ЭЛЮЕНТЫ

Растворители разной природы, используемые в ТСХ, различаются по их элюирующему (вытеснительному) действию, и их можно расположить в так называемые элюотропные ряды. Например, элюотропный ряд для силикагеля по мере возрастания элюирующей способности выглядит следующим образом: н-гексан, пентан, циклогексан, четыреххлористый углерод, толуол, хлороформ, дихлорметан, диэтиловый эфир, уксусная кислота, этанол, метанол, пиридин, вода.

Подбор элюента начинают с наименее полярных растворителей. Растворители, применяемые в тонкослойной хроматографии, должны быть чистыми и осушенными. Смеси веществ могут разделяться с помощью одного растворителя, однако обычно применяют системы, состоящие из двух, трех и даже четырех растворителей. Выбор растворителей определяется их элюирующей способностью, которая зависит от полярности растворителя, а также его протонодонорных и протоноакцепторных свойств. Характеристика элюирующей способности наиболее важных для ТСХ растворителей приведена в табл.23. и 24. Для каждой новой пластинки систему растворителей следует готовить заново, так как в ней соотношение компонентов после хроматографирования изменяется.

Таблица 23. Значения силы растворителя для неполярных неподвижных фаз Группа(по Снайдеру) Растворитель Si II Вода     Метанол 2,6   2-Пропанол 3,9 III Тетрагидрофуран 4,5 IV Ацетонитрил 3,2

Существенную роль при разделении веществ с помощью тонкослойной хроматографии играет количество наносимой смеси, оно влияет и на величину R_f и на разрешение пятен. Пробы испытуемых веществ массой от 0,1 до 50 мкг, наносят на пластинку в виде растворов в эфире, хлороформе или другом летучем растворителе. Природа растворителя может влиять на размер пятна наносимой пробы. При нанесении пробы необходимо, чтобы: растворитель легко удалялся со стартовой зоны, и растворимость анализируемых веществ была бы не менее 0,01 г/мл.

Значения силы растворителя Si для полярных неподвижных фаз Группа(по Снайдеру) Растворитель Si I н-Гексан     н-Бутиловый эфир 2,1   Изопропиловый эфир 2,4   Метил-трет-бутиловый эфир 2,7   Диэтиловый эфир 2,8 II 1-Бутанол 3,9   2-Пропанол 3,9   1-Пропанол 4,0   Этанол   4,3   Метанол 5,1 III Тетрагидрофуран 4,0   Пиридин 5,3   Метоксиэтанол   5,5   Диметилформамид 6,4 IV Ледяная уксусная кислота 6,0   Формамид 9,6 V Дихлорметан   3,1   1,2-Дихлорэтан 3,5   VI Этилацетат 4,4   Метилэтилкетон 4,7   Диоксан 4,8   Ацетон   5,1   Ацетонитрил 5,8 VII Толуол   2,4   Нитробензол 4,4 VIII Хлороформ 4,1   Нитрометан   6,0   Вода 10,2

 

 

Rf

 

Важной характеристикой степени разделения определяемых соединений в планарной хромато­графии является величина R (подвижность) — отношение расстоя­ния от центра пятна на пластинке до линии старта (х) к расстоянию (у), пройденному растворителем от линии старта до финиша. Величина R является характеристикой природы определяемого соедине­ния и зависит от сорбента, растворителя, использу­емых для разделения.

Рис. 1. Схема анализа методом ТСХ: 1 - анализи­руемая смесь, 2-4 - стандартные вещества (“сви­детели”)

Метод стандартов

Наиболее общий подход к качественному анализу основан на значениях R_f. Хроматографическая подвижность является чувствительной характеристикой вещества, однако она существенно зависит от условий определения.

Самым надежным является метод свидетелей, когда на стартовую линию рядом с пробой наносятся индивидуальные вещества, соответствующие предполагаемым компонентам смеси. Влияние различных факторов на все вещества будут одинаковым, поэтому совпадение R_f компонента пробы и одного из свидетелей дает основание для отожествления веществ с учетом возможных наложений. Несовпадение R_f интерпретируется более однозначно: оно указывает на отсутствие в пробе соответствующего компонента. На практике стандартное вещество (свидетель) в том же растворителе наносится на стартовую линию вместе с анализируемой пробой и хроматографируется в тех же условиях.