Методика выполнения работы.

Приготовить 2 пробы А и Б. Навески исследуемого продукта взять из расчета, что проба А должна содержать около 15 мг гистидин + аргинин + лизин, проба Б – 15 мг гистидин + аргинина (расчет провести, исходя из содержания белка в продукте и его аминокислотного состава). Навески продукта поместить в коническую колбу на 250 мл, прилить в каждую колбу по 6 мл дистиллированной воды и оставить на 10 минут. В колбу Б внести 0,4 мл пропионового ангидрида и помещают на лабораторный встряхиватель на 15 минут. Далее обработку проб А и Б проводят одновременно.

В обе колбы добавить по 40 мл раствора красителя, встряхивать в течение 90 минут. Содержимое колб отфильтровать через стеклянные фильтры, отобрать пипеткой по 1 мл каждого фильтрата и внести в мерные цилиндры. Довести объем в цилиндрах до 75 мл дистиллированной водой и тщательно перемешать. Полученные растворы проб А и Б колориметрировать на спектрофотометре, при тех же условиях, что стандартные растворы для построения градуировочного графика. Для последующей обработки результатов используют только данные, находящиеся в приделах от 0,2 до 0,3 единицы оптической плотности, при этом разность между показателями А и Б не должна превышать 0,05 единицы оптической плотности.

На основании полученных для обеих проб величин оптической плотности по градуировочному графику устанавливают количество несвязанного красителя в ммолях (С_А и С_Б).

Массовую долю доступного лизина (х) в мг/100г продукта вычислить по формуле:

Х= , где

С – исходное содержание красителя в рабочем растворе (С = 0,0784 ммоль)

С_А – содержание несвязанного красителя в пробе А, ммоль;

С_Б – содержание несвязанного красителя в пробе Б, ммоль;

_А – масса навески в пробе А, г;

- масса навески в пробе Б, г;

М – молекулярная масса лизина, (М=146,19);

2 – коэффициент, учитывающий, что 1 молекула «Оранж Ж» связывает 2 молекулы лизина.