Лабораторная диагностика

Методы диагностики:

1. Микробиологический

2. Микроскопический

3. Биологический (реакция нейтрализации токсина)
Микробиологический метод диагностики

Основной принцип - создание бескислородных (анаэробных) условий, для чего применяется комплекс технических приемов и бактериологических методов, направленных на защиту микроорганизмов от токсического действия кислорода на всех этапах работы с анаэробными бактериями

Материал для исследования: содержимое при пункции или вскрытии абсцессов, пункции полостей и органов, отделяемое из глубоких отделов ран, кровь.

Оборудование для культивирования анаэробных бактерий.

а) микроанаэростаты для хранения питательных сред и культивирования посевов;

б) вакуумный насос, создающий разрежение - 1 атм;

в) газ, свободный от примеси кислорода. Лучшей для культивирования анаэробов
является трехкомпонентная газовая смесь (80% азота, 10% водорода и 10% двуокиси
углерода), но м.б использован чистый азот, аргон, гелий.

Вакуумный насос и баллон с газом с помощью резиновых шлангов через тройник соединяют с микроанаэростатом. Цилиндр микроанаэростата закрывают крышкой, завинчивают крепежный винт и откачивают воздух до отметки на вакууме - 1атм: Вакуумирование проводят медленно, чтобы предотвратить вспенивание жидкости в пробирках и смачивание пробок. Перекрывают зажимом шланг, ведущий от тройника к вакуумному насосу и открывают кран для заполнения микроанаэростата бескислородным газом. Такую процедуру повторяют трижды для удаления следовых количеств кислорода. Микроанаэростат закрывают и отсоединяют от системы. При использова нии природного газа выброс газа из микроанаэростата во внешнюю среду осуществляется при условии соблюдения правил техники безопасности; после заполнения микроанаэростата природный газ, оставшийся в шлангах, также откачивается и только после этого отключают вакуумный насос.

Более удобны для работы с анаэробами системы Gas Pak, производимые многими зарубежными фирмами. Это герметически закрывающийся сосуд, внутрь которого помещается поглотитель кислорода и генератор углекислого газа и водорода. Для контроля анаэробиоза в анаэростате применяются специальные среды с красителями, культуру синегнойной палочки, которые при наличии кислорода изменяют свой цвет.

Другие условия создания анаэробных условий:

• Регенерация питательной среды: кипячение среды с последующим быстрым ее
охлаждением.

• Культивирование в высоком столбике агара с герметизацией пробки вазелином,
парафином.

• Добавление в питательные среды редуцирующих веществ- мясо, печень, кровь..
Для культивирования в анаэробных условиях используют:

а) свежеразлитые (в течение 2 часов после приготовления) или прередуцированные (не
менее суток выдержанные в анаэростате) чашки с анаэробным гемагаром (рец. 1 или 2).
Использование этих сред позволяет получить рост не только всех групп клинически
значимых анаэробов, но и рост факультативно - анаэробных бактерий;

б) селективные среды - для выделения только анаэробных бактерий. Для этого в
анаэробный гемагар добавляют один из следующих антибиотиков: неомицин, канамицин
(по 75-80 мкг/мл), гентамицин (50 мкг/мл) или налидик-совую кислоту (невиграмон,
неграм - 40 мкг/мл). Вместо добавления антибиотиков в среду на засеянную поверхность

анаэробного гемагара можно накладывать по 2 - 4 диска с канамицином (1000 мкг в диске). В зоне задержки роста факультативных анаэробов вокруг дисков часто отмечается рост чистой культуры облигатно анаэробных бактерий. Однако все эти антибактериальные препараты могут подавлять рост отдельных видов анаэробов. Поэтому посев на не­селективную среду обязателен;

в) обогащенную питательную среду для контроля стерильности (прокипяченную 5 мин
и быстро остуженную)

г) на общепринятые элективные и селективные среды - для выделения анаэробных
бактерий.

Каплю жидкого патологического материала помещают на поверхность агара и рассеивают методом " истощения", несколько раз прожигая петлю с целью получения изолированных колоний. Патологический материал с тампона (используют всю поверхность тампона) также наносят на небольшой участок и рассеивают методом "истощения". После этого тампон вносят в жидкую среду и вращают пробирки между ладонями. Фрагменты мягких тканей заливают небольшим количеством жидкой среды для анаэробов или 10%-ной лизированной кровью в физ. р-ре и измельчают в стерильной ступке. Костные фрагменты погружают в жидкую среду, встряхивают пробирку и высевают петлей на плотную питательную среду. Оставшийся материал заливают жидкой средой для анаэробов в соотношении 1:10. Немедленно после посева пробирки и чашки (крышками вверх) укладывают в анаэростат. Туда же ставят пробирку для контроля анаэробиоза. Проводят трехкратную замену газа в микроанаэростате, помещают в термостат и инкубируют 2-7 суток при 37 град.

Наиболее употребительные питательные среды:

Среда Кита-Тароцци

Среда Вильсона-Блера

Анаэробный гемагар на основе эритрит - агара.

Анаэробный гемагар на основе сухой питательной среды для контроля стерильности.

Питательная среда для контроля стерильности