еженедельно протирают 0,5% хлорамина; стены об­рабатывают дезрастворами 1 раз в месяц. Стерилизацию по­суды и инструментов горячим воздухом в сухожаровых шка­фах производят при 180 °С в течение 60 мин. Необходимо помнить, что любой изучаемый материал потенциально опа­сен. Поэтому взятие патологического материала следует про­изводить в специальной комнате с помощью инструментария, в халатах и масках. Одежду больного при взятии материа­ла защищают клеенчатой пелериной и салфеткой. Взятие ма­териала с ног производят на специальной скамейке, покры­той клеенкой. Пелерины, салфетки после каждого исполь­зования обеззараживают кипячением в течение 15 мин или погружением в дезинфицирующий раствор (5% раствор хлорамина на3 ч или 5% осветленную хлорную известь на 2 ч). Патологический материал или культуру переносят в специальной таре (металлические или пластмассовые ящики с крышками, биксы), которую внутри и снаружи ежедневно обрабатывают дезинфицирующими растворами.

Все посевы производят вблизи огня спиртовки или газо­вой горелки с обжиганием инструмента и краев пробирки. Засеянные пробирки и другие емкости должны иметь четкие надписи с указанием даты посева, номера анализа, вида и штамма возбудителя.

Загрязненные пипетки, шпатели, предметные и покровные стекла обеззараживают погружением в 5% раствор фенола, 5% раствор лизола на 30 мин или в 5% раствор хлорами­на,5% раствор осветленной хлорной извести на 2 - 3 ч, затем моют. Патологический материал (кусочки тканей, чешуйки кожи, ногтей) и отработанные культуры грибов автоклавируют при 2 атм / 132 / 20 мин, при 1,5 атм / 126 / 30 мин; либо кипятят 1 ч в воде или 30 мин в 1% мыльно-содовом растворе.

 

 

Взятие патологического материала:

Успех лабораторного исследования микозов во многом зависит от правильного взятия патологического материала. Поскольку грибы способны поражать различные органы че­ловека, при подозрении на микоз необходимо исследовать различный патологический материл. В дерматологической практике чаще всего приходится иметь дело с микозами, при которых исследованию на грибы подлежат кожные чешуйки, волосы, ногти. При подозрении на глубокие и системные микозы может возникнуть необходимость лабораторной диа­гностики на грибы мокроты, промывных вод, мочи, фекалий, гноя, отделяемого слизистых оболочек, крови, кусочков орга­нов и биопсированной ткани.

В очагах поражения на коже, из которых предполагается брать патологический материал, за несколько дней или не­дель необходимо прекратить всякое лечение. Следует иметь в виду, что использование слабых дезинфицирующих раство­ров или даже индифферентных средств может помешать ис­следованию. Непосредственно перед забором патологическо­го материала очаг поражения необходимо обработать 96% спиртом или раствором ксилола. Материал лучше всего брать со свежих, но уже полностью развившихся очагов по­ражения. Кожные чешуйки необходимо соскабливать с пе­риферии очагов, грибы здесь встречаются чаще всего как в виде мицелия, так и спор. Кожные чешуйки снимаются скальпелем, корочки - эпиляционным пинцетом. Наряду с чешуйками желательно забирать небольшую часть прилега­ющей к очагу поражения здоровой кожи, так как в этих на внешний вид нормальных участках можно обнаружить боль­шое количество элементов гриба. При дисгидротических вы­сыпаниях для анализа следует использовать покрышки пу­зырьков и крупные, с трудом отделяющиеся чешуйки на гра­нице очагов поражения и здоровой кожи. Поверхностные корочки и чешуйки в центре кольцевидных высыпаний мало пригодны для исследования, так как элементы грибов здесь имеются непостоянно и их бывает трудно отличить от фраг­ментов жирового распада тканей. Скутулы при фавусе удоб­нее брать эпиляционным пинцетом, они очень богаты гриба­ми во всех своих частях. В случаях подозрения на грибко­вое поражение пушковых волос, их необходимо извлекать эпиляционным пинцетом по возможности вместе с чешуй­кой. Грубые роговые массы с подошв срезают скальпелем или лезвием безопасной бритвы.

У больных микозами волосистой части головы поражен­ные волосы извлекают эпиляционным пинцетом. Для исследования необходимо брать короткие, перекрученные, изогну­тые в виде дуги или запятой, а также длинные, но покрытые чехлом в основании, волосы. При подозрении на фавус необ­ходимо помнить о том, что волосы не обламываются, но ста­новятся тусклыми, безжизненными, седоватыми. Там, где обломанные волосы плохо видны невооруженным глазом, нужно пользоваться лупой и собирать с очагов поражения чешуйки, поскольку коротко обломанные волосы могут иметь вид едва заметной черной точки, заложенной в толще роговой чешуйки. Если пораженные волосы имеют вид черных точек, то их извлекают на поверхность кожи или острым концом скальпеля, или препаровальной иглой.

Пораженные волосы, взятые для микроскопического ис­следования, желательно разложить на предметном стекле на фоне черной бумаги. В этом случае они резко отличаются от здоровых волос серым и тусклым цветом.

При взятии материала необходимо исследовать каждый, даже маленький очаг облысения, особенно у взрослых, так как грибковое поражение на голове у них нередко сочетает­ся с мелкими участками рубцовой алопеции.

У больных с инфильтративно-нагноительной формой ми­коза волосистой части головы и области роста бороды и усов (kerion, паразитный сикоз) очаги поражения часто покрыты массивными корками. В этих случаях отдельные поражен­ные волосы выявить трудно, они чаще встречаются в свежих высыпаниях, по краю очагов поражения, в более глубоких от­делах кожи. Нередко они выталкиваются из волосяных фолликулов вместе с гноем при надавливании на очаг пора­жения. Волосы желательно брать вместе с гноем, затем по­местить на чашку Петри, часовое или предметное стекло, и отделить волос от гноя.

Соскобы с поверхностных очагов пораженных ногтевых пластинок делают скальпелем, утолщенные ногтевые пластинки срезают скальпелем или маникюрными кусачками;

подногтевой гиперкератоз можно получить с помощью пре­паровальной иглы. Для взятия материала из глубоких сло­ев через «окошечко» в ногтевой пластинке иногда пользуются бормашиной. При паронихиях необходимо брать гной из-под ногтевых валиков; при отсутствии гноя — соскабливать материал с соприкасающихся поверхностей ногтевой плас­тинки и валиков.

Жидкий патологический материал собирают асептично в стерильную посуду, чешуйки кожи, ногтя и волосы – на листочки простой или мягкой пергаментной бумаги.

Отделяемое со слизистых оболочек для посева берут тампоном из гигроскопической ваты, который затем помеща­ют в сухую стерильную пробирку или пробирку с 2 мл пи­тательной среды (сусло Сабуро). Материал со слизистых оболочек рта и зева берут вначале с внутренней поверхнос­ти щек, неба, затем языка, тщательно протирая тампоном спинку и корень, а в заключение – круговым движением из зева. Для микроскопии соскобы налетов беловато-серовато­го цвета со слизистых оболочек берут ложечкой Фолькмана или предметным стеклом. Материал из влагалища получают из заднего свода; с головки полового члена – из области ве­нечной борозды.

Материал из наружного слухового прохода берут петлей или тампоном, который помещают в пробирку.

При необходимости полученный патологический мате­риал доставляют в лабораторию в специальной таре или металлических биксах. Поступивший в лабораторию материал исследуют в течение 1 ч после взятия при хранении в условиях комнатной температуры или не более чем через 3 ч при хранении в холодильнике при температуре 4 °С.

В запаянных пробирках или пипетках жидкий патологи­ческий материал сохраняется до высыхания довольно долго, грибы в волосах и чешуйках, завернутые в бумажные пакеты (типа аптечных порошков), могут сохраняться месяцы и да­же годы.

Кровь для исследования на грибы берут из локтевой вены в количестве 5 – 10 мл и вносят сразу с колбочку с жидкой питательной средой или равным количеством цитрата натрия.

При необходимости исследования на грибы биопсийного материала его помещают в стерильную чашечку Петри и используют для микроскопии, посевов на питательные среды и приготовления гистологических препаратов.