Завдання

Дата добавления: 2015-08-29; просмотров: 463

Нефелометрический метод. Основан на свойстве белка давать с сульфосалицилой кислотой помутнение, интенсивность которого пропорциональна концентрации белка.

В градуированную пробирку наливают 1,25 мл профильтрованной мочи и добавляют до объема 5 мл 3% раствор сульфосалициловой кислоты тщательно размешивают. Через 5 мин измеряют экстинкцию на ФЭК-М (или любом другом фотометре) при длине волны 590—650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете с толщиной слоя 0,5 см. Для контроля используют 1,25 мл профильтрованной мочи той же, к которой до объема 5 мл доливают изотонический раствор хлорида натрия.

Предварительно строят калибровочную кривую зависимости величины экстинции от концентрации белка. Для приготовлений различных концентраций белка используют стандартный раствор альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки). Заполняют рабочую таблицу.

Биуретовый метод. Основан на способности белка давать с сульфатом меди и едкой щелочью биуретовый комплекс фиолетового цвета, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна количеству белка. К 2 мл мочи добавляют 2 мл раствора треххлоруксусной кислоты для осаждения белка и центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают. К осадку белку) добавляют 4 мл 3% раствора едкой щелочи и 0,1 мл 20% раствора сульфата меди, размешивают и центрифугируют. Надосадочную жидкость фиолетового цвета фотометрируют на ФЭК-М при зеленом фильтре. Экстинкцию определяют по таблице, полученной опытным путем. Калибровочную кривую строят, как в предыдущем методе.

Ортостатическая проба

Показана при подозрении на ортостатическую протеинурию и при нефроптозе.

После полного опорожнения мочевого пузыря исследуемый сохраняет горизонтальное положение в течение 2 ч. Затем, не вставая, сдает одну (контрольную) порцию мочи. В течение последующих 2 ч испытуемый непрерывно ходит, сохраняя положение максимального поясничного лордо­за (держит палку за поясницей), после чего сдает вторую порцию мочи. В обеих порциях мочи определяют концентрацию белка и содержание белка в граммах, а при нефроптозе — количество эритроцитов в 1 мл.

При ортостатической протеинурии во второй порции обна­руживается протеинурия или увеличенное в 2—3 раза исходное содержание белка в граммах. Появление гематурии нередко в сочетании со следовой протеинурией во второй порции ха­рактерно для нефроптоза.

Следует иметь в виду, что ортостатическая проба может быть положительна при хроническом нефрите, когда нередко наблюдается умеренное увеличение протеинурии и гематурии во второй порции мочи.

Определение уропротеинов Бенс-Джонса

Белки Бенс-Джонса—термолабильные низкомолекулярные парапротеины (относительная молекулярная масса 20 000-45 000), обнаруживаемые главным образом при миеломной болезни и макроглобулинемии Вальденстрема. Они представляют собой легкие L-цепи иммуноглобулинов. Благодаря небольшой моле­кулярной массе L -цепи легко проходят из крови через непо­врежденный почечный фильтр в мочу и могут быть определены там с помощьюреакции термопреципитации.

Определение проводят следующим образом. К 10 мл мочи добавляют 3—4 капли 10% раствора уксусной кислоты и 2 мл насыщенного раствора хлорида натрия, осторожно нагревают на водяной бане, постепенно по­вышая температуру. Если в моче имеются белки Бенс-Джонса, то при температуре 45- 60°С появляется диффузное помутнение или выпадает плот­ный белый осадок. При дальнейшем нагреваниидо кипения осадок раство­ряется, а при охлаждении вновь появляется.

Эта проба недостаточно чувствительна и должна проверять­ся методами электрофореза и иммуноэлектрофореза.

Определение гемоглобина. При массивном внутрисосудистом гемолизе (инфекционном, иммунном, генетическом) свободный гемоглобин фильтруется почками, проникая из крови в мочу. Массивная гемоглобинурия, повреждая извитые канальцы, может привести к острой почечной недостаточности.

Качественной реакцией на гемоглобин служитпроба с сульфатом ам­мония. В 5 мл мочи растворяют 2,8 г кристаллического сульфата аммония и фильтруют. Нормализация цвета мочи после фильтрации говорит о гемоглобинурии, так как гемоглобин осаждается сульфатом аммония в отличие от миоглобина.

Проба с сульфатом аммония недостаточно чувствительная,может давать ложно отрицательные результаты.

Важным косвенным признаком гемоглобинурии считается обнаужение в моче гемосидерина. Гемосидеринурия обусловлена реабсорбцией гемоглобина из первичной мочи клетками почечного эпителия и его расщеплением.

15 мл мочи центрифугируют. К осадку добавляют несколько капель раствора хлористоводородной кислоты и 2—5% раствора ферроцианида калия (желтой кровяной соли). Делают тонкие мазки на предметных стеклах и микроскопируют. Через 2—5 мин гемосидерин определяется в виде сине-зеленых гранул, локализованных в эпителии, реже внеклеточно.

Определение миоглобина. Миоглобинурия осложняет рабдомиолиз (травматический, ишемический, токсический, генетический). Миоглобин — низкомолекулярный белок—не задерживается гломерулярным фильтром. Высокая миоглобинурия, нарушая функции почечных канальцев, часто индуцирует острую почечную недостаточность. При миоглобинурии проба с сульфатом аммония – отрицательна: после добавления реактива сохраняется красно-коричневое окрашивание мочи.

Более точным диагностическим методом, разграничивающим гемоглобинурию от миоглобинурии, служит электрофорез белков и на бумаге и особенно иммуноэлектрофорез в агаровом геле, выявляющий следовые концентрации гемоглобина и мио­глобина в моче.

Методы электрофореза на бумаге и в полиакриламидном геле, гельхроматография, иммуноэлектрофорез используются для установления качественного состава белков мочи по их молекулярной массе, иммунохимическим свойствам, заряду .